植物培养技术

毕业论文(设计)

题 目 姓 名 专 业 指导教师

浅谈植物细胞的悬浮培养技术 姚虎 学号 014010210118 生物工程（070404） 王大红 职称 讲师 中国·武汉 二○一二年四月

目录

摘 要 ........................................................................ 3 关键词 ....................................................................... 3 Abstract ....................................................................... 3 Key words ..................................................................... 3 前言 ......................................................................... 4 1.细胞悬浮培养的定义 .........

细胞工程

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细胞工程Cell Engineering邢朝斌 科技楼0510 Tel:3726238 E-mail:xingzhb@

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第四章 植物组织器官培养技术

细胞工程——邢朝斌第四章 植物组织器官培养技术

第一节 植物脱毒及快速繁殖技术第二节 花药及小孢子培养 第三节 植物胚胎培养

第四节 植物的离体受精第五节 组织培养常见问题及对策

细胞工程

第一节 植物脱毒及快速繁殖技术

细胞工程——邢朝斌第四章 植物组织器官培养技术

一、基本概念 离体无性繁殖(propagation in vitro) : 利用离体培养技术，将来自优良植株的茎 尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细 胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传 性状一致个体的方法。也称之为微繁、快 速繁殖。

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第一节 植物脱毒及快速繁殖技术

细胞工程——邢朝斌第四章 植物组织器官培养技术

一、基本概念 植物脱毒(virus elimination):利用植 物组织培养技术，脱除植物细胞中浸染的 病毒，生产健康的繁殖材料。 体细胞胚或胚状体：离体培养下没有经过 受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成 的胚的类似物

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第一节 植物脱毒及快速繁殖技术

细胞工程——邢朝斌第四章 植物组织器官培养技术

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

T

植物细胞组织培养技术

实验指导书

中国计量学院生命科学学院

二零零六年七月

《植物细胞组织培养》实验指导

目 录

实验一、植物组织培养培养基母液的配制 实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养

1

实验一 组织培养基母液的配制

一、 仪器及药品

冰箱、天平（0.0001g）

容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺

标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水

二、方法和步骤：

按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：

大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用

植物组织培养:指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖，发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术。也称为离体培养。

外植体:凡是用于离体培养的细胞、组织或器官统称为外植体。 组织培养六要素: 无菌条件 外植体 人工培养基

人工条件:温度、光强、光照时间

细胞全能性:增殖、分化、发育成完整植株 培养容器:能进行气体交换 培养材料类型:

1. 组织培养:指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、薄壁组织等）或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养，是狭义的组织培养。 2. 器官培养:植物的六大器官的无菌培养

3. 胚胎培养:幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房的无菌培养

4. 细胞培养:指对单个细胞或较小细胞团的离体无菌培养，获得单细胞无性繁殖系。 5. 原生质体培养:指以除去细胞壁的细胞（原生质体）为外植体的离体无菌培养。 6. 其他:次生代谢物生产、脱毒培养、人工种子等。 按照培养过程分为:初代培养和继代培养 按照培养基类型分为:液体培养和固体培养

按照培养目的分:愈伤组织培养、分化培养和生根培养 主要研究任务:

细胞、组织、器官等在离体培养下的: 营养条件、

植物组织培养技术

考试复习题

一、填空题

1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性 。

2、根据培养的外植体材料不同，可将植物组织培养分为以下几种类型：愈伤组织培养、器官培养、胚培养 、 细胞培养 、原生质体培养 、遗传转化。

3、植物组织培养实验室一般划分为洗涤室、培养基配置室 、 缓冲室、无菌接种室、培养室、观察室、驯化室等分室，其中植物组织培养实验室对无菌条件要求最严格的区域是无菌接种室。

4、培养基成分主要包 水分 、 无机盐类 、有机营养成、植物生长调节物质、天然物质 、 pH 、 凝固剂 。

5、目前应用最广泛的组培基本培养基是 MS培养基。 6、培养基最常用的碳源是糖类物质，使用浓度在1%-5% 常用 3%。 7、培养基中加入活性炭的目的：减少外植体的褐变。 8、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高则有利于 根 的形成；其比值低则有利于芽的形成。

9、一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象称为\脱分化__\

10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行(高压蒸汽 )灭菌，而要进行过滤方法灭菌。

11、确定花粉发育时期最简捷有效的方法是压片镜

实验11 植物组织培养

1．植物组织培养的原理是植物细胞的全能性。

2．植物组织培养的各个步骤应严格执行无菌操作技术，所以在生产时为了防止污染，植物组织一般要先进行消毒，先用70%的酒精浸泡，再用5%的次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗。各种器皿和培养基等通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。

3．与培养微生物的LB培养基相比，植物组织培养的MS培养基中要添加生长素和细胞分裂素类似物。4．在菊花的组织培养过程中，首先将消毒后的菊花茎的切段接种在加有适当配比生长调节剂的MS培养基上，给予一定的温度和光照，使其先脱分化形成愈伤组织，再将其转移至含有较多细胞分裂素类似物——苄基腺嘌呤（简称BA，需用HCl溶解）的培养基上，诱导其长出丛状苗。将它分株后，再移入含有较多生长素类似物——萘乙酸（简称NAA，需用NaOH溶解）的培养基上，使其生根。

5．通过植物组织培养产生的幼苗需要移栽至草炭土或蛭石中，给予适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件，锻炼一段时间，最后再定植到土壤中。

植物的克隆

（1）植物克隆的理论基础是植物细胞的全能性，技术基础是植物组织培养。

（2）在植物组织培养过程中，将离体的植物组织或细胞放在加有适当配比生长调节剂的培养基上进行培养，它会先发生脱

泰山职业技术学院

毕业设计（论文） 题 目： 植物组织培养新技术研究进展 系 部： 生物技术工程系 专 业： 园林技术专业 学 号： 201107010115 学生姓名： 刘兴 指导教师： 职 称： 二〇一四年六月二十日

目 录

1.理论依据 1

1.1组织培养 1

1.2细胞全能型 1

1.3组织培养重要性 2

2.园林植物组织培养基本实验条件 2

2.1实验室的基本组成与设计 2

2.1.1实验室的设计 2

2.1.2实验室的基本组成 2

2.1.

本章主要内容

? 商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备 ? 培养基及其配制 ? 外植体的选择与培养 ? 试管苗的驯化与移载

第一节 商业性组织培养实验室和小工厂

的设计与主要设备

? 培养皿的清洗；

? 培养基的配制、分装和高压灭菌； ? 无菌操作——材料的表面灭菌和接种； ? 将培养物放到培养室培养；

? 试管苗的驯化、移栽和初期管理。

(一)、洗涤室(cleaning room)

? 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。 ? 室内配备：

? 大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。 ? 备有塑料筐，用于运输培养器皿。

? 备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。

(二)、准备室(repairing room)

? 完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。准备室要求明亮、通风。 ? 如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与

培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。

(三)、缓冲室

? 进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。 ? 应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。控制无菌室及培养室的配电