细胞糖原染色

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

糖原染色

高碘酸-Schiff（Periodic acid Schiff, PAS）染色法 【试剂配制】

（1）高碘酸氧化液：

高碘酸 1g 蒸馏水 100ml。 （2）Schiff液：

碱性品红 1g 1N盐酸 20ml 亚硫酸氢钠 2g 活性炭 2g 蒸馏水 200ml

将1g碱性品红热溶于200ml煮沸水中，搅拌5分钟，冷至50℃时过滤，在滤液中加20ml 1当量盐酸，冷至25℃时加1g亚硫酸氢钠（sodiumbisulfite）。将该液存放在冷暗处14～24小时，然后加入2g活性炭，摇动1分钟过滤，滤后保存在0～4℃冷暗处，在室温下使用。

注意：如碱性品红为结晶，可预先研成粉末，使易溶解。亚硫酸氢钠须有浓厚的气味，否则效

细胞免疫荧光染色

1. 盖玻片处理：用前1天用纱布擦净灭菌，放入6孔板。

2. 接种细胞：较低密度为适宜，约2000－10000个/孔（根据细胞生长状态决定，常用

5000个/孔），2ml（浓度为2500/ml）

3. 24h后细胞贴壁，根据需要同步16－18h，干预处理，细胞融合60－70％时染色最

佳

4. 37度PBS洗涤，3ml/孔，贴边加（可将6孔板倾斜，加完样在放正以防冲掉细胞，

0.5min。室温PBS也可，但4度禁止，否则细胞易皱缩。

5. 固定：4％多聚甲醛(1ml)，先常温稳定5min，然后4度，10min，（可放在饭盒内）。 6. 吸掉多聚甲醛，迅速加PBS 5ml/孔，洗涤5min×3次，镜下观察，细胞形态如前。 7. 透化：0.1％－4％triton×－100，1ml/孔，室温透化5min（triton是去污剂，目的是

将脂质成分破坏，如细胞膜、核膜等，故不影响实验结果，可不用洗涤）

8. 5％BSA（滤过）室温封闭至少20min（可配制含5％BSA和0.2％triton的混合液，将

两步合成一步）风干

9. 用5％BSA将一抗1：50或1：100（常用）稀释至EP管 200ul/玻片 10. 将纱布垫在饭盒中，去离子水润湿纱

一、填空题

1.真核细胞除了 和 外，都含有细胞核。 2.染色体的四级结构分别是： 、 、 、 。 3.1831年布朗在 中发现了细胞核和核仁。

4.着丝粒DNA具有 性，并为 所染色。 5. 是第一个被发现的分子伴侣，时值1978年。

6.核质蛋白协助组蛋白与DNA形成正常的核小体，机理主要是降低 ，从而阻止了错误的装配。

7.亮氨酸拉链的形成是靠 。

8.就目前所知，中度重复序列中，除了 外，都没有蛋白质产物。 9.保证染色体进行稳定复制和遗传的三个功能序列分别是： 、 、 。

10.组蛋白带 电荷，富含 氨基酸。 11.成熟的鸟类红细胞中， 被H5所取代。

12.精细胞的细胞核中没有组蛋白，但由

实验六 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备

实验目的

1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。 2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。 实验用品

1、器材：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（附照相装置）、隔水式恒温培养箱、干燥箱、水平式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸气消毒锅、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、10ml培养瓶（可用环磷酰胺药瓶代）、2ml注射器、吸管、滴管、试管架、三角烧瓶、染色缸、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷盘、铝制饭盒、消毒用酒精棉球与碘酒棉球等。

2、材料：人外周血

3、试剂：RPMI l640培养液（含10~20％小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5％NaHCO3溶液、1mol／L HCl、三蒸水或双蒸水、0.075 mol／L KCl、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液，pH6.8的磷酸缓冲液。

实验原理

据测定，健康成年人体内的淋巴细胞总数约有500×109，其中约有2％在外周血中循环。在外周血的淋巴细胞中，以小淋巴细胞为主（每毫升血中的含量可达1~3×106个）。在通常情况下，它们都处于间期的G0或G1期，所以很难见到正在分裂的淋巴细

肝糖原的提取和鉴定 一、实验目的

1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。 2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。 二、实验原理 三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。 2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。 5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。 （二）、鉴定

1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶

肝糖原的提取和鉴定 一、实验目的

1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。 2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。 二、实验原理 三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。 2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。 5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。 （二）、鉴定

1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶

1在细胞有丝分裂中微管的作用是染色体列队、分离（核分裂）微丝的作用是胞质分裂 2、动物细胞的有丝分裂器有动粒微管，极性微管，纺锤体微管，中心体微管四种类型的微管 3、最重要的人工细胞周期同步化的方法有DNA合成阻断法阻断法和中期阻断阻断法 4在细胞周期调控中，调控细胞越过G1/S期限制点的CDK与周期蛋白的复合物称为MPF。MPF由两个亚单位组成，即Cdc2周期蛋白。当两者结合后表现出蛋白激酶活性，其中Cdc2为催化亚单位，周期蛋白为调节亚单位。 5、用DNA合成阻断法获得同化细胞时，常用的阻断剂是 TdR，羟基脲。 6、肝细胞和肌细胞属于不同细胞周期类型，肝细胞在受到损伤情况下能进行分裂，而肌细胞却不行，由此可判断 肝细胞属于休眠细胞（静止期细胞），而肌细胞属于终端分化细胞。 7、根据染色体的行为变化，人为地将有丝分裂划分为 前期，前中期，中期，后期，末期，胞质分裂期 等六个时期 20 × 25

细胞周期：连续分裂的细胞，从上一次有丝分裂结束开始到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过 程中，细胞遗传物质复制，各组分加倍，平均分配到两个子细胞中。 2、细胞增殖 ：物质准备和细胞分裂是一个连续的过程 细胞周期蛋白：与细胞周期调控

1在细胞有丝分裂中微管的作用是染色体列队、分离（核分裂）微丝的作用是胞质分裂 2、动物细胞的有丝分裂器有动粒微管，极性微管，纺锤体微管，中心体微管四种类型的微管 3、最重要的人工细胞周期同步化的方法有DNA合成阻断法阻断法和中期阻断阻断法 4在细胞周期调控中，调控细胞越过G1/S期限制点的CDK与周期蛋白的复合物称为MPF。MPF由两个亚单位组成，即Cdc2周期蛋白。当两者结合后表现出蛋白激酶活性，其中Cdc2为催化亚单位，周期蛋白为调节亚单位。 5、用DNA合成阻断法获得同化细胞时，常用的阻断剂是 TdR，羟基脲。 6、肝细胞和肌细胞属于不同细胞周期类型，肝细胞在受到损伤情况下能进行分裂，而肌细胞却不行，由此可判断 肝细胞属于休眠细胞（静止期细胞），而肌细胞属于终端分化细胞。 7、根据染色体的行为变化，人为地将有丝分裂划分为 前期，前中期，中期，后期，末期，胞质分裂期 等六个时期 20 × 25

细胞周期：连续分裂的细胞，从上一次有丝分裂结束开始到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过 程中，细胞遗传物质复制，各组分加倍，平均分配到两个子细胞中。 2、细胞增殖 ：物质准备和细胞分裂是一个连续的过程 细胞周期蛋白：与细胞周期调控

甲壳素和壳聚糖之所以具有重要的理论研究意义和商业价值，在于其分子结构和组成的独特性，它是自然界唯一的碱性多糖，是地球上数量最大的含氮有机化合物。甲壳素及其衍生物不但具有良好的生物相容性、低毒和生物降解性，还具有许多生物医学功能和药物作用，壳聚糖被誉为人体所需的第六大生命要素。许多甲壳素及其衍生物产品业已商业化，关于甲壳素／壳聚糖的国际会议每两年召开一次，关于甲壳素的国际性学术专刊“Advance in Chitin Science”也于上世纪九十年代创刊。甲壳素及其衍生物已经在生命科学、功能材料等领域形成了新的研究和开发热点。甲壳素和壳聚糖具有较复杂的双螺旋结构，螺距为0．515nm，一

个螺旋平面由6个糖残基组成。甲壳素的结构单元是甲壳二糖，壳聚 糖的结构单元是壳二糖。甲壳素大分子链上分布着许多羟基，N．乙酰 氨基和氨基，它们形成各种分子内和分子问的氢键。甲壳素的结构由 于氢键类型不同而有三种结晶体：a一甲壳素，由两条反向平行的糖 链组成，通常与矿物质沉积在一起形成坚硬的外壳，如虾蟹的外壳； B一甲壳素由两条同向平行的糖链组成；Y一甲壳素由三条糖链组成， 两条同向一条反向。B和Y一甲壳素与胶原蛋白相联结，表现出一定 的硬度、柔韧性和流动性，