空气培养方法及注意事项

一、使用前检查

打开气瓶阀开关，观察高压表，要求气瓶内空气压力为27～30MPa。如气瓶内气压不足，应到专业充气站充至规定的压力。

1min内表示压力下降不大于2MPa，表明系统气密良好。此过程中供气阀和旁通阀均应处于关闭状态。

排气，观察压力表指针的下降，当压力降至5～6MPa时，报警器应发出哨笛报警信号。

打开瓶头阀的情况下深呼吸数次，感到吸气困难，证明全面罩气密性良好。

供气阀，深吸一口气，供气阀“啪”的一声即打开供气。深呼吸几次检查供气阀性能，吸气和呼气都应舒畅无不舒适感觉。在这个过程中，供气阀应随佩戴人员的呼吸自由地供气和停气，即在吸气时供气，在呼气和屏住呼吸时停止供气，以保证压缩空气的有效利用。关闭供气阀开关，按下旁通阀开关，面罩内有股气流持续供气，供气阀开关关闭后持续气流终止，证明供气阀和放气阀工作正常。

连续的气流流出，然后关闭。

①背带和全面罩头带完全放松，②气瓶正确定位并牢靠地固定在背托上，③高压管路和中压管路无扭结或其他损坏，④全面罩的面窗应清洁明亮。⑤接通快速接头，打开气阀开关。

二、使用方法

1.将空气呼吸器气瓶瓶底向上背在肩上。

2.将大拇指插入肩带调节带的扣中向下拉，调节到背负舒服为宜。

3.插上塑料快速插口，腰带系紧度以舒适和背托不

细胞冷冻保存方法、注意事项

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。

2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，

如Sigma D-2650)，以5~10 ml 小体积分装，4 oC 避光保存，勿作多次解冻。Glycerol 亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 4、冷冻保存之细胞浓度：

（1）normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 。

（2）hybridoma: 1~3 x 106 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。

（3）adherent tumor lines: 5~7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cell

ptotocol是这样的，请看哪里不妥： 蛋白银染步骤 步骤 溶液 时间 固定 甲醇 100ml 冰醋酸 25ml

加双蒸水至250ml 30min 冲洗 双蒸水 3次 敏化 甲醇 75ml

戊二醛（25%w/） 1.25ml 硫代硫酸钠(5%w/) 10ml 醋酸钠（17g）

加双蒸水至250ml 30min 冲洗 双蒸水 3次

银反应 硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml 甲醛(37%w/) 0.1ml

加双蒸水至250ml 20min 冲洗 双蒸水 2次 显色 碳酸钠(6.25g) 甲醛(37%w/) 0.05ml 加双蒸水至250ml 2-5min

终止 EDTA-Na22H2O(3.65g) 加双蒸水至250ml 10min 冲洗 双蒸水 3次

建议使用silia的方法！！ 简单，快！

本人的银染方法：

1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟； 2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟； 3. 预处理：0.02％ Na2S2O3 处理一分钟； 4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；

5. 染色：0.8ml 20％

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加双蒸水至250ml 30min 冲洗 双蒸水 3次 敏化 甲醇 75ml

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本人的银染方法：

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5. 染色：0.8ml 20％

柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法(强烈推荐)

1.适用范围：适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠

2.仪器设备：市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。 3.所需试剂：0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.1 4.操作步骤：

(1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。 (3)按有关试剂盒的操作步骤执行。 5.注意事项：

(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。 (2)必

冰淇淋制作方法及注意事项

盛夏来袭，吃点冰淇淋来解暑，这是最惬意不过的事了。但对于文艺又讲究的吃货们来说，自己做冰淇淋，就又添了一份情趣。的确，近年来冰淇淋DIY风确实很火，冰淇淋机也成为了新一代的消暑神器。但是，在家怎么才能做出美味又健康的冰淇淋呢？

其实，如果家里有台冰淇淋机，就算没有经验也是会做的。特别是目前市场上有些小型冰淇淋机，通过对技术的创新改进，无需冰箱的协助也能制作完成。像蜜多冰淇淋机这个牌子，就是全球唯一应用TCL智能致冷技术的冰淇淋机产品，能够实现同步搅拌致冷。蜜多的生产公司富信是国内半导体热电致冷领域中的龙头企业，在半导体致冷行业的技术储备以及应用经验都是世界独一无二的，能够把世界尖端技术应用在冰淇淋机产品上也不足为怪了。

言归正传，下面就以制作巧克力冰淇淋为例介绍冰淇淋的制作方法以及相关注意事项。

一、冰淇淋的制作步骤

1.准备材料：

主料：纯牛奶250ml，淡奶油250ml，蛋黄1个，白糖50g，黑巧克力50g

辅料：可可粉5g

2.冰淇淋的内桶用厚的保鲜袋或者塑料袋装好，放进冰箱冷冻室冷冻15个小时以上；

3.白糖和蛋黄混合，搅打至蛋黄发白；

4.加入可可粉，搅拌均匀；

5.小奶锅里倒入牛奶，加入黑巧克力；

6.小火加热，边加热边搅拌，至

细胞培养

相关疾病：

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?

早走早脱身，从此专注黑生物

1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。

3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。

5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。

6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

非科班出身经验分享

1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。

2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。

3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。

5.

第一节 概述

由于电子束的穿透能力比较低（散射能力强），因此用于TEM分析的样品厚度要非常薄，根据样品的原子序数大小不同，一般在5～500nm之间。要制备这样薄的样品必须通过一些特殊的方法。

第二节 复型技术

衬度：眼睛能观察到的或者其它媒介能记录到的光强度或感光度的差异； ? 质厚衬度就是样品中不同部位由于原子序数不同或者密度不同、样品厚度不同，入射电子被散射后能通过物镜光阑参与成像的电子数量不同，从而在图像上体现出的强度的差别。

?

2.1 影响质厚衬度的因素：

与原子序数的关系：物质的原子序数越大，散射电子的能力越强，在明场像（物镜光阑只允许散射角小的电子通过）中参与成像的电子越少，图像上相应位置越暗。

? 与试样厚度的关系：设试样上相邻两点的物质种类和结构完全相同，只是电子穿越的厚度不同，则在明场像中，暗的部位对应的试样厚，亮的部位对应的试样薄。

? 与物质密度的关系：试样中不同的物质或者不同的聚集状态，其密度一般不同，也可形成图像的反差，但这种反差一般比较弱。

?

2.2 复型技术

复型就是表面形貌的复制（其原理与侦破案件时用的石膏复制罪犯鞋底花纹相似）。通过复型制备出来的样品是真实样品表面形貌组织结构细节的薄

D S C的操作方法及注意

事项

Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

DSC的操作方法及注意事项

一、样品制备

制样：取3-10mg样品，将样品剪成尺寸较小的块状或其他形状，备用。打开工具盒，用镊子取一个坩埚（切记不要用手触摸），用天平称量坩埚的质量，清除坩埚质量（清零）后取出。再将样品放入坩埚中，再次称量，记录样品的质量。将其放在制样器的托盘上，再用镊子取出坩埚盖，顶部置于绿色橡胶垫上，用细针在顶部打一个孔，盖在坩埚上（盖与坩埚要很好吻合），放入DSC制样器制样，压样2次。用镊子夹起DSC样品池的炉盖，将制好的样品用镊子放入左侧样品池的环形区域内（铝锅底部的小点）卡住，用镊子将炉盖盖好。

二、操作步骤

1、首先观察高压表，为0，打开氮气瓶钢瓶开关，使高压表指针大于0；若初始高压表并不为0，钢瓶瓶阀能轻松转动，说明钢瓶开关已打开，若不能轻松转动，需拧开钢瓶开关（朝标记开/Open的方向转动）。后转动低压表的压力调节螺杆，使低压表读数大于（如下图(c)所示）、打开DSC背部主机电源（DSC主机显示灯为红灯闪烁）、调节DSC通N2流量计示数在50mL/min（如下图(d)所示）、打开电脑（密码在主机的标签

底盘装甲施工方法及注意事项等

一、 准备工作：

1、用举升机提升车辆，拆除轮胎、挡泥塑料板。

2、用高压喷枪将需喷涤的部位彻底清洗干净（建议使用洗衣粉溶液进行清洗）。如有锈皮等，则需铲除，砂光，达到无尘、无油。 3、清洗干净后，用高压喷枪将水渍彻底吹干。 4、无需喷涂的部位须用纸严密覆盖、贴紧。 二、 打操作方法：

1、使用产品前，应上下摇动产品，使罐内物料充分混合均匀。 2、连接压缩机，调节气压在≥0.5MPa，然后距喷涂部位约25CM，从喷涂部位的起始位置溥溥地向喷涂部位终点位置连续喷涂第一遍，待产品表干后再从喷涂部位起始位置溥溥地向喷涂部位终点位置连续喷涂第二遍，如此反复操作至所需产品用量。 三、 注意事项：

1、进行水性底盘装甲施工前，必须对喷涂部位进行严格的清洗工作；若因操作不严格而导致喷涂部位还残留着灰尘、油迹等，将会出现产品脱落现象。

2、进行油性底盘装甲施工前，喷涂部位清洗工作可适当放松，但应保证无锈、无沙尘、无水，否则将会导致产品脱落现象。

3、进行底盘装甲喷涂施工时，请勿一次性喷涂过厚，以免产生流滴和难干等不良现象。

4、新车进行油性底盘装甲施工时，应先观察喷涂部位是否存有白色或透明的防锈胶或漆类物质（此为新