细胞骨架染色

第七章 细胞骨架

第七章 细胞骨架

一、填空题

A-七-1. 细胞骨架是指存在于真核细胞中的蛋白纤维网架体系，狭义的骨架系统主要包括 微丝 、 微管 和 中间丝 。

A-七-2. 构成微管的蛋白有两类： α微管蛋白 和 β微管蛋白 。

A-七-3. 微管在细胞中有三种存在形式：单管、 二联管 和 三联管 ，其中主要分布在纤毛和鞭毛杆状部位的是 二联管 。

A-七-4. 装配时具有“踏车现象”的细胞骨架是 微丝 和 微管 。

A-七-5. 紫杉醇是作用于 微管 的特异性药物，而鬼笔环肽是作用于 微丝的特异性药物。

A-七-6. 微丝的基本组成单位是 肌动蛋白 ，其在细胞中也有两种存在方式： ① 球状肌动蛋白 ② 纤丝状肌动蛋白 。

A-七-7. 在细胞骨架系统中较为稳定的一种骨架纤维是 中间纤维 。 A-七-8. 中间纤维蛋白分子 八 聚体之间在纵向端对端首尾相连组成一条原纤维， 四 条原纤维侧向相互作用最终形成中间纤维。

A-七-9. 细胞骨架中具有极性的为 微丝 和 微管 。

B-七-10. 鞭毛和纤毛内部是由 微管 组成的轴丝构成的结构。其基部的结构式为__三联管__，而其杆部的结构

细胞骨架与肿瘤

一、什么是细胞骨架

细胞骨架是真核细胞中真核细胞内蛋白纤维交织而成的立体网架结构，参

与细胞形态的维持、细胞运动、细胞分裂等几乎所有的细胞生命活动。广义的细胞骨架有：细胞质骨架、核骨架、核纤层、细胞外基质。狭义上可分为：微管、微丝和中间纤维。细胞骨架作为支架可维持细胞的形态，亦可为细胞内细胞器提供附着位点；还分别参与细胞转运、信号转导、细胞分裂等功能。

1、微管，直径约25nm。典型的微管是由,根原纤维形成的一个空管,常延伸到像纤毛、鞭毛或某些原生动物的轴伪足这样一些长细胞突起中,形成有规则构型的复合物。由微管蛋白和微管结合蛋白组成，微管的装配分三个时期：成核期、延长期和稳定期。微管组装的动态调节模型有：非稳态动力模型和踏车模型。影响微管组装的因素有：微管蛋白浓度、GTP、Mg离子、温度和PH。其功能有：维持细胞形态，参与细胞特定结构的形成，参与细胞内物质的运输，参与细胞的运动，参与细胞内信号转导，维持细胞内细胞器的定位和分布。

2、微丝，直径为6一8nm。在微绒毛、褶终膜和微靖等细胞的伸展部分尤为显著。其结构与功能和微管相似。

3、中间纤维，除微丝和微管外,在高等生物细胞中通常还能观察到第三类纤维—中等纤维(其直径界

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细胞骨架

A型题：

1.细胞骨架是由哪几种物质构成的

A.糖类 B.脂类 C.核酸 D.蛋白质 E.以上物质都包括 2.下列哪种结构不是由细胞中的微管组成

A.鞭毛 B.纤毛 C.中心粒 D.内质网 E.以上都不是 3.关于微管的组装，哪种说法是错误的

A.微管可随细胞的生命活动不断的组装与去组装 B.微管的组装分步进行

C.微管的极性对微管的增长有重要意义

D.微管蛋白的聚合和解聚是可逆的自体组装过程 E.微管两端的组装速度是相同的

4.在电镜下可见中心粒的每个短筒状小体

A.由9组二联微管环状斜向排列 B.由9组单管微管环状斜向排列

C.由9组三联微管环状斜向排列 D.由9组外围微管和一个中央微管排列 E.由9组外围微管和二个中央微管排列 5.组成微丝最主要的化学成分是

A.球状肌动蛋白 B.纤维状肌动蛋白 C.原肌球蛋白 D.肌钙蛋白 E.锚定蛋白 6.能够专一抑制微丝组装的物质是

A.秋水仙素 B.细胞松弛素B C.长春花碱 D.鬼笔环肽 E.Mg+ 7.在非肌细胞中，微丝与

Chapter 1０ 细胞骨架与细胞运动

10.1 细胞骨架的组成和功能

10.1.1 细胞骨架的组成和分布

微管：主要分布在核周围,并呈放射状向胞质四周扩散； 微丝：主要分布在细胞质膜的内侧； 中间纤维：分布在整个细胞中。 10.1.2 细胞骨架的功能

①作为支架(scaffold)； ② 在细胞内形成一个框架(framework)结构；③ 为细胞内的物质和细胞器的运输及运动提供机械支持；④ 为细胞的位置移动提供力；⑤ 为信使RNA提供锚定位点，促进 mRNA翻译成多肽；⑥ 是细胞分裂的机器；⑦ 参与信号转导。

10.2 微管(microtuble, MT)

10.2.1 微管的结构和类型

中空的管状；外径约 24 nm，内径约 14 nm, 壁厚 5 nm；长度变化不定。 细胞内微管呈网状和束状分布, 并能与其他蛋白共同组装成纺锤体、基粒、中心粒、纤毛、鞭毛、轴突、神经管等结构。 A 微管的结构

微管是由微管蛋白异源二聚体为基本构件，螺旋盘绕而成；在每根微管中二聚体头尾相接, 形成细长的原纤维(protofilament)； 13条原纤维纵向排列组成微管的壁。

B 微管蛋白(tubulin)类型：

α和β微管蛋白：直径4nm的

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告

姓名：常天易 系年级：海洋生命学院2012级 专业：生物科学

科目：分子细胞生物学实验 学号：12050011006

植物细胞骨架的观察

一、实验目的：

1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。 2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。

二、实验原理：

真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管

（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。

三、实验材料

洋葱表皮细胞

试剂：

1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液 2、M-缓冲液

3、1%Triton X-100/M-缓冲液 4、30%戊二醛-PBS溶液

四、实验方法

撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞，在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中，使其沉底。 去PBS溶液，加入1% TritonX-100处理30min 去 TritonX-100，使用M-缓冲液洗三遍，每次5min 加入3%戊二醛溶液固定3

第九章 细胞骨架

一、名词解释 1、肌动蛋白

2、中心粒/中心体 3、细胞骨架 4、动力蛋白 5、驱动蛋白 6、微管组织中心 7、踏车行为 二、判断题

1、与微丝不同，中间纤维蛋白合成后，基本上均组装成为中间纤维，没有大量游离的单体存在。

2、通常微管的负极指向中心体

3、微管和微丝都具有极性，在装配时，正极的装配速度较快。

4、微管和微丝的装配需要能量，而中间纤维的自发装配不需要能量。

5、通常细胞内微丝和微管处于动态平衡，在低温条件下，微丝和微管趋向于解聚

6、肌动蛋白单体在临界浓度时，微丝的正极趋于装配，负极趋于解聚，微丝长度保持相对不变。

7、微丝和微管的两端都可以进行装配和解聚。 8、纤毛的运动与微管有关。 9、细胞松弛素可以使细胞变圆

10、纺锤体与染色体的运动有关，其中动粒微管在染色体运动时发生显著变化，而极微管和星体微管变化不大。

11、细胞松弛素的作用是促进微丝的稳定性。

12、与肌动蛋白和微管蛋白不一样，中间纤维蛋白具有组织特异性。 13、肌动蛋白的装配需要ATP提供能量。 14、微管蛋白的装配需要GTP提供能量。 15、微管蛋白的α和β亚基上都具有GTP结合位点，在微管装配时α亚基上的GTP会发生水解。

16、微管的直

植物细胞骨架的光学和荧光显微镜观察

一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白

质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，用光学染料考马斯亮兰R250和荧光染料鬼笔环肽染色，在普通光学显微镜和荧光显微镜下观察微丝结构。

三、实验步骤：

光学观察 1、

撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有

pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；材料预处理时间太短会影响下一步操作，务必过夜处理。 2、 3、 4、 5、 6、

吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min； 吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min； 3%戊二醛固定30min；

pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；

0.2%考马斯亮兰R250染色20min或者25μg/ mL罗丹明-

鬼笔环肽染色1小时； 7、

用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖

玻片，于显微镜下观察。

荧光观察：

1． 固定液中(固定液成份:4 %多聚甲醛, 50 mmol/ L Pipes pH 6.9 ,

5 mmol/ L EGTA , 5mmol/

细胞免疫荧光染色

1. 盖玻片处理：用前1天用纱布擦净灭菌，放入6孔板。

2. 接种细胞：较低密度为适宜，约2000－10000个/孔（根据细胞生长状态决定，常用

5000个/孔），2ml（浓度为2500/ml）

3. 24h后细胞贴壁，根据需要同步16－18h，干预处理，细胞融合60－70％时染色最

佳

4. 37度PBS洗涤，3ml/孔，贴边加（可将6孔板倾斜，加完样在放正以防冲掉细胞，

0.5min。室温PBS也可，但4度禁止，否则细胞易皱缩。

5. 固定：4％多聚甲醛(1ml)，先常温稳定5min，然后4度，10min，（可放在饭盒内）。 6. 吸掉多聚甲醛，迅速加PBS 5ml/孔，洗涤5min×3次，镜下观察，细胞形态如前。 7. 透化：0.1％－4％triton×－100，1ml/孔，室温透化5min（triton是去污剂，目的是

将脂质成分破坏，如细胞膜、核膜等，故不影响实验结果，可不用洗涤）

8. 5％BSA（滤过）室温封闭至少20min（可配制含5％BSA和0.2％triton的混合液，将

两步合成一步）风干

9. 用5％BSA将一抗1：50或1：100（常用）稀释至EP管 200ul/玻片 10. 将纱布垫在饭盒中，去离子水润湿纱

一、填空题

1.真核细胞除了 和 外，都含有细胞核。 2.染色体的四级结构分别是： 、 、 、 。 3.1831年布朗在 中发现了细胞核和核仁。

4.着丝粒DNA具有 性，并为 所染色。 5. 是第一个被发现的分子伴侣，时值1978年。

6.核质蛋白协助组蛋白与DNA形成正常的核小体，机理主要是降低 ，从而阻止了错误的装配。

7.亮氨酸拉链的形成是靠 。

8.就目前所知，中度重复序列中，除了 外，都没有蛋白质产物。 9.保证染色体进行稳定复制和遗传的三个功能序列分别是： 、 、 。

10.组蛋白带 电荷，富含 氨基酸。 11.成熟的鸟类红细胞中， 被H5所取代。

12.精细胞的细胞核中没有组蛋白，但由

实验六 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备

实验目的

1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。 2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。 实验用品

1、器材：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（附照相装置）、隔水式恒温培养箱、干燥箱、水平式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸气消毒锅、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、10ml培养瓶（可用环磷酰胺药瓶代）、2ml注射器、吸管、滴管、试管架、三角烧瓶、染色缸、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷盘、铝制饭盒、消毒用酒精棉球与碘酒棉球等。

2、材料：人外周血

3、试剂：RPMI l640培养液（含10~20％小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5％NaHCO3溶液、1mol／L HCl、三蒸水或双蒸水、0.075 mol／L KCl、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液，pH6.8的磷酸缓冲液。

实验原理

据测定，健康成年人体内的淋巴细胞总数约有500×109，其中约有2％在外周血中循环。在外周血的淋巴细胞中，以小淋巴细胞为主（每毫升血中的含量可达1~3×106个）。在通常情况下，它们都处于间期的G0或G1期，所以很难见到正在分裂的淋巴细