酶水解法测定淀粉含量

酶水解法测定玉米中淀粉含量方法的探讨

刘海明，王旭艳，高凤宇

（承德避暑山庄企业集团有限责任公司，河北 承德 067500）

摘 要：玉米中淀粉含量的测定方法有很多，GB/T5514-2008标准中规定采用酶水解法对玉米中的淀粉含量进行测定，但该方法存在结果偏低、偏差较大的缺点。本实验对标准中的实验方法及相关条件进行了优化，如玉米称样量、加水量、液化酶用量、液化温度、液化时间、水浴条件、过滤方式、加酸量等，并对实验中存在的问题进行了分析和探讨，优化后的方法适合低脂肪谷物中淀粉含量的测定，具有实用、准确、稳定性好的特点。

关键词：玉米；淀粉含量；酶水解

玉米是世界三大粮食作物（稻谷、小麦、玉米）之一，也是畜牧业生产的主要原料 [1]。玉米淀粉是淀粉的主要品种，占世界淀粉总量80%[2]。玉米淀粉主要在玉米胚乳中，由单一的葡萄糖分子脱水聚合而成的，葡萄糖分子以α-1,4-糖苷键，α-1,3-糖苷键，α-1,6-糖苷键链接而成的天然物质，质量分数在70%～80%之间[3]。近年来，随着玉米淀粉产量的加大，其在食品、制糖、发酵、医药和化工等的增稠剂、甜味剂中应用越来越多[4]。

淀粉含量的测定方法有酸水解法[5]，酶水解法[6]和旋光法[7]

维普资料,参考文献

1 52

齐鲁药事 Q l P am c ta A fi 0 0V 12, . i hr a ui l fa s 1 o 9 No3 u e c r2 .水~乙腈一三乙胺做为流动相进行分离效果比较，多结果众表明甲醇一水一乙腈~三乙胺 (2:2 6 6:1 2:0 2效果最 .)好。因此，用甲醇一水一乙腈一三乙胺 ( 2:2选 6 6:1 2: 0 2为 HP C法测定盐酸托烷司琼氯化钠注射液中盐酸托 .) L烷司琼含量的流动相。

品溶液。精密量取上述两种溶液各 2“ O L注入色谱仪，外按标法，算盐酸托烷司琼的含量，定结果见表 3计测。表3 样品含量测定结果

结果显示，酸托烷司琼氯化钠注射液连续生产三批样盐

3 3试验结果表明，方法操作简单、敏度高、确度好， .该灵准 辅料不干扰测定，用于盐酸托烷司琼氯化钠注射液中盐酸可托烷司琼的含量测定。参考文献

品的含量分别为 9 . 5、0 . 3、 0. 1,方法操作 9 3 10 7 i 0 0该简单、敏度高、确度好，用于盐酸托烷司琼氯化钠注射灵准可液中盐酸托烷司琼的含量测定。3讨论

[3 1刘宇，陆军，陈宁， .止吐药盐酸托烷司琼的合成 .华西药学杂等志，0 4 1 ( ) 4 3 3

一、实验目的：

1、 利用酸水解法测定出食品中淀粉含量； 2、 利用凯氏定氮法测定食品中蛋白质的含量。 二、实验原理：

1、淀粉的测定原理：利用酸水解法测定食品中的淀粉，首先将米粉去脂肪及可溶性糖，接着加盐酸对米粉进行酸水解，利用滴定的方法检测水解后样品中还原糖，将还原糖换算成淀粉的含量。

2、蛋白质测定的原理：食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。 三、实验仪器及试剂：

1、仪器：天平、定氮蒸馏装置、烧杯、500mL与100mL容量瓶、滤纸、烧瓶、水浴锅、锥形瓶、玻璃珠、滴定管。

2、试剂：硫酸铜、硫酸钾、硫酸（1.84 g/L）、甲基红乙醇溶液（1 g/L）、硼酸溶液（20 g/L）、混合指示液(2份甲基红乙醇溶液(1g/L)+1份亚甲基蓝乙醇溶液(1 g/L))、氢氧化钠溶液（400 g/L）、硫酸或盐酸标准滴定溶液

（0.0500mol/L）、乙醚、85%乙醇、6mol/LHCl、40%NaOH、20%乙酸铅、10%的NaSO4、碱性酒石酸铜液（甲、乙液）。 四、实验步骤：

1、淀粉的测定实验步骤：

采用滴定法测定，就是有机分析里面的碘量法，依据的是国家标准GB/T 601-2002和GB 1676-81。

（1）试验溶液的配制

0.1N三溴化合物甲醇溶液：取76 g无水溴化钠（于恒温箱中130 ℃干燥3小时），溶于1000ml甲醇中，加入5.1ml溴，储存于棕色试剂瓶中，混匀，过一昼夜用。

10％的KI溶液：称取10.0g KI溶于水中，用水稀释至100ml，贮于棕色瓶中。 1%的淀粉指示液：称取0.5g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，再用刚煮沸的水冲稀至50ml。现配现用。

0.1mol/L硫代硫酸钠溶液：称取25.0g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g无水碳酸钠，用去离子水稀释至1000ml，贮于棕色瓶中。 （2）0.1mol?l-1硫代硫酸钠溶液的标定

向250ml锥形瓶中称取约0.06g重铬酸钾（于 120 ℃干燥至衡重），加入20ml去离子水使之溶解，而后加1g碘化钾及20ml稀硫酸（20％），于暗处放置10min。加100ml水（15-25 ℃），用配置好的硫代硫酸钠溶液滴定，近终点（溶液呈淡黄色）时加2ml淀粉指示液（10g/L），继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。同时做空白试验。硫代硫酸钠溶液的浓度采用下式计算：

高锰酸钾法测定中钙的含量

摘要

实验以高锰酸钾法测定石灰石中钙的含量，要求掌握以Na2C2O4做基准物标定高锰酸钾溶液的原理、方法及滴定条件。使用间接滴定法测定物质中组分的含量，学习晶形沉淀的制备及洗涤方法。

关键词：高锰酸钾法 间接滴定法 钙的含量的测定 前言

市售的KMnO4常含有少量的杂质，如硫酸盐,卤化物及硝酸盐以及MnO2等，不是基准物，因此不能用精确称量高锰酸钾来直接配制标准溶液。

KMnO4标准溶液常用还原剂草酸钠作基准物来标定，草酸钠不含结晶水，容易提纯，性质稳定。用草酸钠溶液标定KMnO4溶液的反应如下： 2MnO4-+5C2O42-+16H+=2Mn2++10CO2↑+8H2O 滴定时可利用MnO4-离子本身的颜色指定滴定终点。

利用KMnO4法测定钙的含量，只能采用间接法测定。将样品用酸处理成溶液，使Ca溶解在溶液中。Ca在一定条件下与C2O4作用，形成白色CaC2O4沉淀。过滤洗涤后再将CaC2O4沉淀溶于热的稀H2SO4中。用KMnO4标准溶液滴定与Ca2+1:1结合的C2O42-含量。其反应式如下：

Ca2++C2O42- = CaC2O4↓

间接碘量法测定维生素C片剂含量

一、 目的要求

1． 掌握间接碘量法的基本原理

2． 熟悉间接碘量法测定维生素C含量的操作方法

二、 实验原理

在酸性条件下，维生素C与碘发生氧化还原反应，过量的碘用硫代硫酸钠标准液滴定。

I2+2Na2S2O3 =Na2S4O6+2NaI 三、 实验内容 1. 主要仪器与试剂

仪器：电子天平：（感量：0.0001g）、酸式滴定管、碘量瓶、量瓶 试剂：0.05mol/L的碘标准液、0.15mol/L Na2S2O3标准液、冰醋酸、0.5%淀粉溶液

2. 测定步骤 （一）维生素C

准确称取0.2g左右样品于碘量瓶中，加新煮沸并冷却的蒸馏水50mL、冰醋酸5mL溶解。准确移取50.00mL碘标准液于碘量瓶中，充分摇匀。然后用Na2S2O3标准液滴定剩余的碘，滴定至溶液呈浅黄色后，加入2mL0.5%淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好消失。记录滴定消耗的体积为V。（每1ml碘滴定液（0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6）

计算方法：

3TF(50.00?V)2?100%含量%?W

（二）维生素C片

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素C0.4g),置100mL容量瓶中，加煮沸并冷却的

浓酸水解法

浓酸水解法一般情况下指的是酸浓度为70%的硫酸、40%的盐酸或80%的硝酸等无机酸作为酸催化剂水解纤维素的方法，该方法的原理主要是纤维素在酸性条件下的水解是均相反应，纤维素在浓酸中溶胀或溶解后，通过与酸形成复合物后，再降解生成聚合度较低的可溶性寡聚糖（以纤维四糖为主）和葡萄糖。而后加水稀释，一定温度下加热一段时间后可溶性糖即可水解为葡萄糖。用此方法转化纤维素到葡萄糖的产率较高（最高可达90%以上）。但是浓酸水解法所需的反应时间较长，对设备的腐蚀相当严重，对生态环境污染也比较大，且所用的酸必须回收，因此限制了浓酸水解的广泛的工业应用。 稀酸水解

在较高温度下，纤维素的复杂网络状结构使其在稀酸(通常指的是浓度低于10%的盐酸或硫酸等无机酸)中发生于固相纤维素和稀酸溶液之间的多相水解反应，其中此过程分为两个阶段：一是纤维素的非结晶区的水解，由于非结晶区结构松散，氢离子较易进入，因而水解较快, 非结晶区水解的同时，也会发生结晶区的溶胀，在非结晶区水解完全后，结晶区的水解产物会从表面逐渐分离。纤维素的稀酸水解，H3O+与氧原子结合，打破纤维素链中的糖苷键和葡萄糖分子中的C-O-C键， 纤维素长链断裂，生成可溶性低聚糖和葡萄糖的同时又将氢离子

GB 5009.9-2008

食品中淀粉的测定

1 范围

本标准规定了食品中淀粉的测定方法 本标准适用于食品中淀粉的测定。

第一法 酶水解法

2 原理

试品经去除脂肪及可溶性糖类后，淀粉用淀粉酶水解成小分子糖，再用盐酸 水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。 3 试剂

除非另有规定，笨方法中所用试剂均为分析纯。 3.1 碘（I2）。 3.2 碘化钾（KI）。

3.3 高峰式淀粉酶：酶活力大于或等于1.6 U/mg。 3.4 无水乙醇（C2H5OH）。 3.5 石油醚（CnH2n+2）：沸点范围是60℃～90℃. 3.6 乙醚（C8H9NO3）. 3.7 甲苯（C7H9）。

3.8 三氯甲烷（CHCL3）. 3.9 盐酸（HCL）。

3.10 氢氧化钠（NaOH）。 3.11 硫酸铜（CuSO4·5H2O）

3.12 亚甲蓝（C16H18CIN3S·3H2O）：指示剂 3.13 酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O） 3.14 亚铁氰化钾（K4Fe (CN)6·3H2O） 3.15 甲基红（C15H15N3O2）：指示剂 3.16 葡萄糖（C6H12O6） 3.17 甲基红指示液（2

理科园地 唾液淀粉酶最适pH值的测定

□清华大学附属中学14班 唐睿谦

【摘　要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不同pH值下，通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最适pH值。在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小，可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

【关键词】唾液淀粉酶 最适pH 吸光值【中图分类号】 G 【文献标识码】 A 【文章编号】0450-9889（2015）02B-0117-02

酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。

酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能

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目 录

摘要┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄2

一、前言┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄2 1、 烧碱中Nacl的介绍┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 2、 Nacl的测定方法┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 3、 国内外相关研究方法┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 二、实验部分┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 1、原理┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 2、仪器┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 3、试剂┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 4、试样的准备┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 5、操作程序┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 6、结果的计算和表示方法┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 三、分析方法研究┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 1、莫尔法┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄┄ 2、法扬司法┄┄┄┄┄┄┄┄┄