淀粉酶活性的测定

实验三、 唾液淀粉酶的活性观察 实验三、

指导老师：刘建昌、 指导老师：刘建昌、池雪林

一、目的

掌握温度、pH、激活剂和抑制剂如何影 掌握温度、pH、 响酶的催化活性及其影响机理。 响酶的催化活性及其影响机理。

二、原理酶是由活细胞分泌的生物催化剂。 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 活力) 在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温 度即酶的最适温度 度即酶的最适温度 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高 的物质称为酶的激活剂 的物质称为酶的激活剂 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 抑制剂。 抑制剂。

本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化 因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液 淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随 着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到 各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度。淀粉酶 淀粉 糊精 淀粉酶 麦芽糖 + 少量葡糖

蓝色) 加碘 (蓝色)

紫红、 紫红、暗褐或红色

棕黄色

三、试剂及器材(1)0.5%(

理科园地 唾液淀粉酶最适pH值的测定

□清华大学附属中学14班 唐睿谦

【摘　要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不同pH值下，通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最适pH值。在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小，可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

【关键词】唾液淀粉酶 最适pH 吸光值【中图分类号】 G 【文献标识码】 A 【文章编号】0450-9889（2015）02B-0117-02

酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。

酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能

准确称取天山云杉种子0.1 g，先加入 1 ml 预冷的50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含1 mmol/ L EDTA)，研磨成匀浆，然后用 4.5 ml 分两次冲洗研钵至试管中，4 ℃，10000 r/min 离心 20 min，上清液即为酶提取液，4 ℃保存用于ROS系统酶活性分析。 3 酶活性的测定

3.1 过氧化物酶 (POD，EC 1.11.1.7) 活性的测定。

按照 Chance 和 Maehly[6]的方法，并作如下修改:反应混合液为50 mmol/ L的磷酸缓冲液 (pH 7.0，内含 0.1 mmol/ L EDTA) 2.9 mL，2 % H2O2 1.0 mL，50 mmol/ L 愈创木酚1.0 mL。测定时，反应混合液先在 25 ℃ 水浴中预热，立即加入0.1 mL酶液以启动反应，以缓冲液调零，测定OD470值，每隔 30 s读数一次。取 0 — 60 s 时间段，即 1 min 反应时间来计算酶活性。以每分钟OD470增加0.01的酶量为一个酶活单位，U·g-1。

计算公式: POD活性 = ΔA470 × Vt × (0.01× t × FW × V1) -1 注: ΔA470:反应时间内

微生物与转基因技术

摘 要 微生物目前已是生物技术领域主要的模式生物之一，微生物可以为转基因

技术提供工具酶、基因载体；微生物本身也常作为目的基因的受体细胞。通过转基因的方式，可以将人类所需要的基因转移到特定物种上，从而表达出人类想要的性状。本文综述了转基因微生物在食品、农业、医药以及环境保护、传统工业改造等领域研究与应用的国内外现状。在食品生产领域，转基目微生物主要用于食品用群制剂的生产，如凝乳酶．淀粉酶，蛋白酶等，转基因酵母也应用于啤酒的生产．在农业生产领域，转基因微生物主要用于微生物农药、微生物肥料和饲料酶制剂的生产．在医药生产领域，转基因微生物主要用于兽用和人用疫苗的生产，以及利用转基因镟生物生产某些药物。此外，转基因微生物在环境保护，传统工业的改造、印染业，以及新能薄开发等方面也有应用，本文也同样大致介绍了一些目前国内外关于微生物转基因方面的前沿研究。

关键词 微生物转基因，DNA重组技术，目的基因，基因载体

1 引 言

转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学。基因片段[1]的来源可以是提取特定生物体基因组中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段。基因片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行重组，再

有关唾液淀粉酶最适pH值实验测定论文

1、广西医科大学基础医学院2013级七年制临床一班 2、实验小组成员：马健，李起广，莫书天，李显君 3、本论文作者：马健

一、摘要：酶学知识应用于临床诊断与应用治疗，自行设计实验并根据课题要求精确测定唾液淀粉酶的最适pH，目的掌握方法，熟悉缓冲溶液的配置，721分光光度计的使用。主要通过测定碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应后的吸光度差异来精确出唾液淀粉酶的最适PH值，实验结果约为6.8。 二、关键词：淀粉酶 水解产物 最适pH 吸光度

三、前言：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，酶催化活性最高时反应体系的PH称为酶促反应的最适PH酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，而影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。所以研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。 四、实验原理：

1、pH的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受pH影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小。

2、过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大

实验六十 淀粉酶产生菌株的筛选

实验项目性质：设计性

所涉及的知识点：无菌技术、富集培养、纯种分离、淀粉酶性质、酶活测定 计划学时：8学时

一、实验目的

1．掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。 2．巩固以前所学的微生物学实验技术。 3．掌握产酶微生物筛选的方法。

二、实验原理

α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。

1、采样：即采集含菌的样品

采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。在土壤中几乎各种微生物都可以找到，因而土壤可说是微生物的大本营。在土壤中，数量最多的当推细菌，其次是放线菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各类物体上都有相应的占优势生长的微生物。例如枯枝、烂叶、腐土和朽木中纤维素分解菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多，果实、蜜饯表面酵母菌较多；蔬菜牛奶中乳酸菌较多，油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌较多等。

2、增殖培养（又称丰富培养）

增殖培养就是在所采集的土壤

小麦萌发前后淀粉酶活力的比较及电泳法测定蛋白

含量

一.实验目的

1.掌握利用光照培养箱培养小麦的方法； 2.了解酶的制备及活力测定的一般原理与方法；

3.掌握淀粉酶的活力测定技术，了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化； 4.巩固对721或722S型分光光度计和离心机的熟练使用；

5.灵活运用3，5-二硝基水杨酸比色法测定样品中还原糖含量的原理和方法； 6.掌握SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳法； 二.实验原理

种子中的碳水化合物主要是以淀粉的形式存在。淀粉酶是一种水解酶，它能使淀粉水解为麦芽糖，催化反应为：

2（C6H10O5）+n H2O------n C12H22O11

麦芽糖具有还原性，与3，5-二硝基水杨酸在供热的条件下生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，棕色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比，因此可利用比色法测定还原糖的量。

休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌发后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。

三.实验步骤

1.种子发芽

小麦种子浸泡2.5h后，放入25℃恒温箱内发芽。 2.酶液提取

取发芽第三天或者第四天的幼苗8株，放入研钵中，加入石英砂少许，加入PH6.8磷酸盐缓冲液10ml，研磨至匀浆状。在室温下静

转载自别人的论文,希望对大家的学习作以借鉴

安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2009,37(12):5362-5363,5371　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　张杨林　责任校对　

傅真治

高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选

唐丽江,王振华,王迪　(成都农业科技职业学院畜牧兽医分院,四川温江611130)

摘要　[目的]筛选高产淀粉酶的芽孢杆菌菌株。[方法]选用10株芽孢杆菌,采用染色法初选和3,5-二硝基水杨酸显色法复选对其产淀粉酶的能力进行测定,筛选高产淀粉酶的芽孢杆菌菌株。[结果]10株芽孢杆菌菌株中有9株具有产淀粉酶能力,其中编号为Pab03、Pab02的2株枯草芽孢杆菌产酶活性最高,染色圈直径/菌落直径分别为2.284、1.961;在未作发酵条件优化的前提下,其酶活力分别达到(31.331±(21.521±0.985)、1.390)U,在作为新型的消化酶饲料添加剂方面具有广阔的应用前景。而菌株凝结芽孢杆菌PSAF1和枯草芽

(0.704±孢杆菌PJK01所产淀粉酶活力最低,分别为(0.366±0.022)、0.089)U。[结论]成功筛选了2株高产淀粉酶的枯草芽孢杆菌菌株,

分别

植物组织中过氧化氢酶的活性测定—紫外吸收法

【原理】

H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 【仪器与用具】

紫外分光光度计；冷冻离心机；研钵；容量瓶；刻度吸管；恒温水浴；分析天平 【试剂】

1. 0.05mol/L pH7.0磷酸缓冲液

2. 0.2mol/L H2O2溶液：30% H2O2 11.36ml溶于磷酸缓冲液中，定量至250ml。 3.0.05 mol/LTris-Hcl缓冲液（pH7.0） 【材料】

正常生长或经逆境处理的新鲜植物组织 【方法步骤】

1.酶液提取：称取剪碎混匀的植物样品（如叶片等）1.00g置与预冷的研钵中，加入适量预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂冰浴研磨成匀浆后，转入10ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到10ml。取提取液5ml于离心管中，在4℃、15000g下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。4℃下保存备用。

2.CAT活性测定

（1）取10ml具塞试管，加2ml酶提取液于沸水浴中加热煮死，冷却备用。 （2）取10ml具塞试管，3

一、过氧化物酶（POD）活性的测定

POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。 测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。

△470 ×VT

POD活性=

0.01×t×Vs×W

式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；

VT ----提取酶液的总体积（ml） t----反应的时间（min）

Vs ----测定时取用酶液体积（ml） W----样品鲜重（g）

二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定

多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。

酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液