乳糖诱导剂配制
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以乳糖为诱导剂的高密度发酵 - 褚仲梅
中国医药工业杂志 ChineseJournalofPharmaceuticals2001,32(11)
·491·
文章编号:
1001-8255(2001)-0491-03
以乳糖为诱导剂的高密度发酵
褚仲梅1, 申秀云1, 刘现杰2, 屈贤铭1
(1.上海生物工程研究中心,上海200233;2.珠海亚利生物工程有限公司,珠海519000)
摘要:以重组刺桐胰蛋白酶抑制剂(rETIa)为目的产物,用摇瓶比较了以异丙基-半乳糖苷和乳糖诱导表达的差β-D-异,并在15L发酵罐中,以乳糖为诱导剂进行高密度发酵,摸索了诱导后碳、氮补加工艺对产物表达的影响,成功地使菌体密度达到61(A600),表达量达到菌体总蛋白的33%,为乳糖替代IPTG在工业生产中应用提供了借鉴。关键词:乳糖诱导;高密度发酵;重组刺桐胰蛋白酶抑制剂中图分类号:TQ925 文献标识码:A
随着生物技术的发展,许多基因工程重组蛋白
在大肠杆菌表达系统中进行表达生产。lac及其衍生的启动子被广泛地应用在该领域中,通常这类启动子都用异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,进行诱导外源蛋白的表达,但IPTG成本高并污染环境,不适于工业生产。国外有以乳糖替代IPTG发酵的文献报道
[1~4
TLC显色剂配制
常用试剂配制及显色方法
(一) 通用显色剂 1. 重铬酸钾——硫酸
一般有机物均能显色,不同化合物显示不同颜色。
喷洒剂:5克重铬酸钾溶于100ml,40%硫酸中。喷洒后加热至150oC斑点出现。 2. 碘:检查一般有机物
(1) 碘蒸汽:在一个密闭玻璃皿先放入碘片,使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层
放入缸内数分钟即显色,有时在缸内放一盛水的小杯,增加缸内的湿度,可提高显色的灵敏度。
(2) 0.5%碘的氯仿溶液,取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。 3. 碘——碘化钾溶液:很我有机物虽黄色(配法见后)。
4. 5%——磷钼酸乙醇溶液:喷后120oC烤,还原性物质显兰色,再用氨气熏,则背景
变为无色。
5. 20%磷酸乙醇溶液:喷后120oC,还原性物质显兰色。
6. 碱性高锰酸钾试剂:还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。
溶液II:5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。
7. 中性0.05%高锰酸钾溶液:易还原性物质在淡红背景上显黄色。
8. 硝酸银——氢氧化铵(Tollen’s--zoffaronl)试剂,喷后105oC烤5~10分钟,还原性物
质显黑色。
溶液I:0.1N硝酸银溶液。
酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验
酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验
培养基:
SC尿嘧啶缺陷培养基(2%GLucose) SC诱导培养基(2%半乳糖)
贮存液:
20%葡萄糖(W/V) 20%半乳糖(W/V) 贮存液过滤除菌,4℃保存。
SC培养基高温高压灭菌,待培养基温度降低至60℃以下后,加入相应体积的葡萄糖或者半乳糖,混匀,4℃保存备用。
实验流程:
1.将转化pYES2的INVSC单克隆接种到15ml SC(2%葡萄糖)选择培养基中。 2. 30℃震荡过夜培养。
3.测定过夜培养菌液的OD600,计算配制50ml OD600=0.4的菌液所需的过夜培养的菌液体积V。
eg:例如过夜培养菌液OD600=3,则V=(0.4OD/ml)(50ml)/(3OD/ml)=6.67ml。 4.取V体积过夜培养的菌液于50ml离心管中,4℃,1500g,离心5min,收集菌体。
5.用1-2ml SC诱导培养基(SC+2%半乳糖)充分重悬菌体,将诱导培养基补充至50ml,,将菌液全部转移至无菌250ml三角瓶中,30℃震荡培养。 6.分别于接种诱导培养基2,4,6,8h后,取5ml菌液测定OD600。 7.4℃,1500g,离心5min,收集菌体。 8.去上清,用
指示剂的配制
指示剂的配制
1. 0.5M HCL:取41.75ml分析纯盐酸,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
83.5---2L
2. 0.1M EDTA:称取37.2g分析纯乙二胺四乙酸二钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
74.4—2L
3. 0.2 NaOH:称取8g分析纯氢氧化钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
16—2L
4. 1M NaOH:称取40g分析纯氢氧化钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
80—2L
5. 0.1M AgNO3:称取16.987g分析纯硝酸银,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
33.974—2L
6. 0.1M Na2S2O3:称取26g分析纯硫代硫酸钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
52—2L
7.0.05M I2:称取12.7g分析纯碘和20g分析纯碘化钾,溶于纯水定容至1000ml容量瓶。
8.30%硫酸:取300ml的分析纯硫酸,溶于纯水定容至1000ml烧杯中。
9. 50%的氨水:取500ml的分析纯氨水,溶于纯水定容至1000ml烧杯中。
10. 1%的淀粉:称取1g的淀粉指示剂,溶于沸水定容至100ml烧杯中。
11. 1%的溴甲酚紫:称取1g的溴甲酚紫指示剂,溶于
指示剂的配制
指示剂的配制
1. 0.5M HCL:取41.75ml分析纯盐酸,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
83.5---2L
2. 0.1M EDTA:称取37.2g分析纯乙二胺四乙酸二钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
74.4—2L
3. 0.2 NaOH:称取8g分析纯氢氧化钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
16—2L
4. 1M NaOH:称取40g分析纯氢氧化钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
80—2L
5. 0.1M AgNO3:称取16.987g分析纯硝酸银,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
33.974—2L
6. 0.1M Na2S2O3:称取26g分析纯硫代硫酸钠,溶于纯水定容至1000ml容量瓶中。
52—2L
7.0.05M I2:称取12.7g分析纯碘和20g分析纯碘化钾,溶于纯水定容至1000ml容量瓶。
8.30%硫酸:取300ml的分析纯硫酸,溶于纯水定容至1000ml烧杯中。
9. 50%的氨水:取500ml的分析纯氨水,溶于纯水定容至1000ml烧杯中。
10. 1%的淀粉:称取1g的淀粉指示剂,溶于沸水定容至100ml烧杯中。
11. 1%的溴甲酚紫:称取1g的溴甲酚紫指示剂,溶于
各种指示剂配制方法
各种指示剂配制方法 Revised as of 23 November 2020
各种指示剂配制方法
1乙氧基黄叱精指示液取乙氧基黄叱精,加乙醇100ml使溶解,即得。变色范围~(红→黄)。二甲基黄指示液取二甲基黄。加乙醇100ml使溶解,即得。变色范围~(红→黄)。
2二甲基黄-亚甲蓝混合指示液取二甲基黄与亚甲蓝各15mg,加氯仿100ml,振摇使溶解(必要时微温),滤过,即得。
3二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液取二甲基黄与溶剂蓝19各15mg,加氯仿100ml使溶解,即得。
4二甲酚橙指示液取二甲酚橙,加水100ml使溶解,即得。
5二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g,加乙醇100ml使溶解,即得。
6儿茶酚紫指示液取儿茶酚紫,加水100ml使溶解,即得。变色范围~~(黄→紫→紫红)。
7中性红指示液取中性红,加水使溶解成100ml,滤过,即得。变色范围~(红→黄)。
8孔雀绿指示液取孔雀绿,加冰醋酸100ml使溶解,即得。变色范围~(黄→绿);~(绿→无色)
9石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40ml,回流煮沸1小时,静置,倾去上层清液,再用同一方法处理2次,每次用乙醇30ml,残渣用
常用指示剂配制方法
55种指示剂的配制方法
1 、如何配制饱和溴水
在有磨口玻璃塞的瓶内,将市售溴约 50g (约16mL)在2小时内注于 1L 水中,时常剧烈振荡,每次摇动之后,微开瓶塞,使积聚的溴蒸气放出。在贮存瓶底要有过量的溴。将溴水倒入试剂瓶时,过量的溴应当留于贮存瓶中而不要倒出。倾倒溴和溴水时,应在通风橱中进行。在倾倒溴时,为了防止被溴蒸气烧伤,应以凡士林涂手或带医用橡胶手套。 2 、配制碘水试剂的方法
称取分析纯碘片 6.5g ,放于小烧杯中,另外称取固体KI 18.5g,并先把碘片溶解于少量酒精中,再加入 水到100毫升,搅拌均匀即可。 3 、碘酒的配方
碘I2 25 g、碘化钾KI 10 g、乙醇C2H5OH 500 mL,最后加水至1 000 mL。
配制时应先将KI溶解于10 mL水中,配成饱和溶液。再将碘I2加入KI溶液中,然后加入C2H5OH,搅拌溶解后,添加蒸馏水至1000 mL,即成为常用的皮肤消毒剂。 4 、①0.1(1g/L)酚酞指示剂的配制方法
0.1 的酚酞指示剂是指100mL溶液使用 0.1g 的酚酞。 配置方法:称量 0.1g 酚酞,然后用少量95%乙醇或者无水乙醇
溶解,定量转移至100mL容量瓶后再用乙醇定
常用指示剂的配制
滴定分析常用指示剂的配制
1、 甲基橙(PH=3.1-4.4)
0.1克甲基橙溶解于100毫升热水中。如有不溶物应过滤。 2、甲基红(PH=4.4-6.2)
0.1克甲基红溶解于60毫升乙醇中,溶解后加水稀释至100毫升。 3、酚酞(PH=8.3-10)
1克酚酞溶解于80毫升乙醇中,溶解后加水稀释至100毫升。 4、麝香草酚酞(百里酚酞)PH=9.3-10.5
0.1克麝香草酚酞溶解于100毫升乙醇中。 5、溴甲酚绿(又名溴甲酚蓝)PH=3.6-5.2
0.1克溴甲酚绿溶解于2.88毫升0.05mol/L氢氧化钠溶液中,加水稀释至250毫升。 6、铁铵钒
2克硫酸高铁铵〔NH4Fe(SO4)2。12H2O〕,溶于100毫升水中,滴加刚煮沸过的浓硝酸直至棕色褪去。 7、铬黑T(或铬黑6B)
0.5克铬黑T(或铬黑6B)加50克氯化钠研磨均匀。 8、紫脲酸铵
2克紫脲酸铵(murexide)与氯化钠100克研磨混合均匀。 9、PH=10缓冲溶液
溶解54克氯化铵于水中加入350毫升氨水(相对密度0.89),加水稀释至1升。
10、PAN指示剂〔1-(2-吡啶基偶氮)-2-萘酚〕 称取0.2克PAN,溶于100毫升乙醇中。 11、1%淀粉指示剂
各种指示剂配制方法
各种指示剂配制方法 Revised as of 23 November 2020
各种指示剂配制方法
1乙氧基黄叱精指示液取乙氧基黄叱精,加乙醇100ml使溶解,即得。变色范围~(红→黄)。二甲基黄指示液取二甲基黄。加乙醇100ml使溶解,即得。变色范围~(红→黄)。
2二甲基黄-亚甲蓝混合指示液取二甲基黄与亚甲蓝各15mg,加氯仿100ml,振摇使溶解(必要时微温),滤过,即得。
3二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液取二甲基黄与溶剂蓝19各15mg,加氯仿100ml使溶解,即得。
4二甲酚橙指示液取二甲酚橙,加水100ml使溶解,即得。
5二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g,加乙醇100ml使溶解,即得。
6儿茶酚紫指示液取儿茶酚紫,加水100ml使溶解,即得。变色范围~~(黄→紫→紫红)。
7中性红指示液取中性红,加水使溶解成100ml,滤过,即得。变色范围~(红→黄)。
8孔雀绿指示液取孔雀绿,加冰醋酸100ml使溶解,即得。变色范围~(黄→绿);~(绿→无色)
9石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40ml,回流煮沸1小时,静置,倾去上层清液,再用同一方法处理2次,每次用乙醇30ml,残渣用
常用指示剂的配制
滴定分析常用指示剂的配制
1、 甲基橙(PH=3.1-4.4)
0.1克甲基橙溶解于100毫升热水中。如有不溶物应过滤。 2、甲基红(PH=4.4-6.2)
0.1克甲基红溶解于60毫升乙醇中,溶解后加水稀释至100毫升。 3、酚酞(PH=8.3-10)
1克酚酞溶解于80毫升乙醇中,溶解后加水稀释至100毫升。 4、麝香草酚酞(百里酚酞)PH=9.3-10.5
0.1克麝香草酚酞溶解于100毫升乙醇中。 5、溴甲酚绿(又名溴甲酚蓝)PH=3.6-5.2
0.1克溴甲酚绿溶解于2.88毫升0.05mol/L氢氧化钠溶液中,加水稀释至250毫升。 6、铁铵钒
2克硫酸高铁铵〔NH4Fe(SO4)2。12H2O〕,溶于100毫升水中,滴加刚煮沸过的浓硝酸直至棕色褪去。 7、铬黑T(或铬黑6B)
0.5克铬黑T(或铬黑6B)加50克氯化钠研磨均匀。 8、紫脲酸铵
2克紫脲酸铵(murexide)与氯化钠100克研磨混合均匀。 9、PH=10缓冲溶液
溶解54克氯化铵于水中加入350毫升氨水(相对密度0.89),加水稀释至1升。
10、PAN指示剂〔1-(2-吡啶基偶氮)-2-萘酚〕 称取0.2克PAN,溶于100毫升乙醇中。 11、1%淀粉指示剂