酿酒酵母半乳糖诱导机制

酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验

培养基：

SC尿嘧啶缺陷培养基（2%GLucose） SC诱导培养基（2%半乳糖）

贮存液：

20%葡萄糖（W/V） 20%半乳糖（W/V） 贮存液过滤除菌，4℃保存。

SC培养基高温高压灭菌，待培养基温度降低至60℃以下后，加入相应体积的葡萄糖或者半乳糖，混匀，4℃保存备用。

实验流程：

1.将转化pYES2的INVSC单克隆接种到15ml SC（2%葡萄糖）选择培养基中。 2. 30℃震荡过夜培养。

3.测定过夜培养菌液的OD600，计算配制50ml OD600=0.4的菌液所需的过夜培养的菌液体积V。

eg：例如过夜培养菌液OD600=3，则V=（0.4OD/ml）（50ml）/（3OD/ml)=6.67ml。 4.取V体积过夜培养的菌液于50ml离心管中，4℃，1500g，离心5min，收集菌体。

5.用1-2ml SC诱导培养基（SC+2%半乳糖）充分重悬菌体，将诱导培养基补充至50ml，，将菌液全部转移至无菌250ml三角瓶中，30℃震荡培养。 6.分别于接种诱导培养基2,4,6,8h后，取5ml菌液测定OD600。 7.4℃，1500g，离心5min，收集菌体。 8.去上清，用

酿酒酵母的发酵过程优化

戴璐

(常熟理工学院 生物与食品工程学院, 常熟 215500)

摘要: 该文以酿酒酵母为的生产菌，通过发酵过程的优化，重点考察了pH、溶解氧，测定残糖量和生物量的影响，并比较了分批培养、补料分批培养对酿酒酵母生长代谢的影响。发现补料分批培养比分批培养有利于酿酒酵母的生长与繁殖，有较多的细胞生物量的积累。 关键词: 酿酒酵母；发酵过程

Wine yeast fermentation process optimization

Dailu

(Changshu Institute of Technology, Biotechnology and Food Engineering Institute,

Changshu 215500)

Abstract: The fermentation process of Saccharomyces cerevisiae is optimized. The effect of some ferment conditions，including pH, fermentation of oxygen,

determination of residual sugar and biomass are res

酿酒酵母的发酵过程优化

戴璐

(常熟理工学院 生物与食品工程学院, 常熟 215500)

摘要: 该文以酿酒酵母为的生产菌，通过发酵过程的优化，重点考察了pH、溶解氧，测定残糖量和生物量的影响，并比较了分批培养、补料分批培养对酿酒酵母生长代谢的影响。发现补料分批培养比分批培养有利于酿酒酵母的生长与繁殖，有较多的细胞生物量的积累。 关键词: 酿酒酵母；发酵过程

Wine yeast fermentation process optimization

Dailu

(Changshu Institute of Technology, Biotechnology and Food Engineering Institute,

Changshu 215500)

Abstract: The fermentation process of Saccharomyces cerevisiae is optimized. The effect of some ferment conditions，including pH, fermentation of oxygen,

determination of residual sugar and biomass are res

电转法

设计方案一：

感受态制备：

1. 挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜； 2. 取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；

3. 于4℃离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水重悬，可换成较小的离心管； 4. 加入1ml，pH7.5，10×TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10×LiAc，旋转摇匀，于30度轻轻摇动45min；

5. 再加入0.4ml 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min； 6. 于4℃离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤；

7. 2.5ml冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）； 8. 每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70℃冰箱保存。 电转化：

1．向感受态细胞中加入约5～10ug（体积小于10 ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置5min；

2．擦干电转杯，电击，电击参数：1.5KV，25uF，200欧姆；

3．立即加入1ml 预冷的山梨醇，转

重组乙肝疫苗接种告知书（酿酒酵母）

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种传染病，通过血液、体液和母婴传播。急性肝炎临床症状有疲倦、厌食、恶心、呕吐、皮肤巩膜黄染等。大多数的急性乙肝感染可完全康复，但部分人特别是婴幼儿可成为慢性乙肝携带者，随后可能发展成为慢性肝病、肝硬化或肝癌。我国是乙肝高发国，目前有1. 2亿人携带慢性乙肝病毒，慢性乙肝患者约3000万人。乙肝病毒在体内不断复制使得肝脏发生炎性病变，肝细胞受损，而且还可能恶变成肝硬化和肝癌，威胁生命。在我国，71%的肝癌是由乙型肝炎发展而来的。 接种乙肝疫苗是预防乙肝最有效的手段。本疫苗由重组酿酒酵母表达的乙肝病毒表面抗原经纯 化，加入佐剂吸附后制成，抗原含量为10ug/0. 5ml。

【接种对象】可以在出生后任何年龄段使用，推荐用于处于乙肝病毒感染风险较高的人群，如从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员。

【接种程序】全程接种3针，接种时间分别为0、l、6月，即第一针在出生后24小时内接种；第二针在第一针接种后1个月接种；第三针在第一针接种后6个月接种。

【接种反应】常见局部不良反应有注射部位疼痛、红斑和肿胀，大多轻微，一般在兔疫接种2天后消失。常见和偶见的全身不

北京农业职业学院毕业论文 《酿酒酵母的活化及扩大培养条件的探究》

北 京 XXXXXX 毕 业 论 文 论文（设计）题目：酿酒酵母的活化及扩大培养 条件的探究 系别： （食品与生物工程系） 专业： （绿色食品生产与检验专业） 班级： （XXXX班级） 学生姓名（学号）： XXX（XX ） 指导教师姓名： XXX 论文完成日期： 200 年 5 月 10日 0 北京农业职业学院毕业论文 《酿酒酵母的活化及扩大培养条件的探究》

摘要

酵母的实验室扩大培养是将实验室保存的纯种酵母活化、逐步增殖，达到下阶段车间扩培需要的数量，供生产使用的酵母培养过程。实验以红枣汁为培养基，研究酵母在不同活化时间、温度、pH、摇床转速条件下的生长情况。结果表明：枣醋中酵母活化及扩大培养的最适条件为：生长时间在24h，温度控制在30℃左右，pH值为5，摇

·42·

2010No．9SerialNo．222

ChinaBrewing

ResearchReport

酿酒酵母和马克斯克鲁维酵母原生质体制备与再生研究

包伟霞，王静洁，王晓斐，陈由强，许旭萍*

（农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室福建师范大学生命科学学院，福建福州350108）

摘要：研究了菌龄、酶浓度、渗透压稳定剂及酶解时间等因素对酿酒酵母菌（Saccharomycescerevisiae）和马克斯克鲁维酵母菌

（Kluyveromycesmarxianus）原生质体形成与再生的影响。实验结果表明，原生质体形成与再生的最佳条件为酿酒酵母菌龄9h，采用1.5%蜗牛酶+0.5%纤维素酶，30℃酶解70min；马克斯克鲁维酵母菌龄8h，采用1.0%蜗牛酶+0.5%纤维素酶，30℃酶解时间50min；配制酶液时渗透压稳定剂采用4%氯化钠高渗缓冲液，在稀释和配制再生培养基时则采用15%的蔗糖高渗缓冲液。关键

词：酿酒酵母；马克斯克鲁维酵母；原生质体的形成与再生

文献标识码：A

文章编号：0254-5071（2010）09-0042-03

中图分类号：TS261.1

ProtoplastformationandregenerationofSaccharo

Ｙ１５３０９６４硕士学位论文转基因酿酒酵母产番茄红素的研究ＳｔｕｄｙｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａａｎｄｌｙｃｏｐｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ学科专业：生物化学与分子生物学研究生；牛昆指导教师：季静教授天津大学化工学院二零零八年六月摘要番茄红素是存在于番茄、西瓜、红色萄萄柚等果实中的一种天然类胡萝卜素。１９９５年开始国外对番茄红素的功能性研究引起重视，并确认番茄红素具有较强的防癌和抗癌功能，尤其具有预防前列腺癌的功能。效果优于Ｂ一胡萝卜素。酿酒酵母遗传背景清楚，胞内含有番茄红素合成前体比较丰富，而且可以方便的应用于食品工业，在转基因方法产番茄红素的领域中，酿酒酵母因其诸多优点，而得到越来越多的重视和应用。目前应用于转基因酵母的类胡萝卜素合成酶基因均来源于细菌和真菌，本文首次将来自于药用草原黄花龙胆的类胡萝卜合成酶基因：八氢番茄红素合成酶基因（ｐｓｙ）√＼氢番茄红素脱氢酶基因ｐｄｓ、ｚｄｓ）。质粒ＹＣｐ２２－Ｇａｌ－ｐｓｙＹＥｐｌａｃ１９５－ｐｄｓ、ＹＥｐｌａｃｌ８１－ｚｄｓ（质粒为本实验室构建）经验证后逐一转入酿酒酵母ｗ３０３菌株中，并得到了阳性转化子。对挑取的阳性转化子进行连续三次的发酵实验，得到了遗传性

ReductionofMethodAtmosphericofMethanolandRoom-TemperatureinBrewedWinebyPlasmatheUseMaltwithandDifferenttheCombinationAdjuncts

OptimizationofMing-HuaLiang,Ying-JieLiang,Jiang-YanChai,Shi-ShuiZhou,andJian-GuoJiang

Abstract:

Methanol,oftengeneratedinbrewedwine,ishighlytoxicforhumanhealth.Todecreasethemethanol

contentofthebrewedwine,atmosphericandroom-temperatureplasma(ARTP)wasusedasanewmutagenesistooltogenerateamutantofSaccharomycescerevisiaewithlowermethanolcontent.Headspacegaschromatographywasusedtodeterminetheidentityandconcent

ReductionofMethodAtmosphericofMethanolandRoom-TemperatureinBrewedWinebyPlasmatheUseMaltwithandDifferenttheCombinationAdjuncts

OptimizationofMing-HuaLiang,Ying-JieLiang,Jiang-YanChai,Shi-ShuiZhou,andJian-GuoJiang

Abstract:

Methanol,oftengeneratedinbrewedwine,ishighlytoxicforhumanhealth.Todecreasethemethanol

contentofthebrewedwine,atmosphericandroom-temperatureplasma(ARTP)wasusedasanewmutagenesistooltogenerateamutantofSaccharomycescerevisiaewithlowermethanolcontent.Headspacegaschromatographywasusedtodeterminetheidentityandconcent