免疫共沉淀

免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞，3000rpm，5min，离心，去上清；或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温，冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗，重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞，现加1000XAL（一般核质均分布的建议使用NP-40，核内分布的建议使用High Salt ，只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer），加入1ml Buffer (106-107个细胞)，4℃,30min（在功能旋转仪上旋转裂解）。 4 12000rpm，15min，离心取上清（若上清仍浑浊，可重复离心1-2次）50ul上清作为 Input，其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug（可根据抗体效价酌情增减），4℃,旋转2-4h，

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数，取（N+1~2）*1ug，用小量裂解buffer

稀释，再均分到各样品中，以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间，准备Protein G（一个反应20ul纯beads，如果beads原管中液体和beads体积比是1:1，一个样品取总体积40ul，多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物）

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

习题 6（沉淀平衡一）

1.解释下列现象。

a. CaF2在 pH＝3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大；

b. Ag2CrO4在0.0010 mol·L1AgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L1 K2CrO4溶液中

--

的溶解度小；（参考答案） 答：

a. 这是由于酸效应的影响。因为

,随着[H]的增大，

+

也增大，

也随之增大，即溶解度变大。所以，CaF2在 pH＝3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大。

b. Ag2CrO4的pKsp=11.71

Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度s1:

-1

-1

Ag2CrO4在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度s2:

-1

-1

所以， s1< s2，即Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度小。

2.某人计算M(OH)3沉淀在水中的溶解度时，不分析情况，即用公式Ksp==[ M3+][ OH]3计算，

-

已知Ksp=1×1032，求得溶解度为4.4×109 mol·L1。试问这种计算方法有无错误？为什么？

---

（参考答案） 答： 错误。

因为按此方法求得[OH-]=4×10 mol·L，即p

无机及分析化学

塔里木大学化学与化工系

第9章

沉淀平衡和沉淀滴定法

Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration

本章内容§9.1§9.2

溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动

§9.3§9.4

影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素

§9.5§9.6

沉淀的形成条件沉淀分析法

§9.1 溶度积和溶解度实验现象：

实验步骤：

几滴 KI溶液

在上层清液中滴 加KI溶液后，有 黄色沉淀产生。

静置，待上层 液体变澄清

结论解释：PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)

将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中，震荡。

PbI2

PbI2在水中溶解平衡

Pb2+ l-

尽管PbI2固体难溶于水， 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液，同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来，当 这两个过程速率相等时， Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为：

溶解

PbI2(s)沉淀

Pb2+(aq) + 2

实验一 自由沉淀实验（累积沉泥量法）

一、实验目的

本实验采用测定沉淀柱底部不同历时累计沉泥量方法，找出去除率与沉速的关系。通过本实验希望达到下述目的：

1.初步了解用累计沉泥量方法计算颗粒物杂质去除率的原理和基本实验方法。 2.加深理解沉淀的基本概念和颗粒物的沉降规律。

二、实验原理

累计沉泥量测定法的具体计算分析如下： 假定沉降颗粒具有同一形状和密度，由此得出两个关系式：

颗粒沉速us与颗粒重量m的函数关系式：

m??（us）m?au?Sb1??u1??S颗粒沉速us与颗粒数目n的函数关系式：

n??（us）n?式中,a，b，?，?是系数,与颗粒形状、密度,水的粘滞性等因素有关,其中

?，?大于1。

由以上二式可得出水样中原始悬浮物浓度C0：【重量g，数目n/mL，浓度=m×n（g/mL）】

ab????1umax0????1水中等于、大于沉速uS，的颗粒浓度为C?us：

umaxabab??????1????1???1C?us??abu?du?(u?u)?C?u?ssmaxs0sus????1????1ab?A， 令 ????1?B则：

(????1)C0C0??mdn?

沉淀池

沉淀池是利用重力沉降作用将密度比水大的悬浮物颗粒从水中去除的处理构筑物，是污水处理中应用最广泛的处理单元之一，可用于污水的一级处理、生物处理的后处理以及深度处理。按水流方向划分，沉淀池可分为平流式、辐流式和竖流式三种，还有根据“浅层理论”发展出来的斜板（管）沉淀池。

沉淀池包括进水区、沉淀区、缓冲区、污泥区和出水区五个部分。进水区和出水区的作用是使水流均匀地流过沉淀池，避免短流和减少紊流对沉淀产生的不利影响，同时减少死水区、提高沉淀池的容积利用率；沉淀区也称澄清区，即沉淀池的工作区，是可沉淀颗粒与污水分离的区域；污泥区是污泥贮存、浓缩和排出的区域；缓冲区则是分隔沉淀区和污泥区的水层区域，保证已经沉淀的颗粒不因水流搅动而再行浮起。 1、 基本概念

（1） 沉淀池的表面水力负荷，即沉淀池单位时间单位面积所承

受的水量，单位是m3/(m2.h)。根据表面水力负荷可以确定沉淀池澄清区的面积和有效水深。

沉淀池的水面上升流速和其水力负荷在数值上是相同的，但两者的单位和意义上不同，上升流速的单位是m/h。比如说在竖流式沉淀池中，只有沉淀速度大于沉淀池水面水面上升流速的杂质颗粒才能在沉淀池中去除，而沉降速度等于或小于沉淀池水面上升流速的杂质颗粒会随

实验一 自由沉淀实验（累积沉泥量法）

一、实验目的

本实验采用测定沉淀柱底部不同历时累计沉泥量方法，找出去除率与沉速的关系。通过本实验希望达到下述目的：

1.初步了解用累计沉泥量方法计算颗粒物杂质去除率的原理和基本实验方法。 2.加深理解沉淀的基本概念和颗粒物的沉降规律。

二、实验原理

累计沉泥量测定法的具体计算分析如下： 假定沉降颗粒具有同一形状和密度，由此得出两个关系式：

颗粒沉速us与颗粒重量m的函数关系式：

m??（us）m?au?Sb1??u1??S颗粒沉速us与颗粒数目n的函数关系式：

n??（us）n?式中,a，b，?，?是系数,与颗粒形状、密度,水的粘滞性等因素有关,其中

?，?大于1。

由以上二式可得出水样中原始悬浮物浓度C0：【重量g，数目n/mL，浓度=m×n（g/mL）】

ab????1umax0????1水中等于、大于沉速uS，的颗粒浓度为C?us：

umaxabab??????1????1???1C?us??abu?du?(u?u)?C?u?ssmaxs0sus????1????1ab?A， 令 ????1?B则：

(????1)C0C0??mdn?

试验二 成层沉淀和压缩沉淀实验

（一） 实验原理

该实验是研究浓度较高的悬浮颗粒的沉淀规律。沉淀过程中有明显的清水和浑水分界面，称为浑液面，浑液面缓慢下沉，直到泥沙最后完全压实为止。

颗粒间的絮凝过程越好，交界面就越清晰，清水区的悬浮物就越少。

在沉淀过程中，清水区高度逐渐增加，压实区高度也逐渐增加，而等浓度区的高度则逐渐减小，最后不复存在。变浓度区的高度开始是基本不变的，但当等浓度消失后，也就逐渐消失。变浓度区消失后，压实区仍然继续压实，直到这一区的悬浮物达到最大密度为止。当沉降达到变浓度区刚消失的位置时，称为临界沉降点(C点)。

如以交界面为纵坐标，沉淀时间为横坐标，可得交界面沉降过程曲线。曲线a-b为上凸的曲线，可解释为颗粒间的凝聚，由于颗粒凝聚变大，使下降速度逐渐变大。b-c段为直线，表明交界面等速下降。曲线c-d段为下凹的曲线，表明交界面下降速度逐渐变小。此时B区和C区已消失，C点称为沉降临界点，交界面下的浓度均大于C。c-d段表示B、C、D三区重合后，沉淀物压实的过程。随着时间的增长，压实变慢，最后压实到高度H?为止。 （二） 实验目的

1. 通过实验掌握成层沉淀和压缩沉淀的过程和规律； 2. 绘制成层沉淀和压缩沉淀的试验曲线。

无机及分析化学

塔里木大学化学与化工系

第9章

沉淀平衡和沉淀滴定法

Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration

本章内容§9.1§9.2

溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动

§9.3§9.4

影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素

§9.5§9.6

沉淀的形成条件沉淀分析法

§9.1 溶度积和溶解度实验现象：

实验步骤：

几滴 KI溶液

在上层清液中滴 加KI溶液后，有 黄色沉淀产生。

静置，待上层 液体变澄清

结论解释：PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)

将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中，震荡。

PbI2

PbI2在水中溶解平衡

Pb2+ l-

尽管PbI2固体难溶于水， 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液，同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来，当 这两个过程速率相等时， Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为：

溶解

PbI2(s)沉淀

Pb2+(aq) + 2