圣湘96人份提取试剂

X X X 检验科 临床微生物实验室 DL-96细菌测定系统 标准操作规程 编号：WSW-SOP-1 日期： 年 月 版号： 第 1页，共4页

【目的】

规范DL-96细菌测定系统随机体外诊断试剂操作规程，保证检验质量。 【该SOP变动程序】

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【原理】

试剂板由生化反应孔和抗菌药物MIC测定孔组成。在生化反应孔中加入细菌悬液，经35-37℃孵育，在细菌代谢作用下生化反应直接颜色变化或经加入显色剂后产生颜色变化；抗菌药物MIC采用微量肉汤稀释法，加入还有细菌的MH肉汤培养基，经35-37℃孵育，根据试验孔是否出现浑浊（沉淀）确定细菌是否生长。测定系统采用比色法对各项生化反应进行结果判定，根据细菌生化反应的概率来完成细菌的鉴定；测定系统通过比浊法对抗生素进行MIC半定量测定分析MIC值。

【操作程序】

1 使用本试剂板的基本要求：

1.1无特殊营养要求的革兰氏阳性菌、革兰阴性菌和真菌等病原菌 1.2 18-24小时分离培养的单个纯菌落（或纯培养物）。 2 随机试剂板的选择：

2.1根据待测菌的培养特性、菌落特征、氧化酶实验、触酶

E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)

步骤

A． 真核细胞和组织

自己需要的材料：

β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。 材料的最佳量

想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。 细胞的步骤

1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用

枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。

a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。 b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器

里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。 c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or

提取RNA中所用各种试剂的作用：

1、氯仿：

氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA 的亲水基团，与水相接触。所以不要剧烈震荡。

氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通 过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提 完之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提 掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作。 2、

异丙醇：异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受

一、试剂盒打开后需要准备的工作

1、Proteinase K（蛋白酶K）的溶解

①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解

②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100ul～200ul

③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存，使用期限为12个月 2、组织抑制剂（Inhibitor Removal buffer）的调配

加入20ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩 3、洗液（wash buffer）的调配

加入80ml无水乙醇（absolute ethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩

二、组织DNA提取（试剂盒）

1、组织样品处理与消化

①将采集来的样品剪碎（≤0.1cm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3

个小时使其充分消化。

2、DNA提取

①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴

锅中10分钟。

②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g一分钟。 ③倒掉底液，加500ul组织抑制剂Inhibitor

酚氯仿抽提时一些试剂的作用原理

酚氯仿法提取DNA的一些试剂的作用

酚氯仿法提取DNA的原理

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？

使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？

用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

原理：

酚氯仿抽提时一些试剂的作用原理

酚氯仿法提取DNA的一些试剂的作用

酚氯仿法提取DNA的原理

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？

使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？

用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

原理：

中 共 贵 州 省 委 组 织 部

黔人社厅通?2009?96号

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文件 贵州省人力资源和社会保障厅

贵州省2009年选聘高校毕业生到村任职

工作有关事项的通知

各市（州、地）、县（市、区、特区）党委组织部、人事局、人事劳动和社会保障局；省直有关部门;各普通高等院校：

根据?中共贵州省委 贵州省人民政府印发?关于鼓励高校毕业生到基层就业创业的意见?的通知?（黔党发?2009?6号）和中共贵州省委办公厅 贵州省人民政府办公厅转发?省委组织部、省教育厅、省财政厅、省人事厅、省劳动和社会保障厅?关于选聘高校毕业生到村任职工作的实施方案??（黔委厅字?2008?37号）通知的要求，结合我省今年引导和鼓励高校毕业生面向基层就业工作实际，现就2009年选聘高校毕业生到村任职工作有关事项通知如下。

一、选聘对象、条件和职位

（一）选聘对象。选聘对象为30岁以下（1979年1月1日以后生）应届和往届毕业的普通高校（含硕士、博士研究生

- 1 -

培养单位，下同）统招全日制大专（含大专）以上学历的毕业生，重点是应届毕业生和毕业2年以内的本科生、研究生，原则上为中共党员（含中共预备党员），大学期间担任

实用文档

HNPR-2014-13012

湘人社发〔2014〕48号

湖南省人力资源和社会保障厅

关于印发《湖南省促进民办职业培训

实施办法（修订）》的通知

各市州人力资源和社会保障局，各有关单位:

现将修订后的《湖南省促进民办职业培训实施办法》印发给你们，请遵照执行。

湖南省人力资源和社会保障厅

2014年9月12日

（此件主动公开）

湖南省人力资源和社会保障厅办公室 2014年9月17日印发

文案大全

实用文档

湖南省促进民办职业培训实施办法（修订）

第一章总则

第一条根据《中华人民共和国民办教育促进法》、《中华人民共和国职业教育法》、《中华人民共和国行政许可法》、《中华人民共和国民办教育促进法实施条例》和《湖南省实施<中华人民共和国民办教育促进法>办法》等法律、法规，结合我省实际，修订制定本办法。

第二条在本省行政区域内面向社会举办实施职业培训的民办职业培训机构，适用本办法。

第三条国家与地方管理机构以外的社会组织和具有政治权力以及完全民事行为能力的个人，利用非国家财政性经费，可以在本省境内申请举办民办职业培训机构。

第四条民办职业培训机构的举办要适应本区域社会经济发展的需要和劳动力市场的需求，有利于教育培训资源的合理布局和优化配置，可以根据实际情况分

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HNPR-2014-13012

湘人社发〔2014〕48号

湖南省人力资源和社会保障厅

关于印发《湖南省促进民办职业培训

实施办法（修订）》的通知

各市州人力资源和社会保障局，各有关单位:

现将修订后的《湖南省促进民办职业培训实施办法》印发给你们，请遵照执行。

湖南省人力资源和社会保障厅

2014年9月12日

（此件主动公开）

湖南省人力资源和社会保障厅办公室 2014年9月17日印发

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湖南省促进民办职业培训实施办法（修订）

第一章总则

第一条根据《中华人民共和国民办教育促进法》、《中华人民共和国职业教育法》、《中华人民共和国行政许可法》、《中华人民共和国民办教育促进法实施条例》和《湖南省实施<中华人民共和国民办教育促进法>办法》等法律、法规，结合我省实际，修订制定本办法。

第二条在本省行政区域内面向社会举办实施职业培训的民办职业培训机构，适用本办法。

第三条国家与地方管理机构以外的社会组织和具有政治权力以及完全民事行为能力的个人，利用非国家财政性经费，可以在本省境内申请举办民办职业培训机构。

第四条民办职业培训机构的举办要适应本区域社会经济发展的需要和劳动力市场的需求，有利于教育培训资源的合理布局和优化配置，可以根据实际情况分

?

咽拭子DNA快速提取试剂盒使用说明书?

预期用途?

本试剂盒可用于提取咽拭子样本中人上皮细胞、细菌和真菌的DNA。本试剂盒提供的裂解液能快速有效裂解细胞，裂解产物能够直接用于PCR扩增，并且灵敏度高，特异性强，省去了繁琐的核酸提取与纯化步骤，实现快速PCR检测。对于病原微生物检测，流行病学调查、菌群调查及其它一些以口腔微生物为样本的核酸检测都非常适用。?

?

组成成分?

咽拭子DNA快速提取试剂盒?

货号?MKNJGNSWDL007?

规格?25?tests?FastLyse?L1?

5?ml?

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储存条件?

‐20?C储存。?

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样本要求?

用专用采样拭子，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。?

*以上标本可立即用于测试，也可放置在‐20℃条件下长期保存。?

?

操作步骤?

1. 待检拭子样本直接置于200?μl?FastLyse?L1中，充分搅拌洗脱拭子上的样本，在管壁挤压数次后弃拭子；?

仅供试用?

2. 吹打混匀，95?℃孵育5?min；?

3. 孵育后的样本12,?000?rpm离心2~3?min，上清可直接用于PCR扩增，上清如不立即使用，需置于‐20℃长期保存。?

*推荐使用咽拭