病原菌的分离与纯化实验报告

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普通植物病理学

实验十七、病原菌的分离培养和纯化

一、目的要求

(1)了解分离与纯化微生物的基本原理及方法。

(2)掌握倒平板的方法和组织分离、稀释分离、平板划线分离的基本操作技术。

(3)掌握在平板、斜面及液体培养基上培养病原菌及观察其培养性状的方法。

二、基本原理植物病原菌的分离培养，是植物病理实验室工作中的基本技能。为了获得某微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件要求不同，而供给它们适宜的生活条件，即让病原菌生活在适宜的培养基上，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而得到纯菌株。植物病原真菌的分离方法主要有组织分离法和稀释分离法两种。最常用的方法是组织分离法，而稀释分离法主要用于病组织上产生大量孢子的病原真菌的分离。病原细菌的分离方法以划线分离法为最常用，在有些情况下也采用稀释分离法。为了获得分离菌的纯培养，必须要进行分离菌的纯化，纯化的方法类似于分离工作中采用的稀释分离法或划线分离法。

三、材料、仪器与用具

1．材料(依当地情况进行选择，下列材料供参考)

(1)稻瘟病叶、病节、病穗颈(pyricularia orycae)。

(2)玉米大斑病叶(exserohilum turcicum)。

(3)玉米弯孢菌

第五章 常见病原菌

一、 填空题

1. 根据色素、生化反应的不同可将葡萄球菌分为__金黄色__葡萄球菌、__表皮__葡萄球菌和__腐生__葡萄球菌。

2. 链球菌感染后引起的超敏性反应疾病有__风湿热___和___急性肾小球肾炎__。

3. 脑膜炎奈瑟菌呈__肾或豆_形，通过__飞沫__传

播，引起的疾病是___流行性脑脊髓膜炎__。 4. 人患肠热病后可获得___牢固__免疫力，其免疫以__细菌免疫__为主。 5. 霍乱弧菌有单根__鞭毛_，可作穿梭氧运动，生长最适宜的PH__8.4~9.2__。

6. 常见致病的厌氧芽孢梭菌有__破伤风梭菌_、__产气荚膜梭菌__和__肉毒梭菌__。

7. 对受伤机会较多的人群

可定期接种破伤风__类毒素__，对伤口较深或有泥土污染者应肌注破伤风__抗毒素__进行紧急预防。

8. 在牛奶培养基中有汹涌发酵现象的细菌是__产气荚膜梭菌__。

9. 结核分枝杆菌革兰染色不易染色，常用__抗酸__染色，呈__红_色。

10. 检测机体对结核是否具有免疫力，常用的体内皮肤试验是___结核菌素

（PPD）试验__。

11. 麻风分枝杆菌的传播方式是__皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触__，引起__麻风___。

12. 铜绿

第五章 常见病原菌

一、 填空题

1. 根据色素、生化反应的不同可将葡萄球菌分为__金黄色__葡萄球菌、__表皮__葡萄球菌和__腐生__葡萄球菌。

2. 链球菌感染后引起的超敏性反应疾病有__风湿热___和___急性肾小球肾炎__。

3. 脑膜炎奈瑟菌呈__肾或豆_形，通过__飞沫__传

播，引起的疾病是___流行性脑脊髓膜炎__。 4. 人患肠热病后可获得___牢固__免疫力，其免疫以__细菌免疫__为主。 5. 霍乱弧菌有单根__鞭毛_，可作穿梭氧运动，生长最适宜的PH__8.4~9.2__。

6. 常见致病的厌氧芽孢梭菌有__破伤风梭菌_、__产气荚膜梭菌__和__肉毒梭菌__。

7. 对受伤机会较多的人群

可定期接种破伤风__类毒素__，对伤口较深或有泥土污染者应肌注破伤风__抗毒素__进行紧急预防。

8. 在牛奶培养基中有汹涌发酵现象的细菌是__产气荚膜梭菌__。

9. 结核分枝杆菌革兰染色不易染色，常用__抗酸__染色，呈__红_色。

10. 检测机体对结核是否具有免疫力，常用的体内皮肤试验是___结核菌素

（PPD）试验__。

11. 麻风分枝杆菌的传播方式是__皮肤、黏膜、呼吸道及密切接触__，引起__麻风___。

12. 铜绿

土壤中放线菌的分离和纯化实验

一、实验目的

1、制作

MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。 4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程； 5、 掌握高氏一号培养基的配制方法；

6、 复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料

高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、

显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀

三、实验原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）

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或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤

1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制

土壤中放线菌的分离和纯化实验

一、实验目的

1、制作

MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。 4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程； 5、 掌握高氏一号培养基的配制方法；

6、 复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料

高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、

显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀

三、实验原理

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）

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或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤

1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制

分枝菌杆核杆菌

结细菌简结介核枝杆菌，俗称分结杆核菌，引起结核病 的病是原菌 可侵犯全。各身器，官以但结核肺最为见多结。核 病至今为重要仍传的染病。计估界人口中1世3感 /结染分枝杆核菌据W。H报道，O每约有年800万新病 发例，生少有至30万人死于0病该。我建国国前 亡率死200达-300人1/万，居各种0疾死亡原病因之 首建国，人后生民水活提平高卫生状态，善改，特 是别开展了防群治群，儿童遍接普种卡苗，介核结 病的发率病死和率亡大为低降。一、

物学生性状态染色形：、结1核枝杆菌为分细略带弯长曲杆的 ；细胞菌脂壁质含较量高约，占重的6干%; 0大有分枝菌量包酸围在聚肽糖的层外面可， 响染料影穿入的，故分枝杆一菌般用抗染酸色:法 以% 石5炭复红酸温染加色后以染上，可用但 3盐酸乙%不易醇脱色―是由―于石酸炭复红分与 菌酸枝固牢结合成复物。合再加若用美蓝复，则分染 枝菌杆红色，而其他细呈和菌景背的中物被质精酒脱色 为蓝染色。

2 、荚膜：无鞭，毛芽无孢，年近发现结核分 杆菌枝细胞在壁尚外一层荚膜有。一 因般制片遭受破时而坏不易到。若看制在备电 标镜本定前用明固胶处，理防可止膜 荚水收缩。在电脱下镜看可到菌体外有层一 较的厚明区，即荚透膜荚，对结膜分

综合性实验一 脓汁和粪便标本中病原菌的检测

从临床标本中分离细菌的目的是为了查找与疾病有关的病原菌，这对于临床治疗及预后调查是很有价值的。所以，在分离时应掌握以下原则，以便指导检出病原菌，避免漏诊误诊。 1．了解微生物在人体的分布。人体的很多部位与外界相通，存在正常菌群，分离时应注意 标本中的菌群是正常菌群的污染，还是致病菌。另外，机体的某些部位(如血液、骨髓)是 无菌的，如检出细菌，应视为致病菌。

2．了解标本来源及临床情况，以便有目的地检出病原菌。

3．根据标本来源和可能存在的病原菌确定选用各种分离培养基，以提高检出率。如血平板 可用于化脓性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌等的分离。

常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、 假单胞菌、流感杆菌等。脓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有 典型形态的菌体，芽胞有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基(如SS、伊红美蓝平板，碱性蛋白胨水)，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。粪便标本中常见的病原菌有 志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。粪便

很专业的哦,有需要的可以下载看看

第31卷第8期2009年8月

中国预防兽医学报

ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine

Vol.31，No.8Aug.2009

5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定

来航线，傅艳萍，赵卉琳，朱

华

(西北农林科技大学生命科学学院/资源环境学院，陕西杨凌712100)

摘要：为寻找新的抗菌微生物，本研究从西北部分地区盐渍土中分离到5株具有拮抗作用的放线菌1202、

02-F-17、66J03、3501及3010，其代谢产物对引起鸡大肠杆菌病的大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)和引起牛隐性乳房炎的无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)等多种动物病原菌均有较强的抑菌作用。通过对其进行形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究，初步确定其分类地位分别为：5株菌均属链霉菌，其中1202与戈壁三素链霉菌(Streptomycesgobitricini)最接近，02-F-17与晶体链霉菌(Streptomycescavis-

cabies)相近，66J03与易变链霉菌(Streptomycesmutabilis)相近

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第31卷第8期2009年8月

中国预防兽医学报

ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine

Vol.31，No.8Aug.2009

5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定

来航线，傅艳萍，赵卉琳，朱

华

(西北农林科技大学生命科学学院/资源环境学院，陕西杨凌712100)

摘要：为寻找新的抗菌微生物，本研究从西北部分地区盐渍土中分离到5株具有拮抗作用的放线菌1202、

02-F-17、66J03、3501及3010，其代谢产物对引起鸡大肠杆菌病的大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli)和引起牛隐性乳房炎的无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)等多种动物病原菌均有较强的抑菌作用。通过对其进行形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列等多相分类研究，初步确定其分类地位分别为：5株菌均属链霉菌，其中1202与戈壁三素链霉菌(Streptomycesgobitricini)最接近，02-F-17与晶体链霉菌(Streptomycescavis-

cabies)相近，66J03与易变链霉菌(Streptomycesmutabilis)相近

产淀粉酶菌株的分离纯化

一、 实验目的

1. 掌握产淀粉酶菌种的分离纯化的原理和方法技术； 2. 巩固十倍稀释法。 二、 实验原理

土壤是微生物生活的大本营，是寻找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。因此本实验选择从土壤中分离出产淀粉酶菌种，再进行纯培养。主要运用富集培养技术，稀释涂布平板法和平板划线分离法及无菌操作技术获得我们所需要的产淀粉酶菌种。

淀粉酶作用于淀粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘的显色反应能力，不再与碘结合，从而形成透明圈。产淀粉酶菌株在选择培养基上培养后，会水解淀粉形成水解圈，加碘液染色后，水解圈尤为明显。 三、 实验材料 1. 菌种：

从自然界筛选获得的淀粉酶产生菌种 2. 土壤样品：

从栽种土豆的菜园中采集土壤样品 3. 培养基：

淀粉液体培养基（50mL）： 蛋白胨 0.5g，NaCl 0.25g，牛肉膏0.25g，可溶性淀粉 0.1g，蒸溜水 50mL。

淀粉琼脂培养基 (200mL)： 蛋白胨 2g，NaCl 1g，牛肉膏 1g，可溶性淀粉 0.4g，蒸溜水 200mL，琼脂 3-4g。

牛肉膏蛋白胨培养基 (200mL)： 蛋