实验室常用气瓶保存应按气体特性

实验室日常使用氮气、氢气、氧气、氦气、乙炔气体性质、气瓶使用以及紧急处理,及案例分析。

分析中心安全专题讲座

实验室气瓶安全编辑：君钦子兰

实验室日常使用氮气、氢气、氧气、氦气、乙炔气体性质、气瓶使用以及紧急处理,及案例分析。

主要内容 气瓶基础知识 常用气体基础知识 高压气瓶使用原则 气瓶使用案例分析

实验室日常使用氮气、氢气、氧气、氦气、乙炔气体性质、气瓶使用以及紧急处理,及案例分析。

一、气瓶基础知识气瓶使用现状 气瓶是我国数量最多的特种设备，据统计2006我国 在用气瓶总量已经超过1.3亿瓶，近年大约以每年 7%的速度在增加。 特种设备：特种设备是指涉及生命安全、危险性较 大的锅炉、压力容器(含气瓶，下同)、压力管道、 电梯、起重机械、客运索道、大型游乐设施。其中 锅炉、压力容器(含气瓶)、压力管道为承压类特 种设备；电梯、起重机械、客运索道、大型游乐设 施为机电类特种设备。

实验室日常使用氮气、氢气、氧气、氦气、乙炔气体性质、气瓶使用以及紧急处理,及案例分析。

气瓶使用现状 作为一种移动式压力容器，虽然容量并不很大，主 体结构也不十分复杂，但是它用途广泛、用量巨大， 而且与一般工业设备相比，气瓶的事故率较高，事 故危害也较为

压力容器的分类

一、按压力容器的设计压力（P）分为低压、中压、高压、超高压四个压力等级，具体划分

如下：

1、低压（代号L）0.1MPa≤P<1.6MPa； 2、中压（代号M）1.6MPa≤P<10MPa；

3、高压（代号H）10MPa≤P<100MPa； 4、超高压（代号U）P≥100 MPa 。

二、按压力容器在生产工艺过程中的作用原理分为：

1、反应压力容器主要是用于完成介质的物理、化学反应的（代号R），如反应器、反应釜等；

2、换热压力容器主要是用于完成介质的热量交换的（代号E），如管壳式余热锅炉、热

交换器、蒸发器、加热器、消毒锅等；

3、分离压力容器主要是用于完成介质的流体压力平衡缓冲和气体净化分离的（代号S）、如分离器、过滤器、缓冲器、干燥塔、分汽缸、除氧器等；

4、储存压力容器主要是用于储存、盛装气体、液体、液化气体等介质的（代号C，其中球罐代号B），如各种型式的储罐。

在一种压力容器中，如同时具备两个以上的工艺作用原理时，应按工艺过程中的主要作用来划分品种。

三、压力容器按照设计压力P和容积V，结合容器的工艺功能和其中物料的危险性，划分为

三类：

1、下列情况之一的，为第三类压力容器：

（1） 高压容器；

（2） 中压容器（仅限毒性程度为极度和高度危害介质）；

（3） 中压储存容器（仅限易燃或毒性程度为中度危害介质，且PV乘积大于10Mpa.m3）；

常见气体制备

1、气体实验装置的设计

（1）装置顺序：制气装置→净化装置→反应或收集装置→除尾气装置 （2）安装顺序：由下向上，由左向右

（3）操作顺序：装配仪器→检验气密性→加入药品→进行实验 2、气体发生装置的类型

（1）设计原则：根据反应原理、反应物状态和反应所需条件等因素来选择反应装置。 （2）装置基本类型： 装置类型 装置 示意图 固体反应物（加热） 固液反应物（不加热） 固液反应物（加热） 主要仪器 典型气体 操作要点 O2、NH3、CH4等 H2、CO2、H2S等。 Cl2、HCl、CH2=CH2等 （l）试管口应稍向下倾斜，以防止产生的水蒸气在管口冷凝后倒流而引起试管破裂。 （2）铁夹应夹在距试管口 l/3处。 （3）胶塞上的导管伸入试管里面不能太长，否则会妨碍气体的导出。 （4）若用排水法收集气体，停止加热前，应先将导气管从水中取出。 传统装置 （1）可通过分液漏斗来控制液体用量和气体的生成速率。 （2）分液漏斗可改用长颈漏斗，但漏斗颈的下口应伸入液面以下，否则起不到液封的作用。 （3）反应容器可视制气量的多少选择试管、广口瓶、烧瓶等。 （1）可通过分液漏斗来控制液体用量和气体的生成速率。 （2）若被加热

蛋白质常用buffer

实验室常用溶液配方

PBS(1×)(1L) 8.0g NaCl

0.2g KCl

1.44g Na2HPO4

(3.6283g Na2HPO4.12H2O

2.716g Na2HPO4.7H2O)

0.24g KH2PO4

80ml H2O

调至pH 7.4, add Milli-Q to 1L

Running Buffer(1×)(1L)

3g Tris

14.4g Gly

1g SDS

Add ddH2O to 1L

Transfer Buffer(1×)(1L)

5,8g Tris

2.9g Gly

0.37 SDS

200ml Methanol

Add ddH2O to 1L

TBE (5×)(1L)

54g Tris

27.5g Boric acid

20ml 0.5M EDTA (pH 8.0)

Add ddH2O to 1L

NP40 Lysis Buffer

5ml 3M NaCl

2.5ml 1M Tris-HCl (pH 6.8)

2.5ml 1M Tris-HCl (pH 8.0)

1ml NP40

Add ddH2O

一、血液检查：

（一）红细胞计数和血红蛋白测定

红细胞：男（ 4.0~5.5 ）×10 12 /L血红蛋白：男120~160g/L

女（ 3.5~5.0 ）×10 12/L女110~150g/L

新生儿（ 6.0~7.0 ）×10 12 /L新生儿170~200/L

临床意义：

1.红细胞及血红蛋白减少：婴幼儿、 15 岁以前的儿童、部分老年人、妊娠中晚期；各种原因所致的贫血。

2.红细胞及血红蛋白增多：剧烈呕吐、大面积烧伤后；高原、剧

烈运动；阻塞性肺气肿、发绀型先天心脏病及红细胞增多症等。（二）白细胞计数及白细胞分类计数

白细胞：成人（ 4~10 ）×10 9/L ；新生儿（ 15~20 ）×10 9/L；6 个月~2 岁（ 11~12 ）×10 9/L。

白细胞分类计数：类型 /百分数 /绝对值

1. 中性粒细胞（ N ）：①杆状核（ st ）：0~5 0.04~0.05

②分叶核（ sg ）：50~70 2~7

2. 嗜酸性粒细胞（ E）： 0.5~5 0.05~0.5

3. 嗜碱性粒细胞（ B）： 0~1 0~0.1

4. 淋巴细胞（ L）：20~40 0.8~4

5.单核细胞（ M）：3~80.12~0.8

临床意义：

①白细胞计数增多与减少主要受中性粒

检验知识

实验室常用质控规则

一、质控规则概述

λ质控规则是解释质控数据和作出质控状态判断的决策标准。

λ质控规则以符号AL表示

A是测定质控标本数或超过质控限（L）的质控测定值的个数

L是质控限。

λ当质控测定值超过质控规则所规定的质控限时，则判断该分析批违背此规则，视为失控。

例如，12s质控规则，其中A为一个质控测定值，L为X±2s，当一个质控测定值超过X±2s时，即判断为失控。

二、常用质控规则的符号和定义

12s(1-2s)：一个质控测定值超过X±2s质控限。传统上，这是作为Levey-Jennings质控图上的警告限。

13s(1-3s)：一个质控测定值超过X±3s质控限。传统上，这是作为Levey-Jennings质控图上的失控限。

22s(2-2s)：两个连续的质控测定值同时超过X-2s 或X+2s质控限。

R4s(R-4s)：在同一批内高和低质控测定值之间的差值超过4s。

31s(3-1s)：三个连续的质控测定值同时超过X-1s 或X+1s。

41s(4-1s)：四个连续的质控测定值同时超过X-1s 或X+1s。

7X(7-X)：七个连续的质控测定值落在平均数（X）的同一侧。

7T(7-T)：七个连续的质控测定值呈现出

总RNA的提取（Trizol法提取）

在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。

1. 提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；

2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放臵5分钟； 3. 在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放臵2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；

4. 取上层水相臵于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放臵10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟； 5. 弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离

实验室常用溶液的配制

1．30%丙烯酰胺溶液（100ml） 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃温度。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸，因此大于1年的溶液应该被丢弃。 2．40%丙烯酰胺（用于DNA测序，1L） 【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足 至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温

实验室常用技术资料

Lab. experiment technology

LQ

细胞冻存

1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射30min；吹打管、中枪头、中枪、培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入1.5ml胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心1000r/min，8分钟。(可以留下一部分细胞悬液在培养瓶中继续培养) 5. 用中枪吸去上清液直至冻存管内剩余1ml培养液，加入110ulDMSO(二甲基亚枫)，用枪头轻轻吹打使细胞均匀。

6. 冷存管置于4℃30min----20℃30min----80℃16～18小时(或隔

夜)---液氮槽长期储存。(-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些)。

7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏

冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤

实验室常用技术资料

Lab. experiment technology

LQ

细胞冻存

1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射30min；吹打管、中枪头、中枪、培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入1.5ml胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心1000r/min，8分钟。(可以留下一部分细胞悬液在培养瓶中继续培养) 5. 用中枪吸去上清液直至冻存管内剩余1ml培养液，加入110ulDMSO(二甲基亚枫)，用枪头轻轻吹打使细胞均匀。

6. 冷存管置于4℃30min----20℃30min----80℃16～18小时(或隔

夜)---液氮槽长期储存。(-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些)。

7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏

冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤