氨基酸的色谱分析

根据具体仪器编写的氨基酸分析原理和色谱条件。

分析原理和色谱条件

一、 氨基酸分析的须知：

（一） 样品要求：样品应有代表性，固体样品必须过60目筛；液体样品需有一定的流动性；

办固体状的样品要保证能在称量纸上不流动。对不难采集并需要我们处理的样品，常规样品一般固体样品5克左右，液体样品15ml左右；对难以收集的样品（如：酶、肽等）液体样蛋白含量应大于300μg/ml，体积不少于4ml；固体重量应不少于500μg。

（二） 自己处理样品的同学和老师，应根据自己的样品状态，严格按照本室要求样品的处

理方法处理样品。并讲处理好的样品在星期二下午3点前送到测试中心氨基酸分析室，处理好的样品要同时送两份（两个盛有蒸干样品的25ml小烧杯），并提供样品的蛋白质含量、称样量、定容体积、加0.02NHCl体积等有关数据。（样品处理方法见本附件）。

（三） 因氨基酸分析需要柱后（或柱前）衍生，分析时间长，所以对氨基酸分析的上机浓

度要求严格。请各位老师和同学无论是自己处理样品还是需要氨基酸分析室处理样品都应准确知道自己所测样品的蛋白含量（或氨基态氮含量）。如果需要本实验室处理样品时，提供的蛋白质含量的误差应控制±5%。如20%的蛋白含量，提供的数据应为（18-22

一、选择填空

1.检查气瓶是否漏气，可采用（C ）的方法。

A.用手试； B.用鼻子闻； C.用肥皂水涂抹； D.听是否有漏气声音 2.（ B ）气相色谱的主要部件包括

A. 气路系统、分光系统、色谱柱、检测器； B. 气路系统、进样系统、色谱柱、检测器； C. 气路系统、原子化装置、色谱柱、检测器； D. 气路系统、光源、色谱柱、检测器

3.装在高压气瓶的出口，用来将高压气体调节到较小压力的是（ A ）

A.减压阀； B.稳压阀； C.针形阀； D.稳流阀

4.启动气相色谱仪时，若使用热导池检测器，有如下操作步骤：①开载气；②气化室升温；③检测室升温；④色谱柱升温；⑤开桥电流；⑥开记录仪，下面( A )的操作次序是绝对不允许的。

A．②→③→④→⑤→⑥→①； B．①→②→③→④→⑤→⑥； C．①→②→③→④→⑥→⑤； D．①→③→②→④→⑥→⑤ 5.热导池检测器中，为得到更高的灵敏度，宜选用的热敏元件电阻值的参数为（ D ）

A.电阻值低、电阻温度系数小 ； B.电阻值低、电阻温度系数大； C.电阻值高、电阻温度系数小 ； D.电阻值高、电阻温度系数大

第八章 色谱法导论

一、选择题（选择1-2个正确答案）

1、色谱柱中载气平均流速(u)的正确计算式是( ) A、u=L/tM B、A、u=L/tR C、u=L/ t‘

R D、A、u=L/k

2、色谱图上一个色谱峰的正确描述是( )

A、仅代表一种组分 B、代表所有未分离组分 C、可能代表一种或一种以上组分 D、仅代表检测信号变化 3、下列保留参数中完全体现色谱柱固定相对组分滞留作用的是( ) A、死时间 B、保留时间 C、调整保留时间 D、相对保留时间 4、色谱保留参数“死时间”的正确含义是( )

A、载气流经色谱柱所需时间 B、所有组分流经色谱柱所需时间

C、待测组分流经色谱柱所需时间 D、完全不与固定相作用组分流经色谱柱所需时间 5、色谱峰的区域宽度用于色谱柱效能的评价，下列参数不属于区域宽度的是( ) A、?

第八章 色谱法导论

一、选择题（选择1-2个正确答案）

1、色谱柱中载气平均流速(u)的正确计算式是( ) A、u=L/tM B、A、u=L/tR

C、u=L/ tR D、A、u=L/k 2、色谱图上一个色谱峰的正确描述是( )

A、仅代表一种组分 B、代表所有未分离组分 C、可能代表一种或一种以上组分 D、仅代表检测信号变化

3、下列保留参数中完全体现色谱柱固定相对组分滞留作用的是( ) A、死时间 B、保留时间 C、调整保留时间 D、相对保留时间 4、色谱保留参数“死时间”的正确含义是( )

A、载气流经色谱柱所需时间 B、所有组分流经色谱柱所需时间

C、待测组分流经色谱柱所需时间 D、完全不与固定相作用组分流经色谱柱所需时间 5、色谱峰的区域宽度用于色谱柱效能的评价，下列参数不属于区域宽度的是( ) A、?

淮 阴 师 范 学 院

名姓 密 号 学 封 级 班 线 别系仪器分析 课程 色谱分析概论 习题

得 分 一、选择题（每题2分，共20题，40分） 1、反映色谱柱柱型特征的参数是：（ ）

A．分配系数 B．分配比 C．相比 D．保留值

2、对某一组分来说，在一定的柱长下，色谱峰的宽或窄主要决定于组

分在色谱柱中的（）

Ａ．保留值 Ｂ．扩散速度 Ｃ．分配比 Ｄ．理论塔板数 3、指出下列哪些参数改变会引起相对保留值的增加（ ）

Ａ．柱长增加； Ｂ．相比率增加；Ｃ．降低温度； Ｄ．流动相速度降低 4、色谱分析中，相对保留值可由下列那种物理量确定（ ）

A两组分K B两组分tR

C两组分VR D柱子的Vs和Vm

5、色谱分析采用归一化法，下列那种说法正确（ ）

A不要求全部组分出峰 B进样量要求准确

C只能用作微量组分的精确定量 D一次分析过程中条件需稳定

6、试指出下述说

第八章 色谱法导论

一、选择题（选择1-2个正确答案）

1、色谱柱中载气平均流速(u)的正确计算式是( ) A、u=L/tM B、A、u=L/tR C、u=L/ t‘

R D、A、u=L/k

2、色谱图上一个色谱峰的正确描述是( )

A、仅代表一种组分 B、代表所有未分离组分 C、可能代表一种或一种以上组分 D、仅代表检测信号变化 3、下列保留参数中完全体现色谱柱固定相对组分滞留作用的是( ) A、死时间 B、保留时间 C、调整保留时间 D、相对保留时间 4、色谱保留参数“死时间”的正确含义是( )

A、载气流经色谱柱所需时间 B、所有组分流经色谱柱所需时间

C、待测组分流经色谱柱所需时间 D、完全不与固定相作用组分流经色谱柱所需时间 5、色谱峰的区域宽度用于色谱柱效能的评价，下列参数不属于区域宽度的是( ) A、?

色谱分析法

1. 假如一个溶质的分配比为0.2，则它在色谱柱的流动想中的百分率是多少？

解：

∵ k = ns/nm=0.2 ∴nm= 5ns

nm/n×100% = nm/(nm+ns)×100% = 83.3%

2. 对某一组分来说，在一定的柱长下，色谱峰的宽或窄主要决定于组分在色谱柱中的 A．保留值 B. 扩散速度 C.分配比 D. 理论塔板数

解：

B.扩散速度

色谱峰的宽窄主要与色谱动力学因素有关。 3. 载体填充的均匀程度主要影响

A．涡流扩散相 B. 分子扩散 C.气相传质阻力 D. 液相传质阻力

解：

A．涡流扩散相

范氏方程中涡流扩散相A=2λdp, λ为填充不规则因子。

4. 若在1m长的色谱柱上测得分离度为0.68,要使它完全分离，则柱长至少应为多少米？

解：

∵ L2=(R2/R1)2 L1 完全分离R2=1.5 L2=(1.5/0.68)2×1=4.87(m)

5. 在2m长的色谱柱上，测得某组分保留时间（tR）6.6min，峰底宽（Y）0.5min，死时间（tm）1.2min，柱出口用皂膜流量计测得载气体积流速（Fc）40ml/min,固定相（Vs）2.1mL,求：(提示：流动相体积，即为死体

填空部分：

1、我们测定气相色谱仪灵敏度时，如果用102-白色担体，邻苯二甲酸二壬酯固定液， 此时按两相所处的状态属于(气—液)色谱；按固定相性质属于(填充柱)色谱； 按展示方式属于(冲洗)色谱；按分离过程所依据的物理化学原理属于（分配）色谱。 2、液相色谱分析中常用以低压汞灯为光源，波长固定式的紫外（UV）检测器，它是以 低压汞灯的最强发射线（253.8）nm做为测定波长。

3、根据分离原理的不同，液相色谱可分为（液—液）；（液—固）；（离子交换）；（凝胶）色谱法。

4、固定相分为（液体）和（固体）固定相两大类。固体固定相可分为（吸附剂）， （高分子多孔小球），（化学键合）固定相三类。

5、保留值大小反映了（组分）与（固定相）之间作用力的大小，这些作用力包括 （定向力），（诱导力），（色散力），（氢键作用力）等。

6、柱温选择主要取决于样品性质。分析永久性气体，柱温一般控制在（50℃以上）； 沸点在300℃以下的物质，柱温往往控制在（150℃以下）；沸点300℃以上的物质， 柱温最好能控制在（200℃以下）；高分子物质大多分析其裂解产物。若分析多组分 宽沸程样品，则可采用（程序升温）；检测器可采用（FID）。

7、在气相色谱分析中，载气钢瓶

第八章 色谱法导论

一、选择题（选择1-2个正确答案）

1、色谱柱中载气平均流速(u)的正确计算式是( )

B、A、u=L/tR C、u=L/ t‘

R D、A、u=L/k

2、色谱图上一个色谱峰的正确描述是( )

A、仅代表一种组分 B、代表所有未分离组分

C、可能代表一种或一种以上组分 D、仅代表检测信号变化

3、下列保留参数中完全体现色谱柱固定相对组分滞留作用的是( )

A、死时间 B、保留时间

C、调整保留时间 D、相对保留时间

4、色谱保留参数“死时间”的正确含义是( )

A、载气流经色谱柱所需时间 B、所有组分流经色谱柱所需时间

C、待测组分流经色谱柱所需时间 D、完全不与固定相作用组分流经色谱柱所需时间

5、色谱峰的区域宽度用于色谱柱效能的评价，下列参数不属于区域宽度的是( )

A、 B、Wh/2

C、W D

一、选择题（18分）

1.两组分在同一固定相上分离的可能性与哪个因素无关？

( C )

A、检测器灵敏度的高低 B、选择性的大小 C、分配次数的多少 D、分配

系数之差的大小

2.在其它色谱条件不变时，若使理论塔板数增加3A、增加1

倍，对两个十分接近峰的分离度是 ( )

倍 B、增加3倍 C、增加4倍 D、增加1.7倍

3.如果试样中各组分无法全部出峰或只要定量测定试样中某几个组分,那么应采用下列定量分析

方法中哪一种为宜？ ( D)

A、归一化法

B、外标法 C、内标法 D、标准工作曲线法

4.在液相色谱中，在以下条件中,提高柱效最有效的途径是 (C )

A、减小填料粒度 B、适当升高柱温 C、降低流动相的流速 D、降低流动

相的粘度

5.气－液色谱中，对溶质的保留体积几乎没有影响的因素是