液相色谱质谱联用技术的原理

液相色谱—质谱联用的 液相色谱 质谱联用的 原理及应用 002

中心实验室

样品的预处理常用方法

a）超滤 b）溶剂萃取／去盐 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）净化／去盐 e）色谱分离 反相色谱分离 亲和技术分离 f）甲醇或乙腈沉淀蛋白 g）酸水解，酶解 h）衍生化

化合物鉴别

全扫描方式（Q1扫描） 全扫描数据采集可以得到化合物的准分子离子，从而可 判断出化合物的分子量，用于鉴别是否有未知物，并确 认一些判断不清的化合物，如合成化合物的质量及结构。 子离子分析（ MS/MS ） 子离子，用于结构判断(得到化合物的二级谱图即碎片离 子)和选择离子对作多种反应监测（MRM）。 子离子谱图与锥体电压断裂谱图（源内CID）可能十分相 似，所不同的是子离子质谱图已知只有一种质量通过MS1， 因此也已知所有碎片离子都是由我们所选定的母离子所 产生的，所以我们更相信由MS/MS产生的谱图的纯度。

用大气压电离质谱仪可以得到分子量信息

正离子方式常出现如下离子: -Na 22 Da. higher than M+H -K 38 Da. higher than M+H -Li 6 Da. higher than M+H -NH4 17 Da. higher t

气相色谱-质谱联用技术

气相色谱-质谱联用技术，简称质谱联用，即将气相色谱仪与质谱仪通过接口组件进行连接，以气相色谱作为试样分离、制备的手段，将质谱作为气相色谱的在线检测手段进行定性、定量分析，辅以相应的数据收集与控制系统构建而成的一种色谱-质谱联用技术，在化工、石油、环境、农业、法医、生物医药等方面，已经成为一种获得广泛应用的成熟的常规分析技术。

1、 产生背景

色谱法是一种很好的分离手段，可以将复杂混合物中的各种组分分离开，但它的定性、鉴定结构的能力较差，并且气相色谱需要多种检测器来解决不同化合物响应值的差别问题；质谱对未知化合物的结构有很强的鉴别能力，定性专属性高，可提供准确的结构信息，灵敏度高，检测快速，但质谱法的不同离子化方式和质量分析技术有其局限性，且对未知化合物进行鉴定，需要高纯度的样本，否则杂质形成的本底对样品的质谱图产生干扰，不利于质谱图的解析。气相色谱法对组分复杂的样品能进行有效的分离，可提供纯度高的样品，正好满足了质谱鉴定的要求。

气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass sepetrometry , GC-MS）技术综合了气相色谱和质谱的优点，具有GC的高分辨率和质谱的高灵敏度、强鉴别能力。G

实验七 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索

093858 张亚辉

一、实验目的

1、了解LC-MS的主要构造和基本原理； 2、学习LC-MS的基本操作方法；

3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。 二、实验原理

1、液质基本原理及模式介绍

液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。

但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS已经成为最重要研究方法之一。

质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。

（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的

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山西中医2 0 1年44第 3月卷第O 4期SH NA I XJ O F T MC A pr . 2 1 04 V o 1 3 .0 N o. 4 醇工提艺[J].西陕中学医学报，院 20 1 1, 3 ( 4 6): 6 7— 68 .[ 8] 国药典委员会家.华人中民和共国药 (典一 )部[s].北京：化学 工业出社版，20 1 0:录附 IV . B

t h e Pr e p a r a it o n Pr oc e ss o f T i nay i n C ap s u e l[ J] C . h in e s e J ou anr lo f M o d e m pAp l i e d P a hrm a y c 2,0 0, 926 ( )9: 4 7—07 34 .[4 ] YA N G Q,ZH N G A K. Pre p a r at i o n a n d Q u a lit y C n t oro l o f k rOa

aCp s u le[ Js] C. hin J Mo d A p pl P h a r m,2 0 11, 28 ( 13)

Agilent Technologies 1100 HPLC/MSD 日常维护 & 故障诊断
安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

1100 HPLC/MSD 日常维护 & 故障诊断 1.仪器结构概述 1100HPLC Quadruple/Trap MSD 2. 1100HPLC 日常维护 3. 1100HPLC 故障诊断 4. Quadruple/Trap MSD 日常维护 5. 1100HPLC/MSD 故障诊断 6. 1100HPLC/MSD 开机，待机，关机注意事项 7. 技术支持＆服务流程

1100 HPLC/MSD 日常维护 & 故障诊断
1.仪器结构概述 - 1100HPLC - Quadruple/Trap MSD

1.仪器结构概述－Agilent 1100系列HPLC
16 October 2004Title of Presentation 1 M h 2001
Agilent Restricted
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1.仪器结构概述－Agilent Quadruple/Trap系列MSD Trap
16 October 2004Title of Presentation 1 M h 2001
Agilent Restricted
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气相色谱质谱联用仪操作规程（定性部分）

1．开机

①打开高纯氦气钢瓶的阀门，调节出口压力为7kgf/cm2左右，然后依次打开GC电源和MS电源，点击软件[GCMS Real Time Analysis]，选择用户名，登录后进入。

②点击 设定系统的配置。

③点击[Vacuum Control] 真空系统。 2. 调谐

，在随即出现的对话框中点击 [Auto Startup]，启动

①点击[GCMS Real Time Analysis]辅助栏中的[Turing]，打开调谐窗口。

②真空稳定后，点击[Peak Monitor View]，进行泄漏检验。

确认m/z18、m/z28、m/z32、m/z69的关系及确认是否漏气：通常m/z18>m/z28， 表示不漏气；如果m/z28的强度同时大于m/z18，m/z69的两倍，表明漏气。

③点击[Auto Tuning Condition]，设置调谐条件。 通常使用默认的条件。

④点击[Start Auto Tuning]，进行自动调谐。

⑤结束后，输出调谐报告。

在调谐报告中确认峰形、半峰宽、基峰、检测器电压和m/z502的丰度等。 一般的要求如下：

峰形：

目的检测制剂中非法掺入的醋酸泼尼松和布洛芬。方法采用液相色谱-质谱联用法,选用Venusil MP C18色谱柱(4.6mm×150mm,5λm),以0.01mol／L醋酸铵(用冰醋酸调pH值至3.0)-乙腈(50：50)为流动相,对非法制剂的提取液进行液相色谱-质谱联用分析,与对照品的色谱、紫外及质谱行为比较,对此类非法制剂进行定量测定和定性鉴别。结果在这些非法制剂中均检出了醋酸泼尼松和布

维普资讯

20 0 8年第 l卷第 l期 7 4

药物鉴定

液相色谱一质谱联用法检测药品中非法添加的醋酸泼尼松和布洛芬王连水，姜建国，张西如，郭瑞锋(河北省药品检验所，河北石家庄 00 1 ) 5 0 1摘要：的检测制剂中非法掺入的醋酸泼尼松和布洛芬。法采用液相色谱一质谱联用法，用 V ns PCs目方选 euiM,色谱柱 (, mx10 l 4 6m 5 mm, 5 m)以 0 0 o/ , . l l L醋酸铵 ( m用冰醋酸调 p H值至 3 0一乙腈 (0 5 )流动相， .) 5:0为对非法制剂的提取液进行液相色谱一质谱联用分析，对与照品的色谱、紫外及质谱行为比较，对此类非法制剂进行定量测定和定性鉴别。果在这些非法制剂中均检出了醋酸泼尼松和布洛

液质联用 在用于分离热稳定性差及不易蒸发的样品 时，气相色谱较困难，液质联用技术由此 发展起来 有效地除去流动相而不损失样品，是液质 联用技术的关键

LC-MS主要可解决如下几方面的问题： 不挥发性化合物分析测定； 极性化合物的分析测定； 热不稳定化合物的分析测定； 大分子量化合物(包括蛋白、多肽、多聚物等)

的分析测定；

HPLC-MS仪器组成框架图真空系统

样品

高效液相色 谱仪

接口

质量分析器

数据处理

接口和离子化方式 接口的作用

将流动相及其样品气化

分离出去大量的流动相分子完成样品分子的电离

接口和离子化方式接口的类型

传送带接口(MB)粒子束接口(PB) 直接导入接口(DLI) 连续流动快原子轰击(CFFAB) 热喷雾接口(TSP) 大气压离子化接口(API)

大气压离子化接口(API)(1)电喷雾电离( ESI) (2)大气压化学离子化( APCI)

电离源的种类 1.大气压电离源 a.大气压电喷雾(ESI) b.大气压化学电离(APCI) c.大气压光致电离(APPI) 2.电喷雾离子源

(1)电喷雾电离(EPI)流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂

一、热裂解气相色谱质谱联用仪主要技术指标及配置

一、作用与用途

热裂解-气相色谱-质谱联用仪适用于挥发性复杂基质成分的定性、定量分析研究。需要的样品量少，应用领域广泛，常用于未知毒物筛查，卷烟裂解产物的分析，能准确定性定量分析。主要应用于食品中农药残留定性定量分析，食品、化妆品中添加剂分析；饮用水地表水挥发、半挥发有机物含量分析，环境中污染物的分析；卷烟烟气痕量成分分析等方面的研究。能满足于食品、化工、环境、材料科学等相关领域的分析研究需要。 二、技术要求 2.1 工作条件

2.1.1 电源：230V±10%，50Hz电源 2.1.2 环境温度：10-30?C 2.1.3 环境湿度：10%~90%RH

2.2.主要用途：用于有机化合物的定性定量分析

2.3.仪器包括毛细管进样口、质谱接口、顶空自动进样器、自动液体进样器、热裂解器，固相微萃取自动进样器。 2.4 技术指标： 2.4.1柱箱

2.4.1.1温度范围：室温以上4?C～450?C

2.4.1.2温度设定：温度1?C；程序设定升温速率0.1?C 2.4.1.3升温速度：0.1?C/min～120?C/min

2.4.1.4温度稳定性；当环境温度变化1?C时，优于0.01?C *2.4.

河南洁宇检测技术有限公式 作业指导书 Agilent 7890 B 7000C MSD 气相色谱质谱联用仪操作规程 1. 开机

文件编号： 第 版第 次修订 颁布日期： 年 月 日 实施日期： 年 月 日 1）打开载气钢瓶控制阀，设置分压阀压力至 0.5Mpa 。 2 ) 打开计算机，登录进入 Windows 7 系统。

3）打开 7000C（若 MSD真空腔内已无 负压则应在打开 MSD电源的同时用手向右侧推真空腔的侧板直至 侧面板被紧固地吸牢），等待仪器自检完毕 。

4）桌面双击 GC-MS 图标，进入 MSD 化学工作站

5）在上图仪器控制界面下，单击视图菜单，选择调谐及真空 控制进入调谐与真空控制界面 , 在真空菜单中选择真空状态， 观察 真空泵运行状态 ，此仪器真空泵配置为分子涡轮泵，状态显示涡 轮泵转速涡轮泵转速应很快达到 100 % ，否则，说明系统有漏气，应检查侧板是否压正、放空阀是否拧紧、柱子是否接好。

2. 调谐

调谐应在仪器至少开机 2 个小时后方可进行，若仪器长时间未 开机为得到好的调谐结果将时间延长至 4 小时。

1）首先确认打印机已连好并处于联机状态。 2 ) 在操作系统桌面双击 7000C