农药生物测定实验

实验指导

游 红 编

1

农药生物活性测定

实验一 供试目标昆虫的饲养

——棉铃虫的饲养

一、 实验目的：

1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义； 2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法； 3、学习棉铃虫的饲养方法。

二、 实验原理：

杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。

饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。

棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。食性杂，可长年饲养。但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。若连续大量饲养，须用人工饲养。

三、 主要仪器及试材：

1、试虫：棉铃虫；

2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。 3、饲料： （1）、饲料组成：

实验指导

游 红 编

1

农药生物活性测定

实验一 供试目标昆虫的饲养

——棉铃虫的饲养

一、 实验目的：

1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义； 2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法； 3、学习棉铃虫的饲养方法。

二、 实验原理：

杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。

饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。

棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。食性杂，可长年饲养。但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。若连续大量饲养，须用人工饲养。

三、 主要仪器及试材：

1、试虫：棉铃虫；

2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。 3、饲料： （1）、饲料组成：

《农药生物测定》课程教学大纲

课程编号：02017

英文名称：Bioassay of Pesticide

一、课程说明

1. 课程类别 专业课程

2. 适应专业及课程性质 植物保护专业 选修 3. 课程目的

（1）掌握杀虫剂的室内毒力测定原理、触杀毒力、胃毒毒力、内吸毒力、熏蒸毒力、拒食活性等生物活性测定的方法

（2）掌握杀菌剂室内孢子萌发法，含毒介质培养法及盆栽试验等的测定方法

（3）掌握除草剂生物测定原理及种子发育、植株生长量、生理生化指标的测定方法 （4）掌握各类农药生物测定结果的评判和统计分析方法

（5）掌握大田药效试验的设计原理、统计分析方法和基本技能 4. 学分与学时

学分为1.5.学时为32 5. 建议先修课程 《农药学导论》、《农业昆虫学》、《农业病理学》、《杂草学》、《田间试验和统计方法》、《植物生物学》等专业及专业基础课以及《普通化学》、《有机化学》、《仪器分析》等学科基础课程

6. 推荐教材或参考书目 推荐教材：

（1）农药生物测定.江志利主编.西北农林科技大学出版社(校内教材).2005年 （2）农药生物测定技术.陈年春主编.北京农业大学出版社.1991年 参考书目：

（1）农药试验技术与评价方法.黄国洋主编.

农药生物测定绪论 一、农药生物测定的含义

? 广义的生物测定为：来自物理、化学、生理或心理的刺激，对生物整体（living organism）和活体组织（tissue）产生效力大小的度量（如：机械刺激、电刺激、各种射线的照射等）。 ? 即：生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。

? 狭义的生物测定为：以生物的整体或离体的组织、细胞，对某些化合物的反应，作为评价这些化合物生物活性的量度，运用特定的实验设计，以生物统计为工具，测定供试对象在一定条件下效应，即为生物测定。

农药生物测定 ：运用特定的试验设计，利用生物整体或离体的组织、细胞对农药（或某些化合物）的反应并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。

二、农药生物测定的简史

第一时期： 19世纪末~1920至1923年间

? 事件：法国学者埃利希（R. C. Ehrlich）研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法

– 特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。 – 缺点：由于生物个体从受药到中毒死亡需要一个过程，因而以生物中毒死亡为反应标准测出的致死剂量总比实际反应所需剂量大。

第二

生物源农药简介

摘要:主要介绍了几种商品化的生物源农药的先导化合物及这些农药的来源、结构、作用机理和特点,其中包括除虫菊酯、氨基甲酸酯类、沙蚕毒素等。

关键词 生物源农药 除虫菊酯 先导化合物 氨基甲酸酯 沙蚕毒素 次生代谢

化学农药为提高农作物产量,解决人类的生存问题做出了很大的贡献。但在生产和使用的同时也给人们的生活环境和身体带来危害,如高毒、高残留和高污染等问题。发展高效、低毒和低污染甚至无污染的新型农药,成为现代农药发展的方向。生物源农药正是顺应现代农药发展的实例。

生物源农药是指直接利用生物活体或生物代谢过程中产生的具有生物活性的物质或从生物体提取物质作为防治病虫害的农药。包括植物源、动物源、农用抗生素、活体微生物【1】。很多生物在长期的进化过程中为抵御病虫害产生了各种不同的次生代谢产物,这些代谢产物能起到化学农药相同的作用。并且由于它们来源于生物体,在使用后可以在自然环境条件下降解,解决了农药残留的问题。这些物质在生物体内的含量不高,说明其作为农药的高效率。

生物源农药的开发利用一种方式是直接利用,即确定药效后进行直接的工业化、商品化开发;第二种方式是确定药效后,将活性物质和它们的代谢产物的化学结构作为农药先导化合物模型,以期开发

生物源农药简介

摘要:主要介绍了几种商品化的生物源农药的先导化合物及这些农药的来源、结构、作用机理和特点,其中包括除虫菊酯、氨基甲酸酯类、沙蚕毒素等。

关键词 生物源农药 除虫菊酯 先导化合物 氨基甲酸酯 沙蚕毒素 次生代谢

化学农药为提高农作物产量,解决人类的生存问题做出了很大的贡献。但在生产和使用的同时也给人们的生活环境和身体带来危害,如高毒、高残留和高污染等问题。发展高效、低毒和低污染甚至无污染的新型农药,成为现代农药发展的方向。生物源农药正是顺应现代农药发展的实例。

生物源农药是指直接利用生物活体或生物代谢过程中产生的具有生物活性的物质或从生物体提取物质作为防治病虫害的农药。包括植物源、动物源、农用抗生素、活体微生物【1】。很多生物在长期的进化过程中为抵御病虫害产生了各种不同的次生代谢产物,这些代谢产物能起到化学农药相同的作用。并且由于它们来源于生物体,在使用后可以在自然环境条件下降解,解决了农药残留的问题。这些物质在生物体内的含量不高,说明其作为农药的高效率。

生物源农药的开发利用一种方式是直接利用,即确定药效后进行直接的工业化、商品化开发;第二种方式是确定药效后,将活性物质和它们的代谢产物的化学结构作为农药先导化合物模型,以期开发

测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1． 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2． 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3． 反复练习无菌操作技术；

4． 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5． 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；

二、 实验原理

将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。

关于有机磷和有机氯的检测方法!!!

水和土壤质量 有机磷农药的测定

气相色谱法 GB/T 14552-93

Water and soil quality—Determination of organophosphorus pesticides—Gas chromatography

1 适用范围

1.1 本方法适用于地面水、地下水、土壤中速灭磷(Mevinphos)、甲拌磷(Phorate)、二嗪磷(Diazinon)、异稻瘟净(IBP)、甲基对硫磷

(Parathion-methyl)、杀螟硫磷(Fenitrothion)、溴硫磷(Bromophos)、水胺硫磷(Isocarbophos)、稻丰散(Phenthoate)、杀扑磷(Methidathion)多组分残留量的测定。

1.2 本方法采用丙酮加水提取、二氯甲烷萃取、凝结法净化、气相色谱氮磷检测器测定。

1.3 本法的最低检测浓度为0.0001～0.0029mg／kg。 2 试剂和材料 2.1 载气和辅助气体

2.1.1 载气：氮气，纯度99.9％，经去氧管过滤，氧的含量小于5ppm。 2.1.2 燃烧气：氢气。 2.1.3 助燃气：空气。

2.2 配制标准样品和试样预处理的试剂和材料

使用的试剂一般系分析纯

昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定

一、实验目的：

了解乙酰胆碱酯酶的作用，掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。 二、实验材料

试剂:0.05mo1/L, pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS) ; ATCh液;称取ATCh75mg加pH7.2PBS 100m1即成。DTNB液:称取DTNB13mg加pH7. 2PB S 1 OOml即成。本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂，在测试前按不同比例用乙醇充分溶解。 三、实验步骤

1、

样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊Culex pipiens pallens

Coquillett敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊作酶源。将N龄幼虫或刚羽化3-4天未吸血雌性成蚊，放人1. 5m1离心管中，加100[1 pH7.2PBS碾碎混匀，10000r/min离心15min，取上清液再加900pl pH7.2PBS稀释，待用。 2、

实验方法:将100协1蚊虫混匀液，滴人%孔微滴定板孔中，

每孔再加混有1 x 10-4mol/L的残杀威ATCh液1 OOmhZ,，放30 C孵育30分钟后，每孔再加100ul DTNB液，待反应5分钟后，用酶标仪(北京新技术研究所提供MB- III型)进行比色。 四、结果分析

在410m

一、 名词解释

1、生物农药 2、重寄生 3、植物源农药 4、半数致死浓度(LC50)

5、可持续农业 6、农用抗生素 7、农药剂型 8、半数致死剂量(LD50) 9、可持续农业 10、激活蛋白 11、植物过敏蛋白 12、隐地蛋白 13、病毒卫星RNA

二、 填空

1．生物农药的种类按来源分，包括 、。

2. 真正可以开发为杀虫剂的病毒主要集中在 、 、 和 等科，尤其是 最具发展和应用潜力。

3. 枯草芽孢杆菌作为细菌杀菌剂应用，其作用机制主要有 、 、和 三个方面。

4. 农用抗生素按照作用机理大致可以分为4类，分别是 ____________、___________、

5. 井冈霉素是由 产生的多组分的抗生素，其主要成分井冈霉素A分子中包含了 结构和一个 。

6. 毒素类植物杀虫剂有、等（至少写出2个） ，拒食类植物杀虫剂有 、 等（至少写出2个）。

7. 昆虫病原线虫已知种类数在3000种以上，分属31科，比较集中于 。

8. 我国农药登记分为