HE染色的操作流程

我来一一解答你的疑问：

1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？” 答：HE 染色，即苏木精 — 伊红染色法，苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”

答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积

常规HE染色

石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。一般脱蜡至水的时间和步骤如下： HE染色脱蜡至水步骤 步骤顺序

1 2 3 4 5 6 7 8

冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。

染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。苏木精必须氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。

苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。矾也

常规HE染色

石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。一般脱蜡至水的时间和步骤如下： HE染色脱蜡至水步骤 步骤顺序

1 2 3 4 5 6 7 8

冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。

染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。

HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。苏木精必须氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。

苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。矾也

巴氏染色的操作方法

染色有4个步骤：1、固定；2、核染色；3、胞浆染色；4、透明。

主要达到以下要求：1、核的结构清晰；2、透明度高；3、分色恰当。

一、固定 1、固定的目的

细胞制片的迅速固定是制片过程中关键的一步，否则会影响细胞学诊断的准确性。对于不同的标本需要不同的固定方法。最为常用的固定方法是95％酒精作为固定液的湿固定法。酒精作为一种脱水剂能够防止细胞内的酶将蛋白质分解而自容，并凝固细胞内的物质如蛋白质、脂肪和糖类等，使其保持与组织生活相仿的成分，从而使细胞各部分，尤其核染色质易于着色。对于巴氏染色来说，酒精固定最为重要的。如果酒精浓度不足引起的固定不佳，可造成细胞的人为变化，并可导致假阳性或假阴性的诊断。 2、固定方法

湿固定法：作为用95％酒精固定液固定的细胞学标本一定使用湿固定法。制片制备完后，趁标本新鲜而又湿润时，立即放入盛有95％酒精的固定缸内。制片在固定液内至少保持15-30min。固定时间通常不超过1周。这种制片染色后，颜色鲜艳，结构清晰。

如果细胞制片需要送至另一实验室或邮寄他处染色时，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因为无论固定前或固定后的制片，如果发生干燥后都会影响染色

流式上机前操作(PI 染色)

流式检测细胞周期（PI染色法）

准备：

1.75%乙醇，由无水乙醇（分析纯）+DDW配制，实验前一天放入4度冰箱预冷保存

2.外用PBS（置于4度保存），细胞室PBS

3．流式管在公共平台流式机器处领取

4．PI粉末用PBS配制成5mg/ml的储存浓度，RNaseA作用终浓度为20ug/ul. PI位于负二十冰箱第一层保存。

步骤：（以LN229 对照组为例）

第一天：

1． 取生长状态良好，细胞活力佳的LN229细胞，6cm dish 中细胞密度约90~95%。此时细胞密度约在106个/ml.

2． 用胰酶进行常规细胞消化（注意不要过度），用含血清的培养液终止（尽量将贴壁的细胞吹落下来，动作要轻柔）。将细胞悬液（15ml离心管中）进行1000rmp离心5分钟.

3． 用移液器将上层培养液吸取干净，弃去。加入约7ml的PBS重悬细胞沉淀，制成单细胞悬液，再次1000rmp,离心5min.

4． 取出离心管，于外部试验台上用移液器将上层PBS吸取干净，弃去。再加入50ulPBS，重悬细胞，注意动作轻柔。重悬要充分，整体呈不透明的浑浊状。

5． 先取100ul预冷的75%乙醇沿着管壁缓慢加入（可绕着管壁螺旋加液），重复上述，一共三次，共加入3

目 录

第一章 第二章 第三章 第四章 第五章 第六章 第七章 第八章 第九章 第十章

白酒相关知识 业务基础知识

事业部人员基本素质、岗位职责、常规工作 费用申报审批程序 事业部日常管理制度 销售代表月度量化考核细则 销售代表拜访客户程序

结合深度分销谈塞上江南系列产品销售 发展二批商应该注意的事项及程序 区域经销协议的签订规定

第十二章 怎样做好商超、酒店的销售氛围

第十三章 如何做好商超、KA卖场的堆头、排面等工作 第十四章 怎样做好大客户、消费者团购公关 第十五章 白酒事业部管理表格

一、酒类常规知识 (1)白酒的产生 第一章 白酒相关常识

通常由粮食、薯类或其它含淀粉、糖的原料发酵酿制而成的，其中主要成分有水、酒精、香味物质，发酵前期主要产生酒精，后期经复杂的生物化学反应而产生微量成分，这些微量元素决定了酒的香型，质量的优劣及风格的典型性，是白酒成功的关键。

(2)酒的分类 日常生活中常见的酒一般分为五类，即白酒、黄酒、啤酒、葡萄酒、果露酒。 (一)按酿酒的原料分：

1.粮食酒：即以高粱、糯米、大米、小麦、玉米等粮食为主要原料酿制而成的白酒；

2.薯类酒：即以薯干为原料酿制而成或经串蒸而成的白

邻水县人民医院

病理科优化石蜡切片

1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。

2、 蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3～8度，以免刀刃面将组织刮坏。 3、 修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。

4、 切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。常规切片厚3～5μm。 5、 切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。

6、 将蜡片较光滑的一面朝下臵于温水中（通常捞片水温在42℃左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。

7、 附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有1/3的位臵贴号码标签用。将蜡片附贴在另外2/3的中心位臵。

8、 切片放入62℃烤箱中约30～60分钟烤片，以免发生脱片。为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。比较常用的挂胶片有明胶片，APES胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。

第一篇 存款业务操作流程

第一章 客户信息

第一节 建立客户信息

一、建立对公客户信息

在办理存款业务前，需客户提交以下证明材料：

1、开立单位银行结算账户申请书（以下简称“开户申请书”） 2、法人、经办人有效身份证件 3、组织机构代码证 4、税务登记证 5、其他证明文件 二、柜员审核

1、身份证件是否符合个人存款实名制要求，是否真实、合

法、有效。

2、开户证明文件是否真实、齐全、有效，开户证明文件复

印件是否与原件相符。

3、开户申请书填写是否规范，要素是否齐全，各项内容是

否与开户证明文件一致。

4、是否已按照人民银行和工商局规定做好账户年检和账户

信息变更

通过身份信息联网核查系统，核对身份证件的有效性及真实性。

三、操作流程

? 在开户资料复印件上加盖“复印件与原件核对一致”、支行业务专用章、审核人员名章，交事中柜员审核，审核无误后交账户管理员进行系统录入。

? 在开户申请书上加盖会计经办人员的个人名章，并签署审批或审核意见。

? 柜员根据“开户申请书”及其他开户资料建立相关信息。建立对公客户ID信息，柜员启动“1102-建立对公客户ID号”，为各类存、贷款业务所共用。客户未建立客户ID号时,柜员在办理存款等业务时，系统会联动建立该信

实验六 人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备

实验目的

1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。 2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。 实验用品

1、器材：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（附照相装置）、隔水式恒温培养箱、干燥箱、水平式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸气消毒锅、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、10ml培养瓶（可用环磷酰胺药瓶代）、2ml注射器、吸管、滴管、试管架、三角烧瓶、染色缸、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷盘、铝制饭盒、消毒用酒精棉球与碘酒棉球等。

2、材料：人外周血

3、试剂：RPMI l640培养液（含10~20％小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5％NaHCO3溶液、1mol／L HCl、三蒸水或双蒸水、0.075 mol／L KCl、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液，pH6.8的磷酸缓冲液。

实验原理

据测定，健康成年人体内的淋巴细胞总数约有500×109，其中约有2％在外周血中循环。在外周血的淋巴细胞中，以小淋巴细胞为主（每毫升血中的含量可达1~3×106个）。在通常情况下，它们都处于间期的G0或G1期，所以很难见到正在分裂的淋巴细

艾条灸操作流程

艾条灸操作流程图

←

↓

→ ↓

↓ ↓ ← ↓ →

↓

← ↓

→