组织培养技术

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

植物组织培养

农学函授专用

1

计划学时：2学时 属累计学时：1-2学时

教学目的：让学生了解组织培养的概念、类型及发展简史。

教学重点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念，组培的条件，组织培养的类型

教学难点：组织培养、外植体、细胞学说、细胞全能性的概念 教学方法：理论讲解 教学过程： [ A ] 组织教学 [ B ] 讲授新课

第一章 绪 论

第一节 植物组织培养的基本概念

植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。本书所指植物组织培养具有广泛的含义。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。经各国科学家80多年的辛勤探索，现在可以说几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能离体培养成功。大多数还能从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中，再生出无数的小植株。这项技术已非常成熟，并取得了巨大的经济效益，在生物学理论探讨和生产实践上已经取得了卓越的成就。

植物组织培养是生物技术的一个工作平台，近几年来由于转基因技术取得巨大成功，边境证基因植物的组织培养上了一个新的台阶。

一、植物组织培养的概念

指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适

T

植物细胞组织培养技术

实验指导书

中国计量学院生命科学学院

二零零六年七月

《植物细胞组织培养》实验指导

目 录

实验一、植物组织培养培养基母液的配制 实验二、植物组织培养的培养基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的建立 实验五、组织培养物的继代培养

1

实验一 组织培养基母液的配制

一、 仪器及药品

冰箱、天平（0.0001g）

容量瓶: 1000 ml, 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml 烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml 数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺

标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol/L NaOH 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品 蒸馏水

二、方法和步骤：

按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：

大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用

脱分化 外植体 继代培养 植物细胞全能型 种质 褐变 人工种子 器官培养 .胚胎培养 植物组织培养． 灭菌： 驯化

愈伤组织培养： 玻璃化现象 无病毒苗． 胚状体． 愈伤组织． 消毒

植物生长调节物质 接种 细胞悬浮培养 脱毒苗

褐化． 再分化．

1 植物组培对象分为 ， ， ,细胞培养，原生质体培养几种类型。 2 培养基中有机态氮素营养主要是 和 MS

3 种质保存的方式有 ， ， 。 4在组织培养中，不耐热对的用 法灭菌，耐热的培养基用 法灭菌 5幼胚培养的三种常见方式是 ， ， 。

6 去除植物病毒的主要方法是 ， ， 。 7 愈伤组织的形成大志经历 ， ， 三个时期 8植物组培过程中，最常用的培养基是

脱分化 外植体 继代培养 植物细胞全能型 种质 褐变 人工种子 器官培养 .胚胎培养 植物组织培养． 灭菌： 驯化

愈伤组织培养： 玻璃化现象 无病毒苗． 胚状体． 愈伤组织． 消毒

植物生长调节物质 接种 细胞悬浮培养 脱毒苗

褐化． 再分化．

1 植物组培对象分为 ， ， ,细胞培养，原生质体培养几种类型。 2 培养基中有机态氮素营养主要是 和 MS

3 种质保存的方式有 ， ， 。 4在组织培养中，不耐热对的用 法灭菌，耐热的培养基用 法灭菌 5幼胚培养的三种常见方式是 ， ， 。

6 去除植物病毒的主要方法是 ， ， 。 7 愈伤组织的形成大志经历 ， ， 三个时期 8植物组培过程中，最常用的培养基是

- 1 - 菊花花瓣组织培养

摘要：菊花在花卉生产中占有重要地位，而花瓣组织培养，可以缩短植物生长周期，

还可使再生植株特性的变异更加丰富多彩，在菊花育种研究中涉及的细胞杂交和基因转移等生物技术的应用中具有重要意义。本实验是利用黄色菊花花瓣为外植体。在诱导培养中，控制6-BA的浓度1.0 mg/l ，NAA的浓度0.3mg/l，将已分化的细胞脱去分化状态，使其恢复到未分化的分生状态，然后进行再分化，最终形成完整的植株。 关键词：菊花 激素诱导 愈伤组织 分化 1．前言

1．1实验背景

植物组织培养（tissue culture）是二十世纪初兴起的一项高新生物技术，至今已经有一百多年的历史。和植物组织培养的历史相比，中国的在这方面的研究起步算是比较早的，在二十世纪四十年代在这方面就有所研究，但是大范围的发展起来还是始于二十世纪七十年代的花药培养。

利用组织培养可以快速繁殖保存某些稀有植物或有较大经济价值的植物，挽救濒于灭绝的动植物，还可以为细胞杂交和基因转移等生物技术在育种研究中的应用提供帮助。随着人们生活质量的提高，人们甚至利用组织培养的花卉等发展装饰产业，作为一项实验技术，植物

组织培养 复习资料

绪论：

1、植物组织培养的概念：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或发育成完整植株的技术。又称植物离体培养。

2、简史（重要人物的学说及其重大贡献）

2-1探索阶段：⑴德国植物生理学家-Haberlandt是植物组培的先驱；

2-2奠基阶段：

2-3迅速发展和逐步实用化阶段：

3、组培的应用（主要是与农业的关系）：a 快速繁殖优良苗木；b培养无性植株；

第一章第二章

1、组织培养实验室的结构与功能、设备

1）组培实验室结构：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。 c、育种上应用；d、工厂化育苗

2）功能及设备

（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。

设备：冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。

植物组织培养试题

一、名词解释

1. 外植体

2. 愈伤组织培养

3. 单倍体育种

4. 液体悬浮培养

5. 玻璃化现象

1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子

等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。

2、热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。

3、平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

4、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

5、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

1、脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

2、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。 4、纸桥培养：将培

拟南芥组织培养

一、种子消毒：

方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。

方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。

消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。

方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基

选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。

MS培养基

组织培养 复习资料

绪论：

1、植物组织培养的概念：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或发育成完整植株的技术。又称植物离体培养。

2、简史（重要人物的学说及其重大贡献）

2-1探索阶段：⑴德国植物生理学家-Haberlandt是植物组培的先驱；

2-2奠基阶段：

2-3迅速发展和逐步实用化阶段：

3、组培的应用（主要是与农业的关系）：a 快速繁殖优良苗木；b培养无性植株；

第一章第二章

1、组织培养实验室的结构与功能、设备

1）组培实验室结构：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。 c、育种上应用；d、工厂化育苗

2）功能及设备

（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。

设备：冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。