农杆菌介导转化方法是什么?

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农杆菌感受态制备

1、划平板，单克隆培养

2、挑单克隆于5ML LB培养基中，摇到饱和（1-2day） 3、50m离心管中4500rpm，15min

4、50ml菌体用1ml氯化钙（预冷）悬浮，冰上操作 5、每100ul分装于冷冻管中，液氮速冻后，-70℃保存

农杆菌转化

1．50ul感受态+5ul质粒，放入液氮速冻2min 2．37℃ 热激5min

3. 加1mlLB，28℃培养3-4h

3. 8000rpm/min去上清，200ulLB悬浮，涂板吹干 农杆菌抗性：利福平+庆大霉素+载体抗性。（GV3101） 庆大霉素 40mg/ml （0.4g/10ml）；利福平 50mg/ml DMSO溶解 200ml LB + 200ul母液

农杆菌转植物

1. 植物去顶三天后转化，转前一天交足水

2. 摇菌OD600=1.2~1.6 （先小摇后，取200ul大摇200ml）

3. 室温5000rpm，15min，弃上清，悬浮于等体积渗透培养基中 （200ml/转化） 每1000ml渗透培养基：1/2 MS 2.42g；蔗糖50g；MES 0.5g；用1M KOH调PH到5.8/5.7，定容到1000ml，加10ul 1mg/ml6-BA，加200

以55个大豆基因型未成熟子叶为外植体,用高浓度2,4-D诱导大豆体细胞胚胎发生与植株再生,并对生产上种植面积大、体细胞胚胎发生率高的大豆基因型用农杆菌介导法进行遗传转化。结果表明,东北地区主栽的大豆基因型中有14个基因型体细胞胚胎发生率超过40%。用含有pGBI121S4ABC

遗!传!!"#"#"$%&’(!)*++-!"#"$#!%&&$!&&’,."

研究报告

大豆体细胞胚胎发生与农杆菌介导的遗传转化

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王!萍*!!王!罡!!!季!静!!!曾凡亭(!黄彬城(!曹!江(!吴!颖(

!哈尔滨*天津(*O黑龙江省农业科学院博士后工作站$#&&+")!O天津大学农业与生物工程学院$&&&%!)

长春*"(O解放军军需大学植物基因工程研究中心植物分子生物学研究室$(&&"!

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13（5）：789-797植物遗传资源学报2012，

JournalofPlantGeneticResources

农杆菌介导的大豆子叶节非组织

培养遗传转化体系优化

李丹丹，张

洁，刘

娜，陈

琰，韩胜芳，王冬梅

（河北农业大学生命科学学院，保定071001）

摘要：本研究以GUS基因在子叶节区的瞬时表达为依据，通过探讨影响农杆菌转化效率的因素，优化了大豆子叶节非组织培养遗传转化体系；利用该体系对冀豆16号进行Bar基因的遗传转化，并使用针刺法对转基因植株进行草铵膦筛选。结果OD600=0.6、77、表明，侵染液中附加3%蔗糖、以脱脂棉作为菌液附着介质同时不添加表面活性剂SilwetL-侵染1次的GUS阳PCR鉴定共获转化率为2.5%。经PCR和RT-性率最高达到62.13%。草铵膦抗性植株经PCR检测获得T0阳性植株10个，得3株T1阳性植株，初步证明目的基因已整合到大豆基因组中。

关键词：大豆；子叶节；非组织培养；遗传转化；草铵膦筛选

OptimizationoftheAgrobacterium-MediatedGeneticTransformation

SystemofSoybeanCotyledonaryNodeWithNonTissue-Culture

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中医体质测试方法是什么？

导语：在当下的生活中，中医受到了好多人的青睐，其实中医体质也

是有很多种的，根据每个人所处的环境不同和生活方式不同，体质自然表现的也会不同

在当下的生活中，中医受到了好多人的青睐，其实中医体质也是有很多种的，根据每个人所处的环境不同和生活方式不同，体质自然表现的也会不同，下面我们就来介绍一下中医体质测试。

中医体质分以下九种：血淤体质、特禀体质、气郁体质、平和体质、湿热体质、痰湿体质、气虚体质、阴虚体质、阳虚体质。每个人所处的环境不同，日常生活不同，体质也不同，认清自己的体质，才能对症下药。

体质判定

平和质 (A型)

总体特征：阴阳气血调和，以体态适中、面色红润、精力充沛等为主要特征。

形体特征：体形匀称健壮。

常见表现：面色、肤色润泽，头发稠密有光泽，目光有神，鼻色明润，嗅觉通利，唇色红润，不易疲劳，精力充沛，耐受寒热，睡眠良好，胃纳佳，二便正常，舌色淡红，苔薄白，脉和缓有力。心理特征：性格随和开朗。发病倾向：平素患病较少。

对外界环境适应能力：对自然环境和社会环境适应能力较强。气虚质 (B型)

总体特征：元气不足，以疲乏、气短、自汗等气虚表现为主要特征。形体特征：肌肉松软不实。

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正确去黑头的方法是什么

导语：对于绝大多数的人来说，难免会受到黑头的侵蚀，黑头顾名思

义是一种黑色的毛孔阻塞物，它严重的影响了我们的外在形象，所以在一些时候我们看

对于绝大多数的人来说，难免会受到黑头的侵蚀，黑头顾名思义是一种黑色的毛孔阻塞物，它严重的影响了我们的外在形象，所以在一些时候我们看到黑头就会感觉非常的难受，希望快速的将自己面部的黑头去除，但是有的时候使用一些药物效果不好还会带来一些副作用，所以祛除黑头需要选择正确的方法。

如果你鼻子上的黑头尚未十分严重，建议你先别急着购买鼻贴，只需用一些简单的小方法便能令鼻尖保持洁净。随便用吃剩的米饭粒搓成一小团后，在鼻头部位轻轻揉动，注意要力度均匀地揉及鼻子部位的皮肤，尤其是黑头较为聚集的部位，这样会把脏东西都带下来。你大可以在吃完饭后边看电视边“美容”，轻松又方便。

将4~5滴牛奶滴入刚开封且从未使用过的食盐中，在盐半溶解状态下开始用来在鼻头位置轻轻按摩，由于此时的盐未完全溶解仍有颗粒，按摩力度不宜过大，半分钟后用清水洗去，时间不宜持续过久。清洁后无需再涂抹其他护肤产品，这样可以令鼻尖皮肤重新分泌干净的油脂保护，令鼻头保持清爽干净。此外，还有一种据说从韩国流传过来的妙方，

治疗婴儿腹泻的方法有哪些？由于很多患者不了解该病的治疗方法和流程,使疾病不能及时得到治疗。婴儿腹泻的治疗方法有很多,每种疗法都有不同的适应症,医生在治疗婴儿腹泻前都会根据患者的实际情况制定治疗方案,求医网特邀专家详细为您讲解治疗婴儿腹泻的具体方法和每种疗法的适用范围。

婴儿腹泻的治疗方法是什么

婴幼儿腹泻，又名婴幼儿消化不良，是婴幼儿期的一种急性胃肠道功能紊乱，以腹泻、呕吐为主的综合征。以夏秋季节发病率最高。本病治疗得当，效果良好，但不及时治疗以至发生严重的水电解质紊乱时可危及小儿生命。因此该病还需早发现早治疗。

一、西医

1、饮食疗法：

轻症：减少奶量，以米汤、糖盐水等替代。

重症：禁食8～24小时，并静脉补液。

2、液体疗法：

(1)口服液体：

适应症：轻度脱水或呕吐不重者。

补液量：按每公斤体重100毫升/日计算，分数次服用。

(2)静脉补液法：

适应症：中度、重度脱水。

3、对症治疗：

治腹泻：口服1次碳酸铋或轻酸蛋白0.3克，一日3次;

助消化：

(1)多酶片一次l片，一日3次。

(2)口服胃蛋白酶合剂每岁l毫升欣，一日3次。

4、控制感染：针对病因，根据培养结果选用抗菌药物。

二、中医

1、内服

(1)伤食型：

治疗婴儿腹泻的方法有哪些？由于很多患者不了解该病的治疗方法和流

治疗婴儿腹泻的方法有哪些？由于很多患者不了解该病的治疗方法和流程,使疾病不能及时得到治疗。婴儿腹泻的治疗方法有很多,每种疗法都有不同的适应症,医生在治疗婴儿腹泻前都会根据患者的实际情况制定治疗方案,求医网特邀专家详细为您讲解治疗婴儿腹泻的具体方法和每种疗法的适用范围。

婴儿腹泻的治疗方法是什么

婴幼儿腹泻，又名婴幼儿消化不良，是婴幼儿期的一种急性胃肠道功能紊乱，以腹泻、呕吐为主的综合征。以夏秋季节发病率最高。本病治疗得当，效果良好，但不及时治疗以至发生严重的水电解质紊乱时可危及小儿生命。因此该病还需早发现早治疗。

一、西医

1、饮食疗法：

轻症：减少奶量，以米汤、糖盐水等替代。

重症：禁食8～24小时，并静脉补液。

2、液体疗法：

(1)口服液体：

适应症：轻度脱水或呕吐不重者。

补液量：按每公斤体重100毫升/日计算，分数次服用。

(2)静脉补液法：

适应症：中度、重度脱水。

3、对症治疗：

治腹泻：口服1次碳酸铋或轻酸蛋白0.3克，一日3次;

助消化：

(1)多酶片一次l片，一日3次。

(2)口服胃蛋白酶合剂每岁l毫升欣，一日3次。

4、控制感染：针对病因，根据培养结果选用抗菌药物。

二、中医

1、内服

(1)伤食型：

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本文整理于网络，仅供阅读参考

包包子和面的方法是什么

包包子的时候第一步都是和面，和面是很重要的，也是一个基础，包包子和面的方法很简单，主要是细节的讲究，比如面粉的选择还有发面的步骤，这些都是决定包子最后是否成功的因素。

1.包包子首选面粉就是高筋小麦的麦芯粉。

用这种面粉包出的包子，发面发起来之后，吃起来非常的松软，并且是很有劲道，但是还不失松软的口感，所以包包子首选面粉就是高筋小麦的麦芯粉。

2.如果是夏天的话，包包子的面活的稀一点。

夏季某些地方的天气跟气候比较干燥，包发面包子和面的时候，要适当的将面活的稀一点，不要担心揉面的时候会粘手，随着时间的推移跟揉面受散发的热度，揉一会的面，就会变得湿度刚刚好，不再粘手了。

3.和面的时候可以适量的加入些奶粉的。

如果想吃的有营养又有奶香味的包子的话，最好往里面加奶粉，这样的做的话，不仅面的发酵快，并且面的发酵彻底，而且包好的包子非常松软蓬松。

4.发面的时候适当的往里面加些糖。

这个糖可以选择比较容易吸收的白砂糖或者绵白糖。白糖的作用是使得发酵快并且发的彻底，包子或者馒头发起来发的各大，松软蓬松等等，所以，要想做出雪白松软好吃的包子的话，在和面的时候，适当的往里面加些白糖吧。

本文整理于网络，仅供阅读参考

5.面发好

感受态制备

A 大肠杆菌感受态的制备（CaCl2法）（《水稻NR和NIR基因启动子的克隆及功能验证》第38页）

1 材料、设备及试剂

1.1 材料

大肠杆菌DH5α、BL21、Rossette、JM109菌株

1.2试剂

LB液体培养基：

蛋白胨 10g/L

酵母提取物 5g/L

NaCl 10g/L

NaOH（1mol/L） 1mL/L

400mL 0.1M/L预冷的 CaCl2溶液（高温高压灭菌）

50%甘油

75%酒精

95%酒精

液氮

1.3 实验设备

接种环、酒精灯，打火机，75%酒精，95%酒精，50mL灭菌三角瓶4个，250mL灭菌的三角瓶4个，移液抢（5mL、200μL，1000μL），灭菌的枪头（5mL、200μL，1000μL），离心管（1.5mL，50mL）恒温摇床,灭菌锅，紫外分光光度计，超净工作台，制冰机，冰盒，高速冷冻离心机。

2 实验步骤

1、从新鲜培养的大肠杆菌DH5α平板上挑取一个单菌落，接种于5mL新鲜LB培液体养基中，于37℃，200rpm振荡培养过夜。

2、培养1