胶乳增强免疫比浊法属于

胶乳增强免疫比浊法检测血清脂蛋白脂肪酶的研究

Tetsuo Machida等 日本群马大学医学研究院临床医学实验部

摘要

背景 脂蛋白脂肪酶（LPL）通过催化甘油三酯的水解在富含甘油三酯的脂蛋白代谢中起关键作用。血清

脂蛋白脂肪酶的含量测定有利于脂类代谢紊乱的诊断，但目前在临床上没有快速测定LPL的方法。

方法 使用胶乳颗粒固定化的LPL单克隆抗体，我们探索了一种快速灵敏的胶乳增强免疫比浊法（LTIA）

测定LPL的方法。实验使用生化分析仪器日立7700P进行检测，同时进行了ELISA平行实验来评价实验数据的可靠性。

结果 通过稀释实验得到0.5-800ng/ml的校准曲线。批内变异系数被控制在2.2-2.5%。含有潜在干扰物质

胆红素F和C以及血红素、甘油三酯、类风湿因子的样本未观察到干扰性。LTIA与ELISA的结果具有很好的相关性（n=40， r=0.967， y=0.99x-1.86）。肝素处理前的血清LPL正常参考范围值为50-77 ng/ml，肝素处理后血浆LPL正常参考范围值为354-410 ng/ml。

结论 本文LTIA法既可用于测定肝素处理前的血清LPL值，也可用于测定肝素处理后血浆LPL值。本方

法与ELISA相比更为方便快捷，

附件5

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）

注册技术审查指导原则

本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。

本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。

目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的

— 1 ——

免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色

附件5

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）

注册技术审查指导原则

本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。

本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围

胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。

目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的

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免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色

胶乳免疫比浊法相关知识

很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅：

胶乳微球物理吸附：

反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。

带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。 反应步骤：

1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml； 2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；

3.

胶乳免疫比浊法相关知识

很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目，关注胶乳标记技术的技术人员越来越多。本人总结了部分胶乳微球标记技术，并加以分类，以便朋友们查阅：

胶乳微球物理吸附：

反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面的都是疏水微球，都可以用来设计被动吸附蛋白。磺酸基微球表面含带有负电荷的磺酸基团，pka大约为2，因此在酸性pH保持稳定。醛基微球表面也带有磺酸基团，但能和蛋白行程共价键。羧基微球表面含带负电荷的羧基基团，在pH5.0以上时保持稳定。

带有疏水基团的蛋白的吸附和配位结合，是最简单和直接的标记方法。这种方法中，微球溶液和含目标蛋白的溶液混合，反应后，未结合的游离蛋白通过清洗步骤除去，从而获得胶体蛋白复合物。疏水吸附方法只能用于疏水微球（硫酸盐、羧基、醛基表面修饰的微球）。醛基表面修饰微球是一个特例，其疏水吸附结果取决于后来的共价结合。虽然物理吸附是不依赖pH的，但反应缓冲液的pH对蛋白的结构有非常大的影响，从而影响蛋白吸附到微球上的反应效率。一般，在被吸附蛋白等电点附近pH时，物理吸附效率会很高。 反应步骤：

1. 用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml； 2. 用反应缓冲液系数胶乳微球到1%；

3.

如何锻炼增强免疫力增强免疫力锻炼计划如何锻炼增强免疫力增强免疫力锻炼计划导读:导语:免疫力差，各种疾病就容易侵袭人体，如果放任不管的话，可能会造成非常严重的后果。健身锻炼是增强免疫力最好的方法之一，可能大家都想了解，方法还是很简单的，但是导语:免疫力差，各种疾病就容易侵袭人体，如果放任不管的话，可能会造成非常严重的后果。健身锻炼是增强免疫力最好的方法之一，可能大家都想了解，方法还是很简单的，但是关键在于坚持。现在就来了解一下如何实施这样的健身计划。

一遵循三条原则

科学锻炼身体要遵遁的3条原则:全面锻炼、循序渐进、持之以恒。

1、全面锻炼

一个指的是尽量让身体各部位、各系统都得到锻炼;二指的是尽量进行拓宽练习项目还有形式，以求发展各类身体素质。

2、循序渐进

既指运动强度要从小到大，在身体逐步适应的基础上不断提高要求;又指学习动作、掌握技术要从易到难。

3、持之以恒

指的是形成习惯，常练不懈，直到终生。

二考虑5个因素

科学锻炼身体要考虑的5个因素:自身状况、运动目的、活动环境、项目特点与运动量。

1、自身状况

练习者的年龄、体质、健康状况、性格、技术水平、学习和工作特点等各不相同，只有从这个实际出发去确定合适的运动，才可以提高锻炼效果。如，处在身高突增期的少年，不

子情2景潍职坊学业院农业工学程院

一、免疫功能性品食的概念具增强机体对有病的疾抗力、抵感染、抗抗肿 功能以瘤及持自维生身平理衡食品。

的潍职坊业学农业工院学院程

二、免疫

本基概念免疫：是体人一种的理功生能人，体靠这种功依识能“别自己” 和“非己”分成从，破坏和排而斥入进体人抗的 物原质或，人本身体产生的所损伤细胞肿瘤细胞等，以和维 持体的人康。特点健异特、性忆性、可记转移。性抗：原能在机体引内免起应答的物质。 抗体：抗疫对机原刺体激形成后可，与抗原发该生特 性异结合破坏消除抗，原的球蛋。

潍白坊职业院农业学工程院学

二、免疫基概念本与免参疫应或答免与疫答有应的关中枢免疫器 官 细：及其胞前身包括造血干：细、 骨胞(造血髓细干胞 B细胞)、、 巴淋胞细吞噬细胞、、然杀自细伤胸腺( T胞胞细 外周免疫)官： 器全身淋结、脾巴、脏粘、皮肤

免膜疫统系：免疫由器、免官细疫胞免疫因子组、,发 成和挥持维免应答疫能进行功集的体。合抗性原物质入机进后激发免疫细胞活化体、分和效化应 过。程由 疫免胞细和非免疫细合成胞和免 疫防功能护：防御消除及原体的侵害病以，护机 分维泌分子的，包免疫球蛋括分 白健体和康功能过高过(反敏应、低免过缺疫陷症 子)、补分体子、胞细子因及粘

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一、免疫功能性品食的概念具增强机体对有病的疾抗力、抵感染、抗抗肿 功能以瘤及持自维生身平理衡食品。

的潍职坊业学农业工院学院程

二、免疫

本基概念免疫：是体人一种的理功生能人，体靠这种功依识能“别自己” 和“非己”分成从，破坏和排而斥入进体人抗的 物原质或，人本身体产生的所损伤细胞肿瘤细胞等，以和维 持体的人康。特点健异特、性忆性、可记转移。性抗：原能在机体引内免起应答的物质。 抗体：抗疫对机原刺体激形成后可，与抗原发该生特 性异结合破坏消除抗，原的球蛋。

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二、免疫基概念本与免参疫应或答免与疫答有应的关中枢免疫器 官 细：及其胞前身包括造血干：细、 骨胞(造血髓细干胞 B细胞)、、 巴淋胞细吞噬细胞、、然杀自细伤胸腺( T胞胞细 外周免疫)官： 器全身淋结、脾巴、脏粘、皮肤

免膜疫统系：免疫由器、免官细疫胞免疫因子组、,发 成和挥持维免应答疫能进行功集的体。合抗性原物质入机进后激发免疫细胞活化体、分和效化应 过。程由 疫免胞细和非免疫细合成胞和免 疫防功能护：防御消除及原体的侵害病以，护机 分维泌分子的，包免疫球蛋括分 白健体和康功能过高过(反敏应、低免过缺疫陷症 子)、补分体子、胞细子因及粘

绪论

1、什么是胶乳？按来源和用途分可将胶乳分为哪几种？

高聚物粒子分散在水介质中所形成的具有一定稳定性的胶体分散体系。按来源及用途分：天然胶乳、合成胶乳、人造胶乳。

2、胶乳工业有什么优缺点？

优点：1）工艺过程简单，不需重型设备，投资省，能耗低 2）易实现连续化、自动化生产，生产效率高 3）工作环境好，安全无毒，污染小，劳动强度低

4）没有焦烧危险，适于不耐高温的橡胶复合材料的制备 5）可以在胶体体系不变的情况下进行预硫化

6）橡胶分子未受破坏，制品保持高聚物原有的优良性能 缺点：1）含有大量的水，使用和运输不方便

2）易受环境影响，变异性大，加工过程及产品质量难控制 3）半成品脱水干燥困难，干燥后收缩大 4）胶乳补强及防老化相对较困难

3、天然胶乳的发展经历了哪四个阶段？ 1）新鲜胶乳自然凝固制造产品 2）胶乳凝固物溶解成溶液制造产品 3）鲜胶乳配合成型制造产品 4）浓缩胶乳配合成型制造产品

4、如何解决天然胶乳蛋白质过敏问题？ 1）降低N R L中可溶性蛋白质含量 2）切断蛋白质传播途径

3）寻找不含蛋白质的替代胶乳

5、如何解决乳胶制品硫化时产生亚硝胺问题？ 1）采用过氧化物或者辐射硫化

2）尽可能不用能产生亚硝胺的配合

绪论

1、什么是胶乳？按来源和用途分可将胶乳分为哪几种？

高聚物粒子分散在水介质中所形成的具有一定稳定性的胶体分散体系。按来源及用途分：天然胶乳、合成胶乳、人造胶乳。

2、胶乳工业有什么优缺点？

优点：1）工艺过程简单，不需重型设备，投资省，能耗低 2）易实现连续化、自动化生产，生产效率高 3）工作环境好，安全无毒，污染小，劳动强度低

4）没有焦烧危险，适于不耐高温的橡胶复合材料的制备 5）可以在胶体体系不变的情况下进行预硫化

6）橡胶分子未受破坏，制品保持高聚物原有的优良性能 缺点：1）含有大量的水，使用和运输不方便

2）易受环境影响，变异性大，加工过程及产品质量难控制 3）半成品脱水干燥困难，干燥后收缩大 4）胶乳补强及防老化相对较困难

3、天然胶乳的发展经历了哪四个阶段？ 1）新鲜胶乳自然凝固制造产品 2）胶乳凝固物溶解成溶液制造产品 3）鲜胶乳配合成型制造产品 4）浓缩胶乳配合成型制造产品

4、如何解决天然胶乳蛋白质过敏问题？ 1）降低N R L中可溶性蛋白质含量 2）切断蛋白质传播途径

3）寻找不含蛋白质的替代胶乳

5、如何解决乳胶制品硫化时产生亚硝胺问题？ 1）采用过氧化物或者辐射硫化

2）尽可能不用能产生亚硝胺的配合