sgRNA设计在内含子

中国农业科学２００７，４０（１２）：２９１５．２９１９

ＳｃｉｅｎｔｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａＳｉｎｉｃａ

黄瓜ＣＳＨＳＰＴＯ基因内含子结构分析

杨寅桂１’２，娄群峰１，陈劲枫１，刘

强１，李为观１

（’作物遗传与种质创新国家重点实验室，南京农业大学园艺学院，南京２１００９５；２江西农业大学农学院，南昌３３００４５）

摘要：【目的】探明黄瓜ＣＳＨＳＰ７０基因的内含子数目及其结构特点。【方法】根据黄瓜ＣＳＨＳＰＴＯ基因ｃＤＮＡ序列设计引物，应用ＰＣＲ技术从ｇＤＮＡ中克隆ＣＳＨＳＰ７０基因，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术验证内含子的存在．【结果】经测序与拼接，得到长度为４

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ｂｐ的黄瓜ＣＳＨＳＰＴＯ基因，它包含７个内含子。经分析发现这些内含子富含Ａ?Ｔ，

具有类似启动子和ＨＳＥ核心结构的序列存在．对黄瓜，甜瓜和丝瓜ＣＳＨＳＰ７０基因部分序列的比较分析表明，该基因在这３个葫芦科作物中具有很强的保守性．【结论】内含子存在的特殊结构表明其可能对该基因表达具有调控

作用。

关键词：黄瓜；叶绿体基质ＨＳＰ７０基因；内含子

ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＩｎｔｒｏｎｓｏｆＣｕｃｕｍｂｅｒＣＳＨＳＰ７０Ｇｅｎｅ

ＹＡＮＧＹｉｎ—ｇｕｉｌ＇２，ＬＯＵ

Ｑｕｎ．ｆｅｎ９１，ＣＨＥ

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

《式微》《子衿》教案教学设计

教学目标：

1.了解有关《诗经》的文学常识，有感情地朗读并背诵古诗，把握这两首诗的内容及其思想感情。（重点）

2.学习《诗经》中赋、比、兴的创作手法及其章法节奏的特点；分析诗歌的语言特色，体会诗歌的音韵美、意境美、含蓄美。（难点）

3.感受诗歌的艺术魅力，正确认识古代劳动人民对美好爱情的追求。（重点）教学准备：多媒体

教学过程：

1、导入：四书五经之一的诗经在我国文学史上有着崇高的地位，今天我们学习其中的两首《式微》《子衿》

2、多媒体出示《诗经》知识链接。《式微》出自《诗经.邶风》，是一首先秦时代的诗歌。

3、整体感知诗歌内容

式微《诗经·邶风》

式微式微，胡不归？

天黑了天黑了，为什么还不回家？

微君之故，胡为乎中露？

如果不是为君主，何以还在露水中？

式微式微，胡不归？

天黑了天黑了，为什么还不回家？

微君之躬，胡为乎泥中？

如果不是为君主，何以还在泥浆中！

式微：天黑了。式：语气助词。微：昏暗。

微君：(如果)不是君主。微：(如果)不是。

中露：即露中，露水中。

躬：身体。

主旨内容

这是一首劳役者的悲歌，以咏叹的方式、质问的语气，直抒胸臆，堪称“饥者歌其食，芳者歌其事”的经典之作。

重点赏析

重章换字，押韵和谐。体现了一唱三叹、余味无穷的特色。体现了《

【用例图】

1. 用例图的节点包括（ABD） A、用例 B、边界 C、关联 D、执行者 2. 用例之间的关系主要有（BCD） A、聚合 B、继承 C、扩展 D、包含

3. 在采用用例模型捕获需求时，需要执行如下（ABCD）操作 A、描述非功能需求 B、用例建模 C、识别用例 D、识别参与者 4. 在识别用例时，以下（ABC）问题可以帮助识别用例 A、当系统状态发生故障时，是否需要通知参与者

B、系统是否存在外部事件，如果存在，是哪个能参与者通知系统这些个部事件

C、参与者希望系统为他提供什么样的功能 D、系统运行环境是什么

5. 在用例图中，可以用（D）来表示整个软件系统或其中一些子系统的边界，也可以用它表示软件系统的不同发布版本的功能范围 A、执行者 B、关联关系 C、用例 D、边界框

6.（B）作为完成用例任务的责任承担者，协调、控制其他类共同完成用例规定的功能或行为

A、数据对象 B、控制类 C、实体类 D、边界类

7. 基于用例图的需求捕获的第一步就是确定系统的参与者，在寻找系统参与者时，可以根据以下（ABCD）等问题来确定 A、系统同环境如何进行交互

B、由谁安装系统

C、系统为哪些对象提供信息、服务 D、系统的使用者是谁

一种基于FPGA的高性能处理器设计

摘要:论文提出了一种实时FFT处理器设计方法。通过优化内存映射的算法和旋转因

子的产生，一个基-4蝶形运算能在一个时钟周期内完成。本文也介绍了一种能不用中断计算机流水线运算就能避免溢出的自适应溢出控制方法。这个设计在FPGA芯片上实现了，并且工作频率达到了127MHz，能够在10.1μs内完成复杂的1024点FFT运算。

关键词：FFT处理器，FPGA，地址生成，溢出控制

1.引言

离散傅里叶变换（DFT），有利于采样信号在时域和频域之间的高校转换，是一种被广泛使用在数字信号处理中的算法。在这些应用中，长度很大的DFT运算是很费时的，因此高性能的快速傅里叶变换（FFT）是必须的，以满足许多实时要求，例如，DVB-T和DAB.但是目前许多商业和学术的FFT处理器要用几十μs来完成一个1024点的复杂变换[1]，因此高性能的FFT处理器设计成为了实时系统的关键问题。目前提高FFT处理器性能的做法：提高工作平率和增强并行功能

[2][3]

。有了高并行计算单元，数据访问的速度成为系统的瓶颈[4]。

在过去的20年里，现场可编辑门阵列(FPGA)和可编程逻辑器件(PLD)发展迅

速，在现阶段基于FPGA的数字信号处理应用在

【Xist】设计你的第一个管壳式换热器_04.7防冲设施的设置

1.点击左边目录栏的“Nozzle”标签下的“Impingement”标签，进入换热器防冲设施的设置。

2.1 Impingement type – 防冲设施型式，包括1Rods防冲杆，国外较普遍，实际对防止流体诱导振动效果比较好，建议多采用；2Circular plate，圆盘型，应用普遍；3Rectangular plate – 矩形板，较少用。

本帖隐藏的内容

2.2 Rho-V2 for impingement – 防冲设施的冲量值，输入此值，超过此数值程序就自动设置一块圆形防冲板。

2.3 Plate/nozzle diameter – 圆盘形防冲板相对管口直径的比值，大于1的值，这样才不会使进口流体直接冲刷管束。

2.4 Plate thickness – 防冲板厚度，默认为9.525mm。

2.5 Device height above tubes – 定义防冲板底部距离第一排管子的高度。

2.6 Plate length– 矩形防冲板长度

2.7 Plate width –矩形防冲板宽度

2.8

《诗经子衿》说课稿

【教材及学情分析】

《诗经·子衿》是八年级下册的课文。这首诗共三章，写一个女子在城楼上等候她的恋人，通过心理描写表达了女主人公对情人的思念之情。对于初次接触《诗经》的八年级学生来说，我认为有必要介绍我国《诗经》文化，同时考虑到初学者的接受能力及其学习信心的有效培养，本课目标不宜定位于古文言词汇与知识的过多讲解，而应侧重于培养学生的诗歌语感和兴趣。这首诗的结构有个显著特点是重章叠唱，我将让学生反复诵读，体味《子衿》的音韵美。学生理解这首诗的感情并不难，但是如何将抽象化感情具体化则是重难点，我以分析诗中的三个意象“青矜”、“青佩”、“城阙”，引导学生分析情感。

【教学目标及教学方法分析】

通过对教材和学生学情的分析，我制定了以下三个学习目标，分别是

1、知识与技能：在反复朗读中感受《诗经·子衿》的音韵美，培养诗歌语感

2、过程与方法：运用讲授、问答、讨论、朗读、角色扮演等方法，引导学生掌握心理描写以及重章叠唱的结构特点

3、情感与价值观：通过对具体意象分析，引导学生感受女主人公的思念之情，培养其学习诗歌的兴趣，初步感受《诗经》及中国传统文化的魅力

【教学重、难点分析】

根据本课具体要求，结合学生实

人教版新课标小学语文实验教科书五年级上册〃《地震中的父与子》

《地震中的父与子》教学设计

【新授课】 语文 吴丽芳

设计理念 语文课重在品词析句，教师在教学过程中要引导学生在积极的思维活动和情感体验中加深对语言文字的感悟和体会。语文教学倡导工具性和人文性的和谐统一，学生在品位词句的过程中，不仅能积累语言，丰富词汇量，也能受到情感的熏陶，充分调动自身的体验融入故事中。

教材分析 《地震中的父与子》选自人教版新课标小学语文实验教科书五年级上册第六组的一篇精读课文。从教材编排来看，本组课文都是以“父爱母爱”为主题的，旨在让学生通过学习本组课文，能够感受到父爱母爱的伟大，体会作用通过外貌、动作、语言、心理等描写来表达情感的写作方法。这篇课文主要写了美国洛杉矶发生大地震，有一位父亲在废墟中挖了38小时，终于救出儿子和儿子同伴们的感人故事。课文字里行间处处流露出父亲对儿子的爱和儿子对父亲的信任，赞扬了这对在地震中了不起的父子，感情真挚，文笔流畅。文中出现较多对人物语言、动作、外貌、心理的描写，作者借这些描写来塑造人物形象，显得真实、感人。

新课标对小学高段的学生提出了这样的学习要求：阅读叙事性作品，能够简单描述自己印象深刻的场景和人物

《灯谜入门讲座》

1.谜的种类

“谜”是一个总称，它包括许多类别。从不同的角度可以有不同的分类法。如果从它的形式（即特点）来分，大概可分为下面几种：

①、谜语：人们通常所说的谜语，多指民间谜语。民间谜语的谜底多为事物，也叫“事物谜”。它主要产生于人民群众的口头创作，一般是口头传播、咏猜，所以又叫“口头谜”。它的谜面常采用比喻、夸张、拟人等手法来描绘事物的形态、动作、色彩、音响等特征以及用途、出处等。通俗易懂，押韵而有节奏，易于上口，适合少年儿童猜射。

【例如】 胖的像个球儿，浑身都是油儿，穿着红绸袄儿，家住小白楼儿。 猜农产品 —— 花生

②、灯谜：灯谜是由民间谜语发展而来的，以文义为谜，多用于书面猜射，所以也叫“文义谜”。它完全在文字上下功夫，凭借文字的一字多义、一字多音、笔画结构、词语组合变化等特点构成隐喻。谜面精炼短小，与谜底字字相切。

【例如】 木兰之子（猜农产品）花生 【谜底解释为：花木兰生的】

③、其他谜种（统称为花色谜）：有物谜、哑谜、画谜、印章谜、棋谜、邮票谜、电报谜、外文谜、拼音谜、音乐谜、声像谜、扑克谜、魔术谜、射覆谜??等等。

2.灯谜的结构、规则