液相制备色谱柱

实验一 高效液相色谱柱效能的评定

1. 实验目的和要求

1.1了解高效液相色谱仪的基本结构。 1.2初步掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。

1.3 学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。

2. 实验原理

苯、甲苯分子非极性部分的总表面积不同，缔合能力不同，其保留时间也不同。通过计算色谱峰的理论塔板数以及各个化学物质间的分离度评价色谱柱的效能。

3. 实验仪器与试剂

3.1 仪器

高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器） 分析天平 3.2 试剂

苯、甲苯（均为分析纯） 甲醇（色谱纯） 高纯水

4. 实验步骤

4.1 色谱条件

色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm 流动相：甲醇-水（80：20，v/v） 流速：1mL·min-1 检测波长：254nm 柱温：30℃ 进样量：20μL 4.2 操作步骤

? 精密配制含苯、甲苯贮备液；

? 分别精密吸取贮备液制备成混合溶液。按照上述色谱条件操作，进样，

1

记录色谱图。

? 计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。 4.3 实验数据处理

? 记录实验条件，测试各试样后记录苯、甲苯的保留时间、峰宽、半峰宽，

计算出各物质对应的理论塔板数。根据保留时间与峰宽信息，计算相邻物质对间的分离

气相填充色谱柱的制备

一、

目的要求

1. 学习固定液的涂渍技术。

2. 掌握气-液填充色谱柱的制备方法。 3、了解和掌握色谱柱的老化技术。 二、方法原理

色谱柱是气相色谱分析仪的核心部分。填充色谱柱因其制备容易、性能稳定、柱容量大及使用方便等而广泛应用。一根高分离效能的色谱柱，不仅要选择合适的固定液和载体，而且还要使固定液在载体上薄而均匀地涂渍，均匀而紧密地填充到色谱柱中。所以，色谱柱的制备是色谱分析法应掌握的重要技术之一。气-液填充色谱柱制备步骤：

① 色谱柱的选择，可选用内径均匀、长度适当的玻璃管、不锈钢管或塑料管，一般填充柱内径 2 ～ 4mm，长 0.5 ～ 3 m，形状可为 U 型或螺旋型，螺旋型柱圈径应比内径大15 倍，才能获得较好的柱效；

② 固定相的制备包括载体和固定液的选择、用量计算及涂渍过程，即根据分析的要求，选择合适的载体种类和粒度、合适的固定液种类及与载体的质量比（ 即液担比），并选择适当的方法将固定液均匀地涂渍在载体表面；

③ 固定相的填装是将制备好的固定相均匀而紧密地填充于色谱柱中，且避免载体破碎；

④ 色谱柱的老化是在色谱柱使用之前必须进行的处理过程，一则可除去色谱柱内剩余的溶剂、固定液的短链聚合物及其他较易挥

好东西

Agilent 1120 一体式液相色谱仪

轻松拥有易于掌握

Our measure is your success.

产品应用软件服务

好东西

Agilent 1120 一体式液相色谱仪

物超所值

对于标准液相色谱分析，您的实验室是否需要每次分析，每天运行时都能获得更准确、重现性更高的结果？您是否正在寻求经济实惠的高质量的解决方案，即仪器的正常运行时间最长，需要最少的维护，投资回报最高？好消息：Agilent 1120 一体式液相色谱仪崭新上市。

现在，任何一个实验室都可以利用安捷伦将先进的仪器、通用软件和适应各种应用的色谱柱及消耗品结合而成的无可匹敌的技术优势。这款新型耐用的液相色谱解决方案的设计充分优化了仪器性能，同时降低液相分析的复杂程度。正如您所期望的那样，由于来自于安捷伦，因此它可提供行业领导者所拥有的经验证的高品质和高效率，1120液相色谱仪有五种集成的一体化配置可供选择，您可以轻松拥有。

对所有用户都易于学习和使用

Agilent 1120一体式液相色谱仪拥有简单，直观的AgilentElite Compact软件和内置的自诊断功能，易于操作，易于维护。由于每套系统的最终配置在出厂之前都经过了严格的测试，因此它们启动快速且无故障。开箱之后，

美国戴安公司U-3000

美国戴安公司U-3000制备液相色谱制备液相色谱

仪器描述仪器说明仪器标签

UltiMate3000让您的液相速度更快、性能更可靠、操作更容易！

在刚刚结束的2006年匹兹堡展会上，戴安公司最新推出的UltiMate3000型液相色谱以其多种组合方式、涵盖全部液相流速范围（从纳升级到半制备）以及极大地提高通量的双梯度泵系统的特点荣获了IBO杂志(Instrument Business Outlook magazine)评选的最高奖项－金奖。 同时获得这一奖项的还有安捷伦的1200型HPLC.

与传统液相色谱不同，UltiMate3000具有更高的处理样品通量，双泵系统以串联或并联的方式工作完全符合已有的认证方法；更方便的切换装置，快速调整到所需的流速范围；2维或多维液相具有更高的灵敏度和分辨率。

UltiMate3000型液相色谱按照不同的流速范围（纳升到半制备）以及不同的应用目的（常规分析、蛋白质组学研究、样品半制备）可有七种单泵系列组合和五种双泵组合方式。

在匹兹堡展会中被誉为“市场增长最快的竞争者”的戴安公司，以其创新的设计、可靠的性能、灵活的配置以及操作方便的UltiMate3000智能液相色谱再次赢得了世界领先的地位。

1、高效液相色谱 仪器设备名称 高效液相色谱仪 数量 1 技术指标四元梯度输液泵：工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装 置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器。溶剂数：1—4。 流速范围：0.010—10.000ml/min, 以 0.001ml/min 为增量。流速精度： ≤0.075%RSD，流速准确度：±1.0%。操作压力：0—5000psi。混合范围： 0.0—100.0% 以 0.1% 增量。梯度曲线：多种梯度曲线，线性、步进、 凸线和凹线。 光电二极管阵列检测器：波长扫描范围：190～800nm。光源：全程氘灯 （190～800nm），不用钨灯。波长准确度：±1nm。测量范围：0.0001～ 2.0000AUFS，可以设定波长范围扫描检测或者定点波长检测。 荧光检测器（2475型）：灯：150W 氙灯，连续弧光。检测限：水的拉 曼光谱 ≥ 1000，激发波长：200—890nm，发射波长：210—900nm， 波长重现性：±0.25nm，波长准确度：±3nm。 色谱软件：原版软件。 仪器组成：四元泵、手动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、荧光检 测器、C18色谱柱、保护柱、原装软件、其它设备运行必须品。

高效液相色谱原理

1、概述

在所有色谱技术中，液相色谱法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。

气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。

2、液相色谱流程图 1、储液罐；2输液泵；3、进样器；4、色谱柱； 5、检测器；6、工作站；7废液灌

3、原理

液相色谱根

制备型色谱柱选择指南

制备的目的是从混合物中得到纯物质，即分离—纯化—目标物,制备柱则是完成这一过程的一个工具。其固定相种类和分析柱相似，有硅胶、键合固定相（如C18/C8等）、离子交换树脂 、聚酰胺、 氧化铝、 凝胶等（对填料可以进一步处理提高了分离效果，如：对硅胶进行的硝酸银（或缓冲液）处理）。 其装柱方法，根据固定相颗粒度和柱子的尺寸，有不同的装柱方法，装填越好分离效果越好。如湿法装填，颗粒直径小于20－30um的固定相，柱直径在50mm以内（同分析柱装填方法相似）；还有如径向压缩或轴向压缩，柱长压缩技术，柱直径大于50mm时采用。这种方法，先将固定相悬浆（或偶尔是干填充物）装入柱中加压，利用物理方法将其压紧。

（轴向压缩图例）

为了加快分离时间和提高分离效率，制备色谱的的进样品量将会很大，这导致制备色谱柱的分离负荷的相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱柱的直径和长度，使用的相对多的流动相。然而，当色谱柱上样量加大时，往往会导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。制备色谱，要解决容量与柱效之间

的矛盾。因此，制备柱的特点往往是： 1. 柱长短、内径大、呈圆饼状。

常用制备柱的柱长与分析柱相仿,一般为20 —50cm ,,而内径为10

一般情况下，HPLC分离方法的建立遵循以下步骤：

(1)了解样品的基本情况

所谓样品的基本情况，主要包括样品所含化合物的数目、种类(官能团)、分子量、pKa 值、UV光谱图以及样品基体的性质(溶剂、填充物等)、化合物在有关样品中的浓度范围、样品的溶解度等。

(2)明确分离目的

①是分析组分还是制备样品；

②是否已知样品所有成分的化学特性，或是否需做定性分析；

③是否有必要解析出样品的所有成分(比如对映体、非对映体、同系物、痕量杂质)；

④如需做定量分析，精密度需多高；

⑤建立的方法将适用几种样品分析还是许多种样品分析；

⑥将使用最终方法的常规实验室中已有哪些HPLC设备和技术。

(3)了解样品的性质和需要的预处理

除非样品是适于直接进样的溶液，否则，高效液相色谱分离前均需进行某种形式的预处理。有的样品需加入缓冲溶液以调节pH值；有的样品含有干扰物质或“损柱剂”而必须将其去除。此外，为了保证最终的样品溶液与流动相的成分尽量相近，最好用流动相溶解(或稀释)样品。

(4)检测器的选择

不同的分离目的对检测的要求不同，如测单一组分，理想的检测器应仅对所测成分响应，而其他任何成分均不出峰。另外，如果目的是定性分析或是制备色谱，则最好有通用型检测器，以便能检测到混合物中的各种成分

安捷伦气相色谱柱的分类：

Agilent GC色谱柱

·非极性柱(HP-1,DB-1MS,DB-5MS,DB-XLB,HP-1MS,HP-5,HP-5MS)

·中等极性柱(HP-35,HP-35MS,DB-35,DB-35MS,DB-17,DB-17MS,HP-50+) ·极性柱PEG(HP-Wax,HP-INNOWax,DB-Wax,HP-FFAP)

·PLOT(MoleSieve,PLOTQ,GS-GasPro,HP-PLOT AI2O3,HP-PLOT MoleSieve) ·专用分析柱(DB-VRX,DB-Dioxin,DB-ALCl与ALC2)

DB5就是5％的苯基甲基硅烷，

CBP-20的色谱柱不错，尤其适合做低级醇等沸点比较低的高极性成分。固定液是聚乙二醇20M，另外还有DB-Wax，HP-Wax等都是类似的色谱柱。但是注意还有HP INNOWax柱比较适合做高沸点的成分，对甲醇、乙醇等分离不如前者。这一类的色谱柱最高使用温度在220度左右，寿命不长，长期不用最好充氮保存。如果是分析低级脂肪酸，有酸改性的聚乙二醇色谱柱（FFAP），寿命长一些。

另外做溶残的还有氰丙基－甲基硅氧烷的色谱柱，一般称为624系列。 HP-624:6%

中国液相制备色谱市场 发展研究及投资前景报告 编制机构：千讯（北京）信息咨询有限公司 千讯咨询 - 中国液相制备色谱市场发展研究及投资前景报告

核心内容提要

市场需求

本报告从以下几个角度对液相制备色谱行业的市场需求进行分析研究：

1、用户消费规模及同比增速：通过对过去连续五年中国市场液相制备色谱行业用户消费规模及同比增速的分析，判断液相制备色谱行业的经济规模和成长性，并对未来五年的用户消费规模增长趋势做出预测，该部分内容呈现形式为“文字叙述+数据图表（柱状折线图）”。

2、产品结构：从多个角度（1-3个），对液相制备色谱行业的产品和服务进行分类，并给出每一类细分产品和服务的用户消费规模和在行业中的占比，帮助客户在整体上把握液相制备色谱行业的产品结构；该部分内容呈现形式为“文字叙述+数据图表（饼状图）”。

3、市场分布：从用户的地域分布和消费能力等因素，来分析液相制备色谱行业的市场分布情况，并对消费规模较大的重点区域市场的消费情况进行分析，包括该区域的消费规模、消费特点、产品结构等；该部分内容呈现形式为“文字叙述+数据图表（表格、饼状图）”。

4、用户研究：主要研究用户的消费行为，包括用户关注的产品因素、购买频率、购买渠道、??

竞争格