微生物限度薄膜过滤仪器

1、 微生物过滤检测系统

1. 技术规格：

1.1三联不锈钢过滤器

*1.1.1采用304L标准不锈钢

1.1.2清洗、灭菌方便，可以高压灭菌（121℃）、干热灭菌（180℃），火焰灼烧灭菌或用酒精浸泡

1.1.3每个漏斗均配有独立开关，可以单独过滤，也可以同时过滤 1.1.4其高度适合放在无菌工作台上操作 1.1.5带盖漏斗，中央通气孔可安装空气滤器 1.1.6漏斗带有内置刻度，方便定量加量

1.1.7具备不锈钢滤膜支撑垫保证被截留的微生物在滤膜表面均匀分布 *1.1.8与漏斗一体的不锈钢滤膜卡具，可以单手操作 1.1.9不锈钢漏斗容量：500ml

1.1.10材料：不锈钢漏斗、卡子、滤膜支撑垫和底座，硅胶垫圈和漏斗盖密封圈 1.2真空泵

1.2.1无油、免维护、低噪音的膜式真空泵 1.2.2最大真空度90%（100mbar、76Torr） 1.2.3最大流量：≥22L/min 1.2.4最大操作温度：40℃ 1.3滤膜

1.3.1采用独立无菌包装的硝酸纤维素网格膜，做为微生物检测滤膜。 1.3.2膜上带有网格线、便于计数、且不影响菌落生长，

1.3.3滤膜表面光滑，绝无颗粒污染，不会因颗粒物干扰实

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

1 目的

规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。

2 依据

《中国药典》2015版。

3 范围

本标准适用于微生物限度检验。

4 责任

中心化验室负责人：对本规程的实施负责。

中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。

5 程序

5.1 执行标准：《中国药典》2015版。

5.2 抽样：照《取样标准操作规程》进行。

6 内容

需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数

计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。

设备、仪器及用具

设备

微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30～350C）、生化培养箱（20～250C）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。

仪器及器皿

显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等。

用具

大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。

试液

消毒液

A．% 新洁尔灭溶液

B．75%乙醇溶液

稀释液、试剂及配制

A．无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、氯化钠、蛋白胨，加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分

1 目的

规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。 2 依据

《中国药典》2010版。 3 范围

本标准适用于微生物限度检验。 4 责任

中心化验室负责人：对本规程的实施负责。

中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。 5 程序

5.1 执行标准：《中国药典》2010版。 5.2 抽样：照《取样标准操作规程》进行。 6 细菌、霉菌及酵母菌计数

计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。 6.1 设备、仪器及用具 6.1.1 设备

微生物限度检测室室、净化工作台、生化培养箱（30-350C）、生化培养箱（23-280C）、电热恒温水浴锅、烘箱、电冰箱、灭菌柜、紫外灯等。 6.1.2 仪器及器皿

显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、薄膜过滤器等。 6.1.3 用具

大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。 6.2 试液 6.2.1 消毒液

A．0.1% 新洁尔灭溶液：供手消毒、擦拭操作台面用。

文件编码: DK/CD-SOP-

1 目的

规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。

2 依据

《中国药典》2010版。

3 范围

本标准适用于微生物限度检验。

4 责任

中心化验室负责人：对本规程的实施负责。

中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。

5 程序

5.1 执行标准：《中国药典》2010版。

5.2 抽样：照《取样标准操作规程》进行。

6 细菌、霉菌及酵母菌计数

计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。

6.1 设备、仪器及用具

6.1.1 设备

微生物限度检测室室、净化工作台、生化培养箱（30-350C）、生化培养箱（23-280C）、电热恒温水浴锅、烘箱、电冰箱、灭菌柜、紫外灯等。

6.1.2 仪器及器皿

显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、薄膜过滤器等。

6.1.3 用具

大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。

6.2 试液

6.2.1 消毒液

A．0.1% 新洁尔灭溶液：供手消毒、擦拭操作台面用。

B．75%乙醇溶液

6.2.2 稀释液、试剂及配制

A．PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取

2012年微生物限度检查基础知识考试试题 姓名： 分数：

一、 填空题（1×35=35分）

1．微生物限度检查和无菌检查应在环境洁净度 级的局部洁净度 级的单向流空气区域内进行。

2. 除另有规定外，微生物限度检查法中，细菌培养温度为 ，培养时间为 ；霉菌、酵母菌培养温度为 ，培养时间为 ；控制菌培养温度为 ，培养时间为 。

3.除另有规定外，一般供试品检验量为 或 ；膜剂为 ； 、 的检验量可以酌减。其中沙门菌的检验量为 或 。

4. 检验时应从 个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂不得少于 片；一般应 抽取不少于检验用量 倍量的供试品。

5.试验用菌株的传代次数不得超过 代。从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为 代。菌液制备后若在室温下放置，应在 小时内使用，若保存在

文件编号 文件名称 制 定 人 审 核 人 批 准 人 生效日期 管理部门 质量部 序号 01

分发部门 微生物限度检查操作规程 版本号 制定日期 审核日期 批准日期 00 QB-WI/10-005-00 页码 2017.03.08 修订原因及目的 文件新建 总经理□ 技术部□ 质量部□ 生产部□ 管理者代表□ 商务部□ 销售部□ 行政部□ 仓库□ 修订内容 /

文件编号 文件名称 1. 目的

规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限 检查符合ChP2015规定。 2. 适用范围

适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。 3. 引用/参考文件 ChP2015

实用药品微生物检验检测技术指南 《取样及留样管理规程》 4. 职责

质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS调查。 5. 程序 5.1 仪器用具

高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、

表：2.1-024

微生物限度检查记录（通用）

检验编号 剂 型 完成日期 g 样品名称 批 号 检验日期 1.常规法：取供试品10ml,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100ml，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。 供试液制备 2.薄膜过滤法：取供试品10ml,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100ml，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。吸取1:10的供试液10ml，过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液300ml分三次冲洗，每次100ml；冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上，每种培养基平行制备2个平皿。按平皿法测定其菌数。 一、需氧菌总数检查（30～35℃，3～5天） 胰酪大豆胨琼脂培养基（配制批号： ） 培养 时间 1天 2天 3天 4天 5天 6天 7天 均值 结果 — — 10 -1g 二、霉菌、酵母菌总数检查（20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ） 10 -110 -210 -3阴性对照 10 -210 -3阴性对照 皿

硬脂酸镁的微生物限度检查

一、 概述

本报告按USP31中“〈61-62〉非灭菌产品的微生物学检查”的规定，对硬脂酸美的微生物学检查方法学考察。参照企业提供标准，通过测试实验制定适合于本品的微生物学检查的方法。 企业提供标准：

总需气菌数（TAMC）不得过1000 cfu/g；霉菌及酵母菌总数（TYMC）不得过500 cfu/g；每1g样品不得检出大肠埃希菌；每10g样品不得检出沙门氏菌。

二、 方法学 1、 培养基及试剂

实验用培养基及缓冲液均符合USP规定。 BP：pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 CA：溴化十六烷基三甲铵 MCA：麦康凯琼脂 MCB：麦康凯肉汤 MSA：甘露醇盐琼脂 RVS：RV沙门菌增菌肉汤 SDA：沙氏葡萄糖琼脂 SDB：沙氏葡萄糖肉汤 TSA：大豆胰酪胨琼脂 TSB：大豆胰酪胨肉汤 XLD：赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 2、 实验菌株

黑曲霉 ATCC16404

枯草芽孢杆菌 ATCC6633，CMCC(B)63501 白色念珠菌 ATCC10231，CMCC(F)98001 大肠埃希菌 ATCC8739 铜绿假单胞菌 ATCC9027

霍乱沙门氏菌 ATCC14028

金黄色葡萄