southern杂交的原理及作用

分 子 植 物 病 理 学 实 验

--Southern杂交

（同位素标记，防止污染！注意物品的放置与处置，检测！）

核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的基本技术方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则退火形成双链，杂交的双方是待测核酸序列及探针。膜上印迹杂交是指待测核酸序列片段结合到一定的固相支持物，然后与存在于液相中标记的核酸探针进行杂交的过程，是目前最常用的一种核酸分子杂交方法。其操作基本流程是：首先用凝胶电泳方法将待测核酸片段分离，然后用印迹技术将分离的核酸片段转移到特异的固相支持物上，转移后的核酸片段将保持其原来的相对位置不变。再用标记的核酸探针与固相支持物上的核酸片段进行杂交。最后洗去未杂交的游离的探针分子，通过放射自显影等检测方法显示标记的探针的位置。由于探针已与待测核酸片段中的同源序列形成杂交分子，探针分子显示的位置及其量的多少，则反映待测核酸分子中是否存在相应的基因顺序及其量与大小。Southern印迹是指将电泳分离的DNA片段转移到一定的固相支持物上的过程。（目的：分析遗传位点、拷贝数；多态性；来源；文库分析；基因敲除；亚克隆；基因分离与检测等 ）

Southern杂交

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量 基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。

Northern 印记杂交 Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检

Southern杂交

基本概念及原理：Southern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

Southern印迹杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图，或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的特殊要求，还必须掌握DNA分子中基因编码区的大小和位置。有关这类数据资料可应用Southern印迹杂交技术获得。

Southern印迹杂交

核酸分子杂交摘要：核酸分子杂交技术是基因工程中重要的研究手段，是目前生物化学、分子生物学、和细胞生物学研究中应用

最广泛的技术之一。也是现阶段定性、定量和定位检测DNA 与RNA 序列片段必须掌握的基本技术和方法。本文主要介绍了核酸分子的原理，分类以及它的相关应

用。

关键词：核酸分子；分类；应用；

1.核酸杂交技术的原理

核酸分子（DNA、RNA）是由许多单核苷酸分子通过3, 5磷酸二酯键相互连接所形成的生物大分子。DNA 分子双链的形成，DNA 的复制，以及RNA 的转录等都遵循碱基互补配对原则。DNA 是由两条互补配对的单核苷酸链通过氢键连接的双链分子。双链结构的核酸分子在加热、偏碱环境或受尿素、甲酰胺等氢键解离剂的作用，则形成单链分子，称为核酸“变性”。两条单链核甘酸若有同源顺序，则在一

定条件下，他们的碱基互补配对，从而形成双链分子，称为核酸“复性”或核酸

“杂交” [1]。核酸分子杂交是用核酸分子的变性，复性等理化性质而设计的一种常用技术。通常利用一种顺序已知，并被放射性同位素标记的核酸片段看作为探

针，与未知样品的核酸进行分子杂交，如果样品中的核酸与探针有碱基互补顺序

就能形成杂交分子。此时标有同位素或生物素的探针则固定在标本上，用放射性自显影法

预 作 用 系 统

■系统说明

预作用系统是将火灾自动探测报警技术和自动喷水灭火系统有机结合起来

的一种自动喷水灭火装置，对保护对象起双重保护作用。预作用系统通常安装在

那些寒冷、冰冻的地区以及平时忌水渍而不允许出现误喷的重要场所，例如计算

机房、资料室、图书馆、档案室等。

■工作原理

预作用系统是主要由预作用阀、水流指示器、闭式洒水喷头、水力警铃、压

力开关等组成，系统具有干式系统的特点，可以满足高温和严寒条件下自动喷水

灭火的需要。预作用系统的系统侧管路内充有压缩气体，充气压力在

0. 035~0.05MPa之间。充气的作用是监视管路的工作状况，当喷头、管路损坏

或泄漏时，系统中气压不能保持在规定的范围，系统可以发出故障报警信号。当

火灾发生时，安装在保护区的感烟火灾探测器首先感应动作，发出火灾报警信号，

火灾报警控制器在接到报警信号后发出指令，打开预作用阀，使水进入系统侧管

内，系统变为湿式系统。此时由于管道所安装的闭式洒水喷头尚未释放，有关人

员在得到报警信号后可主动采取适当的措施进行灭火，一些小火灾可以被扑灭，

避免了水渍造成的损失。如果火情继续发展，到洒水喷头动作温度，玻璃球破碎，

喷头喷水进行灭火

防缩孔流平剂的分类及作用原理：

防缩孔流平剂的分类及作用原理常用的防缩孔,流平剂主要有三种类型。

(1) 改性聚二甲基硅氧烷型。这类防缩孔，流平剂是用聚醚，聚酯，长链烷基或芳烷基改性的聚二甲基硅氧烷，随改性基团结构，数量的不同，以及聚硅氧烷分子量的差异而在用途上有所区别，但大多数都可以强烈地降低涂料的表面张力，提高涂料对底材的润湿性，防止产生缩孔；能够减少湿膜表面因溶剂挥发而产生的表面张力差，改善表面流动状态，缩短涂膜流平时间，避免出现橘皮，刷痕，辊痕，浮色等弊病；该类流平剂还能在涂膜表面形成一层极薄且光滑的膜，从而提高涂膜滑爽性及光泽。当用量在一定范围内时，改性聚二甲基硅氧烷一般不会影响涂膜的附着力和重涂性。使用这一类防缩孔，流平剂时，要通过试验确定适宜的用量及加入方式等，以避免出现影响涂膜层间附着性或产生缩孔等副作用。未改性的聚二甲基硅氧烷虽然具有降低表面张力及提高流平性等性质，但与涂料的相溶性较差，易导致涂膜缩孔，因此在现代涂料中基本不使用。聚醚改性的聚二甲基硅氧烷是最常用且品种最多的防缩孔，流平剂，既能降

低涂料的表面张力，又能提高湿膜的流动，流平性。聚酯及芳烷基改性的聚二甲基硅氧烷的耐高温性优良，可在200-250℃温度条件下使用。用

电容在电路中的作用及电容滤波原理

电容器在电子电路中几乎是不可缺少的储能元件，它具有隔断直流、连通交流、阻止低频的特性。广泛应用在耦合、隔直、旁路、滤波、调谐、能量转换和自动控制等电路中。熟悉电容器在不同电路中的名称意义，有助于我们读懂电子电路图。

1、滤波电容：接在直流电源的正、负极之间，以滤除直流电源中不需要的交流成分，使直流电变平滑。 一般采用大容量的电解电容器或钽电容，也可以在电路中同时并接其他类型的小容量电容以滤除高频交流电。

2、去耦电容：幷接在放大电路的电源正、负极之间，防止由于电源内阻形成的正反馈而引起的寄生震荡。

3、耦合电容：接在交流信号处理电路中，用于连接信号源和信号处理电路或者作两放大器的级间连接，用以隔断直流，让交流信号或脉冲信号通过，使前后级放大电路的直流工作点互不影响。

4、旁路电容：接在交、直流信号的电路中，将电容并接在电阻两端或由电路的某点跨接到公共电位上，为交流信号或脉冲信号设置一条通路，避免交流信号成分因通过电阻产生压降衰减。

5、调谐电容：连接在谐振电路的振荡线圈两端，起到选择振荡频率的作用。 6、衬垫电容与谐振电容：主电容串联的辅助性电容，调整它可使振荡信号频率

Southern Blotting技术总结

Southern Blotting溶液的配制： ※、变性缓冲液

1.5M NaCl 0.5M NaOH ※、中和缓冲液

1.5M NaCl 1.0 MTris?HCl Tris,HCl调pH8.0 ※、20×SSC 1L

3.0 M NaCl 0.3 M 柠檬酸钠 pH7.0) ※、2×SSC:

0.3 M NaCl, 0.03 M 柠檬酸钠(pH7.0) ※、洗膜液Ⅰ的配制： 2×SSC，0.1%SDS ※、洗膜液Ⅱ的配制： 0.5×SSC，0.1%SDS ※、Washing Buffer:

0.1 M Maleic Acid，0.15 M NaCl（pH7.5）,0.3%(V/V) Tween ※、Maleic Acid Buffer：0.1M Maleic Acid，0.15 M NaCl（pH7.5） ※、1×Blocking Solution：10×Blocking Solution(vial6),用Maleic Acid Buffer稀释10倍（现配现用）；

※、Antibody solution:每次使用前，4℃,10000rpm

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超声空化的研究历程及展望# 龙正，刘秀梅** （中国矿业大学机电工程学院，徐州 221000）

摘要：超声空化是工业设备中广泛存在的一种流体力学现象。随着超声技术应用广泛而迅速的发展，整整 一个世纪来，超声空化成了经久不衰的研究课题，特别近十年来，超声空化成了多种学科的基础研究热 点。在超声空化研究方面，国内外已有大量的实验、理论及数值计算的相关研究。综述了超声空化研究中 理论、数值分析、实验三方面的研究现状及研究进展，总结了空化研究中存在的问题，提出了今后超声空 化的发展方向。

关键词：超声空化；空泡；高速摄影；动力学特性

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中图分类号：O427.4

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The research process and prospect of ultrasonic cavitation

LONG Zheng, LIU Xiumei

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(Mechanical and electrical Engineering School ,China Univisity of Mining and Technology

221000)

Abstract: Ultrasonic cavitation is a widespread phenomenon

能级原理在医院感染管理中的运用及作用

医院感染管理是医院管理的重要组成部分，是按照医院在医疗、诊断过程中不断出现的感染现象，运用相关的理论和方法对医院感染进行分析综合，提高工作效率，控制感染发生。能级原理作为现代管理学的一条重要原理，其独有的以人的能力为核心的管理方法和管理手段运用于医院感染管理将会起到积极的作用。

1能级管理原理

“能级”一词是从物理学中借用过来的概念，原意是说原子由原子核和电子构成，电子由于具有不同的能量即处于不同相应等级的轨道运转，这种现象在管理学上同样存在。

管理学认为，管理活动中组织及其成员同样具有类似的能级结构。管理的能级结构是指为了实施有效的管理，必须在组织中建立一个合理的能级结构，并按照一定的标准，将管理的对象置于相应的等级中。理想稳定的能级管理组织应该是一个正立的三角形结构。

2能级管理的层次

现代管理学把管理组织的能级层次一般分为四级：第一层为决策层，是管理组织的最高层次，决定本组织的战略任务和大政方针；第二层为管理层，根据战略任务和方针政策制定计划方案，下达管理指令；第三层为执行层，贯彻执行管理指令，直接组织人、才、物等资源，以实现管理决策目标；第四层为操作层，根据执行层的组织、调配，进行管理