酶促反应动力学实验报告唾液淀粉酶

酶动力学综合实验

实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定

【目的要求】

1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响

2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。 【实验原理】 1、碱性磷酸酶：

碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多。其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的。 2、米氏方程：

Michaelis-Menten 在研究底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即：

错误！未找到引用源。 (1)

式中：v表示酶促反应速度，

错误！未找到引用源。表示酶促反应最大速度， [S]表示底物浓度，

错误！未找到引用源。表示米氏常数。

3、 错误！未找到引用源。值的测定主要采用图解法，有以下四种： ①双曲线作图法（图1-1，a） 根据公式（1），以v对[s]作图，此时1/2错误！未找到引用源。时的底物浓度[s]值即为Km值，以克分子浓度（M）表示。这种方法实际上很少采用，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和。实测错误！

酶动力学综合实验

实验（一）——碱性磷酸酶Km值的测定

【目的要求】

1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响

2.了解米氏方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km值的方法。 【实验原理】 1、碱性磷酸酶：

碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多。其次为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。本实验用的碱性磷酸酶是从大肠杆菌中提取的。 2、米氏方程：

Michaelis-Menten 在研究底物浓度与酶促反应速度的定量关系时，导出了酶促反应动力学的基本公式，即：

错误！未找到引用源。 (1)

式中：v表示酶促反应速度，

错误！未找到引用源。表示酶促反应最大速度， [S]表示底物浓度，

错误！未找到引用源。表示米氏常数。

3、 错误！未找到引用源。值的测定主要采用图解法，有以下四种： ①双曲线作图法（图1-1，a） 根据公式（1），以v对[s]作图，此时1/2错误！未找到引用源。时的底物浓度[s]值即为Km值，以克分子浓度（M）表示。这种方法实际上很少采用，因为在实验条件下的底物浓度很难使酶达到饱和。实测错误！

实验三、 唾液淀粉酶的活性观察 实验三、

指导老师：刘建昌、 指导老师：刘建昌、池雪林

一、目的

掌握温度、pH、激活剂和抑制剂如何影 掌握温度、pH、 响酶的催化活性及其影响机理。 响酶的催化活性及其影响机理。

二、原理酶是由活细胞分泌的生物催化剂。 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性(酶 活力) 在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温 度即酶的最适温度 度即酶的最适温度 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高 的物质称为酶的激活剂 的物质称为酶的激活剂 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的 抑制剂。 抑制剂。

本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化 因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液 淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随 着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到 各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。 而碘液能指示淀粉的水解程度。淀粉酶 淀粉 糊精 淀粉酶 麦芽糖 + 少量葡糖

蓝色) 加碘 (蓝色)

紫红、 紫红、暗褐或红色

棕黄色

三、试剂及器材(1)0.5%(

理科园地 唾液淀粉酶最适pH值的测定

□清华大学附属中学14班 唐睿谦

【摘　要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质，底物浓度相同时，酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。在不同pH值下，通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最适pH值。在不同pH条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解，与碘液反应呈现颜色反应，通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小，可知底物的反应程度，从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。

【关键词】唾液淀粉酶 最适pH 吸光值【中图分类号】 G 【文献标识码】 A 【文章编号】0450-9889（2015）02B-0117-02

酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。酶催化化学反应的能力称为酶活性。酶的化学本质是蛋白质，它具有两性电解质的性质，在一定溶液中可以发生解离作用。酶无论在生活中还是在医学领域都具研究意义，酶的各种特性被广泛应用于各个领域。影响酶反应活力的因素很多，主要包括pH、温度、酶浓度、金属离子浓度、抑制剂等。

酶在水溶液环境中的解离状态和行为，都受到H+的影响，酶活性中心功能

有关唾液淀粉酶最适pH值实验测定论文

1、广西医科大学基础医学院2013级七年制临床一班 2、实验小组成员：马健，李起广，莫书天，李显君 3、本论文作者：马健

一、摘要：酶学知识应用于临床诊断与应用治疗，自行设计实验并根据课题要求精确测定唾液淀粉酶的最适pH，目的掌握方法，熟悉缓冲溶液的配置，721分光光度计的使用。主要通过测定碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应后的吸光度差异来精确出唾液淀粉酶的最适PH值，实验结果约为6.8。 二、关键词：淀粉酶 水解产物 最适pH 吸光度

三、前言：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，酶催化活性最高时反应体系的PH称为酶促反应的最适PH酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，而影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。所以研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。 四、实验原理：

1、pH的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受pH影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小。

2、过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大

化工热力学

3.4 酶促反应动力学 酶促反应动力学酶促反应动力学(kinetics of enzymecatalyzed reactions)是研究酶促反应速度 及其影响因素的科学。酶促反应的影响因素 主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、 抑制剂和激活剂等。

化工热力学

一. 酶浓度的影响在一定温度和pH下，酶 促反应在底物浓度大于 100 Km时，速度与酶的浓 度呈正比。 酶浓度对速度的影响机 理：酶浓度增加，[ES]也 增加，而V=k3[ES],故反 应速度增加。

化工热力学

二. 温度对酶促反应速度的影响 酶促反应与其它化学反应一样，随温度的增加，反应 速度加快。化学反应中温度每增加10℃反应速度增加的 倍数称为温度系数Q10。一般的化学反应的Q10为2~3,而 酶促反应的Q10为1~2。 在一定范围内，反应速度达到最大时对应的温度称为 该酶促反应的最适温度(optimum temperature Tm ).一 般动物组织中的酶其最适温度为35~40℃,植物与微生物 中的酶其最适温度为30~60℃,少数酶可达60℃以上，如 细菌淀粉水解酶的最适温度90℃以上。

化工热力学

温度对酶促反应速度的影响机理：

1. 温度影响反应体系中的活化分子

实验六十 淀粉酶产生菌株的筛选

实验项目性质：设计性

所涉及的知识点：无菌技术、富集培养、纯种分离、淀粉酶性质、酶活测定 计划学时：8学时

一、实验目的

1．掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。 2．巩固以前所学的微生物学实验技术。 3．掌握产酶微生物筛选的方法。

二、实验原理

α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。

1、采样：即采集含菌的样品

采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。在土壤中几乎各种微生物都可以找到，因而土壤可说是微生物的大本营。在土壤中，数量最多的当推细菌，其次是放线菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各类物体上都有相应的占优势生长的微生物。例如枯枝、烂叶、腐土和朽木中纤维素分解菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多，果实、蜜饯表面酵母菌较多；蔬菜牛奶中乳酸菌较多，油田、炼油厂附近的土壤中石油分解菌较多等。

2、增殖培养（又称丰富培养）

增殖培养就是在所采集的土壤

固相反应动力学实验设计报告

一、实验具体项目

通过Na2CO3-SiO2系统的反应（Na2CO3＋SiO2—→Na2SiO3＋CO2↑） 验证固相反应的动力学规律-金斯特林格方程。通过作图计算出反应的速度常数和反应的表观活化能。

二、实验方法

TG法。现代热重分析仪与微分装置连用，可同时得到TG-DTG曲线，即得到固相反应系统的重量变化与时间的关系。

三、实验仪器和药品

Q600-SDT差示扫描量热/热重（DSC/TGA）同步热分析仪、铂金坩埚一只、不锈钢镊子两把、Na2CO3一瓶、SiO2一瓶（均为A·R级）

四、实验步骤

1、样品制备

将Na2CO3和SiO2分别在玛瑙研钵中研细，过250目筛。SiO2的筛下料在空气中加热至800℃，保温5h，Na2CO3筛下料在200℃烘箱中保温4h。把上述处理好的原料按Na2CO3：SiO2=1:1摩尔比配料，混合均匀，烘干，放入干燥器内备用。

2、测试步骤

1).检查周围环境及仪器状态：要求室内环境温度为23±5℃。在SDT和控制器之间进行所有必要的电缆连接,连接所有气体线路,检查并接通各个装置的电源,将控制器连接到仪器,熟悉控制器的操作,如果有必要,请校准SDT。

2).设置净化气体

酶工程Enzyme Engineering周海岩 牛坤 王亚军 博士

浙江工业大学生物与环境工程学院

酶催化历程1 Substrates enter active site; enzyme changes shape so its active site embraces the substrates (induced fit).2 Substrates held in active site by weak interactions, such as hydrogen bonds and ionic bonds. 3 Active site (and R groups of its amino acids) can lower EA and speed up a reaction by acting as a template for substrate orientation, stressing the substrates and stabilizing the transition state, providing a favorable microenvironment, participating directly

微生物与转基因技术

摘 要 微生物目前已是生物技术领域主要的模式生物之一，微生物可以为转基因

技术提供工具酶、基因载体；微生物本身也常作为目的基因的受体细胞。通过转基因的方式，可以将人类所需要的基因转移到特定物种上，从而表达出人类想要的性状。本文综述了转基因微生物在食品、农业、医药以及环境保护、传统工业改造等领域研究与应用的国内外现状。在食品生产领域，转基目微生物主要用于食品用群制剂的生产，如凝乳酶．淀粉酶，蛋白酶等，转基因酵母也应用于啤酒的生产．在农业生产领域，转基因微生物主要用于微生物农药、微生物肥料和饲料酶制剂的生产．在医药生产领域，转基因微生物主要用于兽用和人用疫苗的生产，以及利用转基因镟生物生产某些药物。此外，转基因微生物在环境保护，传统工业的改造、印染业，以及新能薄开发等方面也有应用，本文也同样大致介绍了一些目前国内外关于微生物转基因方面的前沿研究。

关键词 微生物转基因，DNA重组技术，目的基因，基因载体

1 引 言

转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学。基因片段[1]的来源可以是提取特定生物体基因组中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的基因片段。基因片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行重组，再