小鼠肺组织石蜡包埋

石蜡包埋

第一天：固定，取材当天即把所需包埋的组织（取出后放入4%的多聚甲醛中过夜（12h）；

第二天：冲水，12小时（注意水流不需要太大，不可将水流直接冲击组织）

脱水，60%酒精4h白天（或者60%酒精4℃过

夜12h）→

第三天：→70%酒精4h→80%酒精4h→90%酒精4h→95%酒精4℃过夜(不一定12小时) →

第四天：→100%酒精Ⅰ2h→100%酒精Ⅱ2h→100%酒精Ⅲ2h→

透明，二甲苯Ⅰ5+3 min→二甲苯Ⅱ5+3 min→

二甲苯Ⅲ 5+3 min→二甲苯Ⅳ 3+2 min→

（此处注意，在透明过程进行到此处时，应在浸完后拿出脑组织观察一下透明是否彻底，一般来说透明完全的脑组织是呈现为一个通体琥珀状，如果是发现脑组织内部仍呈现不通透的白色则继续酌情追加浸泡（透明）时间）

浸蜡，软蜡Ⅰ2h→软蜡Ⅱ2h→软蜡Ⅲ 2h→ 中蜡包埋 备注：1、软蜡是指熔点48-50℃的石蜡，中蜡是指熔点58—60℃的石蜡。在包埋前应该提前将各种蜡准备好，放在对应的蜡缸里融好，注意不要加热太长时间。待蜡完全融好后关

上煤气，冷却至烧杯上沿不是太烫手且蜡也未凝固是将蜡挪到６０℃温箱里备用。在融蜡时要注意通风橱使用规范。

2、包埋组织块时要注意动作熟

组织块石蜡包埋的步骤：

1. 取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）

*1.0cm*(0.2-0.3cm) 2. 固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。固定时间

以12-24h为宜。（4℃冰箱可放置1-3个月） 3. 冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.

4. 脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min, 无水乙醇Ⅱ30min。可将组织放于70%酒精中过夜。 5. 透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明

为10min。 6. 浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。先将组

织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。 7. 包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移

至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。（硬蜡凝固定型）

石蜡切片法：

在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“

石蜡包埋步骤

1. 取材固定：离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质（比如说甲醛），使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。根据不同目的、组织特征代表性取材。取的材料应该小而薄。便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。每个组织最好多切几块。新鲜组织固定（组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。）固定时间因固定剂种类而异，大多6-12小时，一般不超过12小时。视组织固定的难易程度而定。后续如果做免疫组化，不应超过12小时；后续如果做HE染色，不应超过24小时。固定完之后用水洗（目的：洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。换液两次，一次半小时。）之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。

2. 脱水：从75%的乙醇中取出，分别

四川友谊医院

作业指导书 SOP 常规石蜡包埋组织制片 制备标准操作流程 文件编号：SOP-BL-01-02 版本：A/0

常规石蜡包埋组织制片制备

标准操作流程

1)制备程序 1．水洗。 2．脱水。 3．透明。 4．浸蜡。 5．包埋。 6．切片。

2)注意事项

组织切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。

3)常规切片的手工操作

1．水洗 用流水冲洗已经固定的组织块30min。 2．脱水(常温下)

(1)乙醇—甲醛(AF)液固定：60～120min。 (2)80％乙醇：60～120min。 (3)95％乙醇I：60～120min。 (4)95％乙醇Ⅱ：60～120min。 (5)无水乙醇I：30～60min。 (6)无水乙醇Ⅱ：30～60min。 (7)无水乙醇Ⅲ：30～60min。

注意事项：①未经充分固定的组织不得进入脱水程序；②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5～l0倍以上；③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水；④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙

小鼠眼球标本石蜡切片技术的探索与改进

目的 眼球组织结构特殊，从眼球壁各层组织到晶状体、玻璃体，软硬程度各不相同，连接性差，如果采用普通的石蜡切片步骤，会造成各层分离，尤其是视网膜的脱离，难以制作出完整的眼球石蜡切片。而且动物标本与人的标本存在一定程度的差异，动物的组织比人的组织柔软，含水量多，在石蜡制片过程中操作不当容易出现组织块变脆，影响切片，因此小鼠的石蜡切片不能完全按照人的石蜡切片程序来进行。我们实验室通过对小鼠石蜡切片制作方法的多次探索，总结出一些特别用于小鼠眼球的石蜡切片技术改进方法。方法 BALB/c小鼠20只，拉颈处死，无菌条件下手术摘除眼球并做好标记。与普通组织标本不同的是，小鼠眼球石蜡切片的第一步是固定，小鼠眼球离体以后，由于质地太软，不能立即进行取材，否则会造成眼球各部分变形和眼内容物的脱出。所以需要先经过固定液的固定。经过对各种固定液的尝试，我们认为采用冰醋酸、甲醛、生理盐水和75%乙醇按照1:2:7:10的比例混合而成的固定液对于制片效果较好。固定时间为24小时。固定后进行取材。将眼球标本置于水平方位，沿视神经的上方和下方，从眼球后壁向角膜分别剖开。组织脱水采用乙醇脱水：将标本分别经过70%、80%、90%、95%、

石蜡切片制作

一、苏木精-伊红对染法

——paraffin section

一、器材及试剂： 1. 器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，中性树胶。 3. 材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色

篇一：石蜡切片技术实验报告 题目：石蜡切片技术实验报告

学院：农学院，专业：植物学，姓名：张永丰，学号：2011202010 目的

掌握石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。并观察植物叶的横切面内部结构。

材料：已经固定好的女贞叶 方法与操作步骤

一、 脱水：依次使用下列浓度的乙醇脱水

50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇 每步两个小时。 二、 透明：依次通过下列试剂进行透明

1、1/2无水乙醇1/2二甲苯（加少许番红粉末，对材料进行附染）两个小时 2、二甲苯两个小时 3、二甲苯一个小时

三、 浸蜡：浸蜡步骤如下 1、将材料瓶中的二甲苯取出1/2，加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36℃温箱中处理35小时

2、换用纯石蜡液于60℃温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时 四、 包埋与切片

1、在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。

2、片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。 3、及时将蜡块冷却，防治形成结晶。

4、修块与粘连：将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形；将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。 5、切片：利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为8～10μm，以每分

石蜡切片制作

一、苏木精-伊红对染法

——paraffin section

一、器材及试剂： 1. 器材：

切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。

切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 2．试剂：

中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，中性树胶。 3. 材料：

鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。 二、实验原理：

石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色

肺移植进展

上海胸医院胸外科 高成新

活体相关肺叶移植、无心跳供体临床应用、新的支气管血管吻合材料以及各种肺保存液的研究

大大地推进了临床肺移植的蓬勃发展。

目前我国已在肺脏移植中获得那些成功？ A. 单侧双肺叶移植 B. 双肺整体移植 C. 单侧肺移植 D. 序贯式双侧肺移植

1963年，美国密西西比大学的James Hardy医生施行了第一例人类肺移植，之后20年虽又进行了40余例，但均未获得成功。1983年，加拿大多伦多大学的Cooper医生成功地为一例肺纤维化病人施行了单肺移植，病人术后生存了7年余，此次成功标志了现代肺移植史的开始。随后的20余年中，由于技术的进步，肺移植已日趋成熟。而作为治疗终末期肺病的有效措施，它已为临床广泛接受。

据2004年世界心肺移植登记中心报告，截至2003年6月，全世界共进行了17，128例肺移植（不包括近年来大陆的数十例肺移植）。

病例：2004年7月30日上海首例双肺移植获得成功

男性患者，39岁，诊断为双肺弥漫性支气管扩张症。20多年反复咳脓痰、发热、咳血。近五年，完全丧失劳动能力。近2年呼吸困难加重，吸氧无效。严重呼吸衰

ＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｅｔｉｎＶｏｌ．２４Ｎｏ．３２００８Ｍａｒｃｈ

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ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ

农业基础科学一种适用于植物组织的快速石蜡制片法

潘叶，冯永庆，马焕普

（北京农学院植物科学技术系，北京１０２２０６）

摘要：为了建立一种快速石蜡制片方法，减少实验过程中有毒试剂的使用量。该文以葡萄、桃、花叶锦包埋试剂、染色等制片环节，进行石蜡制带等的部分组织为实验材料，采用石蜡切片法，通过改良透明、

片研究。试验结果表明：该法不但简化了实验步骤、将制片周期缩短为原来的１／３，而且其制得的切片质量与常规方法无区别，同时也减少了实验过程中有毒试剂的使用量，整体上提高了植物石蜡制片的效率。

关键词：植物；石蜡制片法；有毒试剂中图分类号：Ｑ９４－３３６

文献标识码：Ｂ

ＡＳｉｍｐｌｅａｎｄＲａｐｉｄＰａｒａｆｆｉｎＭｅｔｈｏｄｆｏｒＰｌａｎｔＴｉｓｓｕｅｓ

ＰａｎＹｅ，ＦｅｎｇＹｏｎｇｑｉｎｇ，ＭａＨｕａｎｐｕ

（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔ