免疫组织化学染色诊断

《酶组织化学与免疫组织化学技术》习题

第一部分组织学技术和免疫组织化学技术

一、选择题

（一）A1型题(标准型) 1.C 2.B 3.A 4.C 5.A 8.B 9.C 10.D 14.A 23.D 1.免疫组化技术的关键步骤是 A.标本处理

B.抗体的处理与保存 C.免疫染色

D.设立对照试验 E.结果判断

2.免疫组化技术的首要试剂是 A.抗原 B.抗体 C.标记物 D.固定剂 E.洗涤液

3.酶免疫组化技术中，关于标本处理的说法正确的是

A.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 B.充分洗后于室温用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 C.充分洗后于室温用0.5%H2O2和90%甲醇处理20～30min。 D.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理20～30min。 E.充分洗后于4℃用0.3%H2O2和80%甲醇处理40～50min。 4.PAP法是Sterberger等于哪一年建立的 A.1950 B.1960 C.1970 D.1980 E.1990

5.PAP复合物中的酶是 A.辣根过氧化物酶 B.碱性磷酸酶 C.葡萄糖氧化酶 D.胃蛋白酶 E.胶原酶

免疫组织化学技术

取材

将小鼠麻醉，打开胸腔充分暴露心脏，在心尖处剪一个小口，将注射器针头经小口送入左心室并插至升主动脉起始部，用线将针头固定，剪破右心耳，灌注50ml生理盐水。随后缓缓注入150ml 4%多聚甲醛（pH7.4），固定1h后将脑取出，浸于4%的多聚甲醛中放入4℃冰箱内固定12h，然后转入30%的蔗糖溶液中浸泡48h。

石蜡包埋

1.取出皮层及海马，流水冲洗24h，用梯度浓度的酒精进行脱水，酒精浓度梯度为70%酒精→80%酒精→90%酒精，各30min，95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ，各20min，100%酒精Ⅰ→100%酒精Ⅱ，各15min。

2.取出皮层及海马，浸入到二甲苯中透明，1h×2次。

3.取出皮层及海马，浸入到二甲苯与石蜡1:1混合液中，浸泡1小时。 4.取出皮层及海马，浸入到石蜡中，浸泡1小时×2次。 5.在石蜡包埋机上进行组织包埋，冷却后保存在4℃冰箱中备用。 切片

将组织用石蜡切片及进行切片，切片厚度为2μm。连续切片5次，取1张切片，水浴锅展片后贴附在多聚赖氨酸包被的载玻片上。每个组织取5张切片。所有切片在烤箱中60℃烤片2h。

脱蜡及水化(48min)

1.切片在二甲苯中脱蜡10min×2次。

2.切片在梯度

免疫组织化学技术

取材

将小鼠麻醉，打开胸腔充分暴露心脏，在心尖处剪一个小口，将注射器针头经小口送入左心室并插至升主动脉起始部，用线将针头固定，剪破右心耳，灌注50ml生理盐水。随后缓缓注入150ml 4%多聚甲醛（pH7.4），固定1h后将脑取出，浸于4%的多聚甲醛中放入4℃冰箱内固定12h，然后转入30%的蔗糖溶液中浸泡48h。

石蜡包埋

1.取出皮层及海马，流水冲洗24h，用梯度浓度的酒精进行脱水，酒精浓度梯度为70%酒精→80%酒精→90%酒精，各30min，95%酒精Ⅰ→95%酒精Ⅱ，各20min，100%酒精Ⅰ→100%酒精Ⅱ，各15min。

2.取出皮层及海马，浸入到二甲苯中透明，1h×2次。

3.取出皮层及海马，浸入到二甲苯与石蜡1:1混合液中，浸泡1小时。 4.取出皮层及海马，浸入到石蜡中，浸泡1小时×2次。 5.在石蜡包埋机上进行组织包埋，冷却后保存在4℃冰箱中备用。 切片

将组织用石蜡切片及进行切片，切片厚度为2μm。连续切片5次，取1张切片，水浴锅展片后贴附在多聚赖氨酸包被的载玻片上。每个组织取5张切片。所有切片在烤箱中60℃烤片2h。

脱蜡及水化(48min)

1.切片在二甲苯中脱蜡10min×2次。

2.切片在梯度

8 JDiagPathol,February2006,Vol.13,No.

1免疫组织化学在乳腺疾病鉴别诊断中的应用皋岚湘,丁华野　(北京军区总医院病理科,北京　100700)

[摘要]　应用免疫组化对乳腺疾病进行分析在以下5个方面具有一定的作用:①评估间质浸润:依靠肌上皮标记物,包括SMA、MSA、SMMHC、calponin、p63、CD10等,在肿瘤周围没有显示出肌上皮层时支持间质浸润的诊断。建议使用2种不同的标记物,p63和SMMHC是很好的互补抗体。②区分导管和小叶性肿瘤:导管原位癌和小叶原位癌

βE12和E2cadherin,导管原位癌E2cadherin(+)和34βE12(-),而小叶原的治疗方案相当不同。建议联合使用抗体34

βE12和CK5/6(+)明显,而导管原位癌34βE12位癌则相反。③鉴别普通导管增生和导管原位癌:导管增生表达34

和CD5/6染色大部分(-)。④鉴别乳腺腺病和浸润性导管癌:硬化性腺病、大汗腺腺病、放射性瘢痕、盲管性腺病和微腺性腺病等有时需经免疫组化与浸润性导管癌鉴别。⑤证明各种转移性腺癌:主要与肺癌(TTF21阳性)、卵巢癌(WT21阳性)、胃癌(CK20阳性)和恶性黑色素瘤(HMB45阳性)鉴别,乳腺癌

切片技术!

第2 6卷第 3期 20 0 9年 6月d i 0 3 6/.sn 10 -6 2 2 0 . 3 0 2 o: . 9 9 jis. 0 89 3 . 0 9 0 . 7 1

生物学杂志J RNA I OG OU L OF B OL Y

Vo _ 6 No 3 I2 .

J n,0 9 u 2 0

冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中的应用谢佩松，中根，存虚徐韦(州大学生物科学与技术学院，苏扬州 2 5 0 )扬江 2 0 9摘要：介绍了冰冻切片法研究植物显微结构和组织化学的一般程序。结果表明，冰冻切片过程简单有效且图版

清晰， 1d内可获得高质量图片，决了利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、在 解浸透、包埋操作且耗时长的问题，植物显微结构和组织化学研究中具有广阔的应用前景。在关键词：冻切片；物；冰植显微结构；化反应组

中图分类号： 3 6 Q一 3

文献标识码： B

文章编号：0 8— 6 2 20}3— o 2一 3 10 9 3 (0 9 0 0 7 O

冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法。与常规的石蜡切片相比， 冰冻切片因其不经过脱水和透明等步骤，具有快速、简

112仪器 ..

Li M10

实验犬环杓后肌功能重建的组织化

学研究及图像分析*

摘要为了确定并比较实验犬两种不同术式：Ⅰ.颈袢胸骨舌骨肌支肌蒂移植术；Ⅱ.副神经胸锁乳突肌支肌蒂移植术，治疗声带麻痹的效果。建立单侧联合性声带麻痹动物模型，分别用Ⅰ、Ⅱ两种术式移植神经肌蒂于失神经的环杓后肌(PCAM)。术后4个月取各组PCAM做超微结构检查，并做光镜组织化

)、糖原学：乙酰胆碱酯酶(AChE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、三磷酸腺苷酶(ATP

ase (PAS)反应。用像分析定量并测示肌纤维直径。结果发现两种术式都能使PCAM 恢复功能，第Ⅱ种术式组织化学结果优于第Ⅰ种术式。为治疗声带麻痹提供了重要的理论根据。

关键词声带麻痹环杓后肌神经肌蒂组织化学像分析

喉部肿瘤、创伤、手术等可引起喉麻痹。当双侧损伤时声带固定于旁中位，常引起严重的呼吸困难。永久性气管造瘘、杓状软骨切除或声带外移等治疗方法，均累及发音功能，并易发生各种并发症。因此实现环杓后肌(posterior cricoarytenoid muscle,PCAM)神经再支配来恢复声带外展功能是更为合理的治疗方法。神经肌蒂(neuromuscular pedicle,NMP)移植术被认为是实现喉内肌神经再支配的有效方法［1］。本研究通过

细胞免疫荧光染色

1. 盖玻片处理：用前1天用纱布擦净灭菌，放入6孔板。

2. 接种细胞：较低密度为适宜，约2000－10000个/孔（根据细胞生长状态决定，常用

5000个/孔），2ml（浓度为2500/ml）

3. 24h后细胞贴壁，根据需要同步16－18h，干预处理，细胞融合60－70％时染色最

佳

4. 37度PBS洗涤，3ml/孔，贴边加（可将6孔板倾斜，加完样在放正以防冲掉细胞，

0.5min。室温PBS也可，但4度禁止，否则细胞易皱缩。

5. 固定：4％多聚甲醛(1ml)，先常温稳定5min，然后4度，10min，（可放在饭盒内）。 6. 吸掉多聚甲醛，迅速加PBS 5ml/孔，洗涤5min×3次，镜下观察，细胞形态如前。 7. 透化：0.1％－4％triton×－100，1ml/孔，室温透化5min（triton是去污剂，目的是

将脂质成分破坏，如细胞膜、核膜等，故不影响实验结果，可不用洗涤）

8. 5％BSA（滤过）室温封闭至少20min（可配制含5％BSA和0.2％triton的混合液，将

两步合成一步）风干

9. 用5％BSA将一抗1：50或1：100（常用）稀释至EP管 200ul/玻片 10. 将纱布垫在饭盒中，去离子水润湿纱

第十一章 抗原提呈细胞与抗原的处理及提呈

一、是非题

1.IL-8是由活化巨噬细胞产生的对巨噬细胞具有趋化和激活作用的细胞因子（ ） 2.巨噬细胞既具有杀菌作用又有抗原加工提呈作用。（ ）

3.NK细胞表面的杀伤细胞抑制受体可识别自身组织细胞表面的MHCⅡ类分子。（ ） 4.B-1B细胞主要分布于淋巴结浅皮质区淋巴滤泡中。 （ ） 5.树突状细胞除了表达FcγRⅡ受体外，还表达甘露糖受体。（ ） 6.巨噬细胞、B细胞、树突状细胞和内皮细胞都是抗原递呈胞。（ ）

7.树突状细胞能够显著刺激已活化的或记忆性T细胞增殖，而巨噬细胞、B细胞仅能刺激初始型T细胞增殖。（ ） 8.巨噬细胞递呈抗原给T细胞受MHC-Ⅰ类抗原的限制。（ ）

9.髓系来源的树突状细胞和淋巴系来源的树突状细胞的区别在于前者前体能分化发育为吞噬细胞，而后者前体能分化为淋巴细胞。（ ） 10.外源性抗原被摄取后主要通过MHCⅡ类途径加工处理和提呈，内源性抗原主要通过MHCⅠ类途径加工处理和提呈，但也存在交叉提呈现象。（ ） 二、填空题

1.参与固有免疫的细胞主要包括________、_________、_________和_____

自身免疫性肝炎诊断标准&自身免疫性肝炎做哪些检查？

自身免疫性肝炎的诊断： 一、实验室检查 1.转氨酶活性

常显著上升，ALT常高于正常值10倍以上，ALT高于AST。血清胆红素水平中度升高。自身免疫性肝炎典型的表现是突出的高丙种球蛋白血症。 2.免疫血清学检查

多种自身抗体阳性为本病的特征。

(1)抗核抗体(ANA)80%的患者体内有此抗体，其滴度和血清7一球蛋白水平相一致。

（2）可溶性肝抗原抗体(抗-SLA)为针对一种可溶性肝抗原的非器官特异性抗体，主要存在于年轻女性病例中，这类患者对类固醇激素治疗反应良好。

(3)抗肝一肾微粒体抗体(LKM)，是Ⅱ型AIH的主要特征。细胞色素P450ⅡD6是LKMl靶抗原，主要存在于年轻或幼小女性患者体内，多呈高滴度阳性，该类患者症状严重，对皮质类固醇反应较好。 (4)线粒体抗体(AMA)30%的病例阳性。

（5）抗肝细胞胞浆抗原1型抗体（LC-1）：抗LC-1抗体为AIHⅡ型的另外一个特异性抗体，其阳性率大于30%，在Ⅱ型AIH血清中可与LKM-1同时存在，也可单独作为诊断指标存在。该抗体的滴度与Ⅱ型AIH的疾病活动具有相关性，为AIH的疾病活动标志及预后指标. （

自身免疫性肝炎诊断标准&自身免疫性肝炎做哪些检查？

自身免疫性肝炎的诊断： 一、实验室检查 1.转氨酶活性

常显著上升，ALT常高于正常值10倍以上，ALT高于AST。血清胆红素水平中度升高。自身免疫性肝炎典型的表现是突出的高丙种球蛋白血症。 2.免疫血清学检查

多种自身抗体阳性为本病的特征。

(1)抗核抗体(ANA)80%的患者体内有此抗体，其滴度和血清7一球蛋白水平相一致。

（2）可溶性肝抗原抗体(抗-SLA)为针对一种可溶性肝抗原的非器官特异性抗体，主要存在于年轻女性病例中，这类患者对类固醇激素治疗反应良好。

(3)抗肝一肾微粒体抗体(LKM)，是Ⅱ型AIH的主要特征。细胞色素P450ⅡD6是LKMl靶抗原，主要存在于年轻或幼小女性患者体内，多呈高滴度阳性，该类患者症状严重，对皮质类固醇反应较好。 (4)线粒体抗体(AMA)30%的病例阳性。

（5）抗肝细胞胞浆抗原1型抗体（LC-1）：抗LC-1抗体为AIHⅡ型的另外一个特异性抗体，其阳性率大于30%，在Ⅱ型AIH血清中可与LKM-1同时存在，也可单独作为诊断指标存在。该抗体的滴度与Ⅱ型AIH的疾病活动具有相关性，为AIH的疾病活动标志及预后指标. （