实验一 γ-球蛋白提取及鉴定

血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定

一、实验目的

1. 掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法； 2. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法； 3. 了解柱层析技术。

二、实验原理

血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白组成，各行使其重要的功能。

本实验利用盐析方法将血清中的清蛋白和球蛋白分离，并用电泳技术观察蛋白质分离教果。

1．盐析

蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白质分子沉淀析出的方法很多，根据对蛋白质稳定因素破坏的不同有中性盐析法、有机溶溶剂法、重金属盐法以及生物碱试剂法等。盐析法的原理是：中性盐如硫酸铵((NH４)２SO4)等对蛋白质作用破坏了蛋白质表面水化膜，并且中和了部分电荷，从而使蛋白质相互聚集而析出。由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不同，因此调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。血清球蛋白在半饱和状态下发生沉淀，而血清清蛋白在完全饱和状态下沉淀，利用此特性可把蛋白质分段沉淀下来，即在半饱和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀

血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定

一、实验目的

1. 掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法； 2. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法； 3. 了解柱层析技术。

二、实验原理

血清蛋白主要由清蛋白和球蛋白组成，各行使其重要的功能。

本实验利用盐析方法将血清中的清蛋白和球蛋白分离，并用电泳技术观察蛋白质分离教果。

1．盐析

蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出，蛋白质分子沉淀析出的方法很多，根据对蛋白质稳定因素破坏的不同有中性盐析法、有机溶溶剂法、重金属盐法以及生物碱试剂法等。盐析法的原理是：中性盐如硫酸铵((NH４)２SO4)等对蛋白质作用破坏了蛋白质表面水化膜，并且中和了部分电荷，从而使蛋白质相互聚集而析出。由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不同，因此调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。血清球蛋白在半饱和状态下发生沉淀，而血清清蛋白在完全饱和状态下沉淀，利用此特性可把蛋白质分段沉淀下来，即在半饱和的中，血清蛋白不沉淀，而血球蛋白沉淀

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析

【实验目的】

1、了解蛋白质分离提纯的总体思路。

2、掌握盐析法、凝胶层析法和离子交换层析的实验原理及操作技术 3、掌握电泳法分离纯化蛋白质的方法。

【实验原理】

1、蛋白质的粗提——盐析法 胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒子使蛋白质周围的水化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的一种。向蛋白质溶液中加入某些浓的无机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出，这种作用就叫做盐析。盐析不能使蛋白质变性，可以复原。利用这个性质，可以采用多次盐析的方法来分离、提纯蛋白质。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，蛋白质溶解度更加降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫

第二章 免疫球蛋白

一.单项选择题

1．下列五类Ig的特性哪项是错误的 A

A．IgG是唯一通过胎盘的免疫球蛋白 B.SIgA多为双聚体

C. IgM分子量最大 D.免疫应答过程中产生最早的是IgG

E.正常血清中IgE含量最少 2．Ig分成五类的依据是 B

A.VL抗原特异性的不同 B.VH抗原特异性的不同 C.CL抗原特异性的不同 D.CH抗原特异性的不同 E.CL及CH抗原特异性的不同 3．结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞的Ig是 D

A.IgM B.IgG C.IgE D.IgA E.IgD 4． IgE C

A.为单体分子 B.有高度细胞亲和性 C.有CH4区 D.可介导过敏反应 E.以上均可 5．半衰期最长的Ig是 A

A.IgM B.IgE C.IgG D.IgA E.IgD 6．Ig分成各种型及亚型的依据是 A

A.VL抗原特异性的不同 B.VH

第二章 免疫球蛋白

一.单项选择题

1．下列五类Ig的特性哪项是错误的 A

A．IgG是唯一通过胎盘的免疫球蛋白 B.SIgA多为双聚体

C. IgM分子量最大 D.免疫应答过程中产生最早的是IgG

E.正常血清中IgE含量最少 2．Ig分成五类的依据是 B

A.VL抗原特异性的不同 B.VH抗原特异性的不同 C.CL抗原特异性的不同 D.CH抗原特异性的不同 E.CL及CH抗原特异性的不同 3．结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞的Ig是 D

A.IgM B.IgG C.IgE D.IgA E.IgD 4． IgE C

A.为单体分子 B.有高度细胞亲和性 C.有CH4区 D.可介导过敏反应 E.以上均可 5．半衰期最长的Ig是 A

A.IgM B.IgE C.IgG D.IgA E.IgD 6．Ig分成各种型及亚型的依据是 A

A.VL抗原特异性的不同 B.VH

牛乳蛋白质的 提取与鉴定

一、实验目的： 了解蛋白质的化学性质； 掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。

二、实验原理： 牛乳中含丰富的蛋白质(水分87.8%、脂 肪3.5%、蛋白质3.1%、乳糖4.9%、灰分 0.7%、能量29.kg/100kg),其中主要是

酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6。

1、酪蛋白提取的原理 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某 一pH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和 负电荷相等，蛋白质以两性离子状态存在， 这时溶液的pH值，称为该蛋白质的等电点 (PI)。 在等电点时，蛋白质所带净电荷为零， 溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质 的这个特点可将蛋白质提取出来。 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可 用乙醇和乙醚洗涤除去。

2、酪蛋白鉴定的原理 酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基 的R基团为：

含酚羟基，可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀，继续反应生成红色沉淀。

酪蛋白中还含有含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸),在碱性溶液中水解后可与醋酸

铅反应生成黑色的硫化铅。

三、操作步骤

(一)酪蛋白的制备新鲜牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40℃

分别加热至同样温度

上清液：保留做鉴定(烧杯)(三)2000r/m

医学免疫学第三版 笔记总结

第2章免疫球蛋白

这一章主要讲述免疫球蛋白的基本结构、其他成分、水解片段及其结构与功能的关系，抗体的异质性（免疫球蛋白的独特型），免疫球蛋白的表达，免疫球蛋白的生物学功能与特性，人工制备抗体：单克隆抗体和基因工程抗体概念等为主要内容。

一、免疫球蛋白的结构（免疫球蛋白分为分泌性和膜型两类）

(1)、四肽链---所有Ig分子的单体结构都是由四肽链的对称结构，包括两条完全相同的分子质量较大的重链（H链）和两条完全相同的分子质量较小的轻链（L链），以二硫键链接而成“Y”字形。

(2) 两个区：可变区和恒定区

可变区:重链和轻链近N端约110个氨基酸序列的变化很大，其组成和排列有较大差异，并决定抗体与抗原结合的特异性。

恒定区（C端）:在同一种属中其氨基酸的组成或排列比较恒定，相对保守。

（3）铰链区 :位于CH1和CH2之间可转动的区域，含丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，有利于Ig V区与抗原互补性结合；有利于暴露补体结合位点；对蛋白酶敏感。结构域:免疫球蛋白的多肽链分子可折叠成若干个由链内二硫键连接的球形结构域。具有一定的生理功能，又称为功能区。

二、免疫球蛋白的其他成分有J链和分泌片

免疫球蛋白肽链的某部分易被蛋白酶水解。免疫球蛋白的水解

一、免疫球蛋白分子的基本结构

Porter等对血清IgG抗体的研究证明，Ig分子的基本结构是由四肽链组成的。即由二条相同的分子量较小的肽链称为轻链和二条相同的分子量较大的肽链称为重链组成的。轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本结构。Ig单体中四条肽链两端游离的氨基或羧基的方向是一致的，分别命名为氨基端（N端）和羧基端（C端）。

图2-3 免疫球蛋白分子的基本结构示意图

（一）轻链和重链

由于骨髓瘤蛋白（M蛋白）是均一性球蛋白分子，并证明本周蛋白（BJ）是Ig分子的L链，很容易从患者血液和尿液中分离纯化这种蛋白，并可对来自不同患者的标本进行比较分析，从而为Ig分子氨基酸序列分析提供了良好的材料。

1．轻链（light chain,L） 轻链大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键内二硫所组成的环肽。L链共有两型：kappa(κ)与lambda(λ)，同一个天然Ig分子上L链的型总是相同的。正常人血清中的κ：λ约为2：1。

2．重链（heavy chain,H链） 重链大小约为轻链的2倍，含450～550个氨基酸残基，

乙肝防治!

病例：肝功能检查中，球蛋白偏高，为35，正常值为20-30，

白球比为1.39，正常值为1.5-2.5，这个是什么原因造成的啊？ 然后总胆红素也是偏高，为23.9，正常值为0-17.1。

其它都是在正常范围内的。医生说要检查血沉和抗O、RF，抗核抗体出结果后才能确定。我很当心啊，到底是什么原因啊，

然后最近因为家里发生了些事情，会不会对肝功能有影响呢？ Dna：

Dna8.81 x10的2次方，总蛋白：89.9,球蛋白41.4，35从我们医生的角度5x10的2次方以下，就是500以下。可以认为是没有乙肝。。。 病毒。临床上的标准是5x10的3次方以下。从临床的角度你应该是阴性的。 那么你2对半怎么样。有阳性的吗？如果没有阳性。 你根本不用考虑肝硬化这个问题。

答复解疑

球蛋白偏高的原因是什么呢?球蛋白偏高的危害是什么呢？其实，肝脏发生慢性炎症，体内有细菌或病毒存在，这些病原体产生的抗原，都可以刺激淋巴细胞，淋巴细胞被激活了，就能多产生一些抗体。因为抗体是球蛋白生成的，球蛋白偏高的原因是什么的问题就是出在这里。

另外，α-球蛋白是肝细胞产生，当肝脏出现炎症时肝细胞坏死，α球蛋白就会升高;γ-球蛋白是人体免疫系统产生的。病程越长，病症越重，球蛋白会越

第四章 免疫球蛋白

第一节 基本概念

1、抗体：B淋巴细胞在有效的抗原刺激下分化为浆细胞，产生具有与相应抗原发生特异性结合功能的免疫球蛋白，这类免疫球蛋白称为抗体。

1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。 20世纪40年代初期，Tiselius和Kabat用肺炎球菌多糖免疫家兔，证实了抗体活性与血清丙种球蛋白组分相关。肺炎球菌多糖免疫家兔后可获得高效价免疫血清。然后加入相应抗原吸收以除去抗体，将除去抗体的血清进行电泳图谱分析，发现丙种球蛋白（γ-G）组分明显减少，从而证明了抗体活性是存在于丙种球蛋白内。

2、免疫球蛋白：具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白 (immunoglobulin，Ig)。 区别：

抗体都是免疫球蛋白，而免疫球蛋白并不都是抗体。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白结构与抗体相似，但无抗体活性。

免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型