sds蛋白电泳最低浓度

SDS-PAGE

一. 实验原理

SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的 SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关， 也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材

30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃ 贮存，每

使用image j 软件对SDS-PAGE进行灰度分析,定量蛋白质的浓度。

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实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳 蛋白质电泳 准备实验----------溶液的配置 溶液的配置

实验内容

一、变性蛋白质电泳系列溶液1、单体母液 (1,4,8组) 、 50 ml 组 15.00 g 丙烯酰胺 0.40 g 甲叉双丙烯酰胺 去离子水定容至50 ml ,定性中速滤纸过滤，棕 去离子水定容至 定性中速滤纸过滤， 定性中速滤纸过滤 色试剂 瓶4℃存放。 ℃存放。 2、 10% (w/v) SDS (2,4,9组) 10ml 、 % 组 SDS 1.0 g 10 ml 去离子水

3、分离胶缓冲液(4×,pH=8.80,50 ml)( 、分离胶缓冲液( × )(1,7,8组) , )( 组 Tris-Base(1.5 mol/L) 9.08 g 10%(w/v)SDS 2 ml % 用30ml去离子水溶解，再用浓HCl调节 到8.8,过 去离子水溶解，再用浓 调节pH到 ， 去离子水溶解 调节 定容到50ml,4℃存放。 滤，定容到 ℃存放。 4、浓缩胶缓冲液(4× ,pH=6.80,50 ml )( 、浓缩胶缓冲液( × )(3,5,10组) , 组 Tris-Base(0.50 mol/L) 3

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

双向电泳

一、材料

样品：人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH

二、试剂

SDS-PAGE所需试剂 1、30％Acry-Bis (w/v)

29.2％Acry29.2g

0.8％Bis0.8g

加水至100ml溶解，棕色试剂瓶4℃贮存，PH<7，数月后重配

2、10％的SDS贮液 (w/v)

RT保存，因SDS在4℃会析出

3、Tris-HCl buffer

①1.5M的PH8.8的Tris-HCl buffer——分离胶buffer

100ml含Tris18.171g，加DDW至80ml，用浓HCl调PH8.8，再定容至100ml，4℃保存

②1.0M的PH6.8的Tris buffer——浓缩胶buffer：

50ml 含Tris6.057g，加DDW至40ml，用浓HCl调PH6.8，再定容至50ml，4℃保存

4、TEMED

以游离碱形式发挥作用，催化AP形成自由基，故PH较低时，聚合反应受抑制，易吸湿，被氧化，从无色变为黄色，故因密闭4℃保存

5、10％ AP

1g的AP溶于10ml水中，4℃保存，隔周新鲜配置

6、PH8.3 电泳缓冲液1L，RT保存

Tris碱

Gly（25.05） SDS

加水至1L，可不调PH

7、甘油液4℃

蛋白浓度测定

蛋白质的定量分析是生物化学和其它生命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标，也是许多生物制品，药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作。

蛋白质是一种十分重要的生物大分子：它的种类很多，结构不均一，分子量又相差很大，功能各异，这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法代来了许多具体的困难。目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法： 物理性质：紫外分光光度法

化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry 法，BCA法，胶体金法 染色性质：考马氏亮蓝染色法、银染法 其他性质：荧光法

蛋白质测定的方法很多，但每种方法都有其特点和局限性，因而需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的方法，以满足不同的要求。例如凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，用于大批量样品的测试则不太合格；双缩脲法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制；而酚试剂法弥补了它的缺点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素多；考马氏亮兰染色法因其灵敏而又

介绍了生物法净化技术在处理低浓度废气方面的应用以及各种废气的净化原理,主要包括挥发性有机化合物(VOCs)、CS2、H2S、SO2含硫废气、NOx等。

维普资讯

环境科学导刊

20,2 ( ) 9— 1 0 7 6 3:4 5

C5 N 3—10/ IS 17 9 5 2 5 X SN 63— 65

生物法净化技术处理低浓度废气的应用贺克雕，马丽萍 (昆明理工大学环境科学与工程学院，云南昆明 609 ) 50 3

摘

要：绍了生物法净化技术在处理低浓度废气方面的应用以及各种废气的净化原理，主要包括挥介

发性有机化合物 ( O s、C 2 2、S 2 V C ) S、H S O含硫废气、N x等。 O关键词：废气处理；生物法；低浓度废气；应用

中图分类号：X 1 5

文献标识码：A

文章编号：17 95 (0 7 3— 09— 3 6 3— 6 5 20 )0 04 0物反应器工作的机理如图 1示。所

生物法废气净化技术是在已成熟的采用微生物处理废水方法的基础上发展起来的一项低浓度工业

废气净化前沿热点技术，属于多学科交叉的环保高新技术。国内外的相关研究与实践证明，采用常规

技术已无法对既无回收利用价值又污染环境的低浓度工业废气进行经济、有效的净化处理，而生物法废气净

蛋白质双向电泳实验流程

一．样品制备 1.研磨

研磨时间要尽量短，并需及时补充液氮，研磨要充分，同时要保证损失少。

2.加入8mLTris饱和酚（pH8.8）和8mL抽提液，在通风橱内研磨30s。 先加8mLTris饱和酚，Tris饱和酚会变成固体，此时需用研磨碓将固体的Tris饱和酚研磨成小块。接着加入8mL抽提液，也需将固体的抽提液研磨成小块。等三者混匀后，将粉末转移至45 mL tube。

3.振荡30min。

室温静置，待tube中固体变成液体后，开始振荡。振荡需持续30min，每振荡1min，置于冰上冷却1min。

4.10000g，4℃，10min。将酚相（top phase）转移至45mL tube。酚相（top phase）可置于冰上。

酚相应该是绿色的，水相应该是淡黄色的。

5.取6mL的抽提液和6mL饱和酚加入水相，蜗旋振荡30min。 振荡需持续30min，每振荡1min，置于冰上冷却1min。

6.10000g，4℃，10min。将酚相（top phase）转移至45mL tube。

7.沉淀酚相。取一定体积（是酚相的5倍）的0.1M乙酸铵/甲醇溶液（–20℃保存）于酚相（45mL tube）。振荡30s，

碧云天 BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒 产品编号 产品名称 包装

蛋白浓度测定试剂盒次

产品简介：

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¾ BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而 成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。 灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。 在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的

Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。

BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:

/Compatibility Chart For B