生物学实验方法有哪些

生物学大实验（硕士研究生实验课内容）

一． 细胞培养技术与方法 1. 教学目的与要求：

1) 了解细胞培养室的设置，设备和无菌操作。 2) 掌握细胞培养用器械的清洗与消毒方法。 3) 掌握细胞培养的实验程序 。

4) 掌握细胞的复苏、细胞的计数、细胞的传代培养、细胞的冻存方法。

2. 教学内容：

（1）实验器材的清洗包装和消毒：

一）玻璃器械洗消：

（一）新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200mL：蒸馏水1000mL）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次，用双蒸水过3次。

5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 7.高压消毒后烘干 。

（二）旧的玻璃器皿的洗消：

1.刷洗、烘干：使用

生物学大实验（硕士研究生实验课内容）

一． 细胞培养技术与方法 1. 教学目的与要求：

1) 了解细胞培养室的设置，设备和无菌操作。 2) 掌握细胞培养用器械的清洗与消毒方法。 3) 掌握细胞培养的实验程序 。

4) 掌握细胞的复苏、细胞的计数、细胞的传代培养、细胞的冻存方法。

2. 教学内容：

（1）实验器材的清洗包装和消毒：

一）玻璃器械洗消：

（一）新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200mL：蒸馏水1000mL）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次，用双蒸水过3次。

5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。 7.高压消毒后烘干 。

（二）旧的玻璃器皿的洗消：

1.刷洗、烘干：使用

普通生物学实验（三）

教 案

目 录

35、细菌的简单染色、革蓝氏染色???????????????????????3 36、细菌的芽孢、荚膜、鞭毛染色鉴定及运动性观察???????????????5 37、微生物细胞形态及菌落特征观察??????????????????????11 38、培养基制作、灭菌与无菌操作接种技术??????????????????? 19 39、微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数???????????????????35 附：微生物的菌种保藏?????????????????????????????41 40、微生物鉴定中常用的生化反应……………………………………………………………45 附：微生物自动鉴定仪鉴定???????????????????????????48 41、微生物细胞大小测定及显微镜直接计数 ??????????????????51 42、乳酸菌分离及食用乳酸制作 ???????????????????????55 ①乳酸菌分离与鉴定?????????????????????????????55 ②食用乳酸制作???????????????????????????????55

普通生物学实验（三）

教 案

目 录

35、细菌的简单染色、革蓝氏染色???????????????????????3 36、细菌的芽孢、荚膜、鞭毛染色鉴定及运动性观察???????????????5 37、微生物细胞形态及菌落特征观察??????????????????????11 38、培养基制作、灭菌与无菌操作接种技术??????????????????? 19 39、微生物的分离纯化及稀释平板菌落计数???????????????????35 附：微生物的菌种保藏?????????????????????????????41 40、微生物鉴定中常用的生化反应……………………………………………………………45 附：微生物自动鉴定仪鉴定???????????????????????????48 41、微生物细胞大小测定及显微镜直接计数 ??????????????????51 42、乳酸菌分离及食用乳酸制作 ???????????????????????55 ①乳酸菌分离与鉴定?????????????????????????????55 ②食用乳酸制作???????????????????????????????55

Western blot 实验

1、试剂配制： （一）母液

1.0mol/L Tris·HCl

Tris (MW121.14) 12.12g 蒸馏水 50ml

溶解后，用浓盐酸调pH至6.8（见下所示），最后用蒸馏水定容至100ml，室温下保存。 注：PH ： 6.8 约需22ml浓盐酸

10％ SDS

SDS 10g

蒸馏水定容至 100ml

50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

10％过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml

溶解后，4℃保存，保存时间为1周，最好现配先用。

1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris 18.2g

蒸馏水 50ml

溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用蒸馏水定容至100ml，室温下保存。

30％Acr/Bic（29：1

1．显微观察法：如“观察细胞有丝分裂”“观察叶绿体和细胞质流动”“用显微镜观察多种多样的细胞”等。

2．观色法：如“生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定”“观察动物毛色和植物花色的遗传”“DNA和RNA的分布”等。

3．同位素标记法（元素示踪法）：如“噬菌体浸染细菌的实验”“恩格尔曼实验”等。

4．补充法：如用饲喂法研究甲状腺激素，用注射法研究动物胰岛素和生长激素，用移植法研究性激素等。

5．摘除法：如用“阉割法、摘除法研究性激素、甲状腺激素或生长激素的作用”“雌蕊受粉后除去正在发育着的种子”等。

6．杂交法：如植物的杂交、测交实验等。

7．化学分析法：如“番茄对Ca和Si的选择吸收”“叶绿体中色素的提取和分离”等。

8．理论分析法：如“大、小两种草履虫的竞争实验”“植物向性动物的研究”等。

9．模拟实验法：如“渗透作用的实验装置”“分离定律的模拟实验”等。

10．引流法：临时装片中液体的更换，用吸水纸在一侧吸引，于另一侧滴加换进的液体。

11．实验条件的控制方法

⑴增加水中O2：泵入空气或吹气或放入绿色植物；

⑵减少水中O2：容器密封或油膜覆盖或用凉开水；

⑶除去容器中CO2：NaOH溶液、Na2CO3溶液；

⑷除去叶中原有淀粉：置于黑暗环境（饥饿）；

⑸除去叶中叶绿素

一、 填空题

1.透射电子显微镜由 、 、 三部分所组成。

2.在酵母人工染色体制备过程中，要使用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为 ，并且 进行观察和计数。 3.观察贴壁生长的培养动物细胞可用 。

4.电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。

5.物质在紫外光照射下发出的荧光可分为 和 两种，其中 需要将被照射的物质进行染色。

6.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为 。

7.相差显微镜与普通显微镜的区别是用 替代可变光阑，用 代替普通物镜。 8.倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其 。 9.显微镜的分辨本领是指能够 能力，用 来表示。 10.电子染色是用 来增强电子的散射能力。

11.在光学显微镜下见到的结构称为 ，在电子显微镜下见到

一、 填空题

1.透射电子显微镜由 、 、 三部分所组成。

2.在酵母人工染色体制备过程中，要使用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为 ，并且 进行观察和计数。 3.观察贴壁生长的培养动物细胞可用 。

4.电子显微镜使用的是 透镜，而光学显微镜使用的是 透镜。

5.物质在紫外光照射下发出的荧光可分为 和 两种，其中 需要将被照射的物质进行染色。

6.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为 。

7.相差显微镜与普通显微镜的区别是用 替代可变光阑，用 代替普通物镜。 8.倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其 。 9.显微镜的分辨本领是指能够 能力，用 来表示。 10.电子染色是用 来增强电子的散射能力。

11.在光学显微镜下见到的结构称为 ，在电子显微镜下见到

实验一 显微镜的结构及使用

[实验目的]

（一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。 （二）掌握显微镜的使用方法。 （三）了解显微镜的维护方法。 [实验原理]

虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。

[实验器材]擦镜纸 字母装片 羊毛交叉擦片 普通光学显微镜 二甲苯 香柏油 三 内容与方法：

普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2） （一） 1.

微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。 机械部分：

（1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。 （2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。

（3）镜臂：镜柱上方弯曲部分

实验一 线粒体和液泡系的超活染色

[实验目的]

1、学习一些细胞的超活染色技术。

2、通过超活染色观察活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 [实验原理]

活体染色是指对生活有机体的细胞或 的某些结构组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。站那思虑B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 [仪器、材料与试剂]

1、仪器：显微镜、恒温水浴锅

2、材料：洋葱鳞茎内表皮细胞、黄豆幼根根尖、载玻片、盖玻片、10ml量筒、吸管、吸水纸

黄豆幼根根尖培养方法：将黄豆种子用温水泡胀后，培养在培养皿内多层润湿的滤纸上（水稍淹住黄豆为宜），30℃使其发芽，3~4天后，胚根伸长到1cm以上。 3、试剂：

⑴ Ringe