16s rRNA

16S rRNA在细菌分类鉴定研究中的应用

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动物医学进展。0 6 2 ( 1:5 1 2 0, 7 1 ) 1—8Pr gr s n e e i r e ii o e s i V t rna y M d cne

1 RNA在细菌分类鉴定研究中的应用 Sr 6刘文强，贾玉萍。赵宏坤。,( .城大学农学院，东聊城 2 2 5;. 1聊山 5 0 92山东大学生命科学学院，山东济南 2 2 0; 5 10

3山东农业大学动物科技学院， .山东泰安 21 1) 7 0 8中图分类号：8 2 6￥ 5 .1文献标识码： A文章编号：0 75 3 ( 06 1—0 50 1 0—0 82 0 ) 10 1—4

该湖大摘要：菌的 1核糖体 RNA( io o 善，技术已应用于海洋、泊和土壤、气微生物细 6S r s me b 2] R NA,R r NA)其在进化上的特征性序列，菌群和病原微生物等环境微生物多样性的分析[。以

6Sr NA作为细菌分子鉴定的依据现已被广泛用于细菌分类和鉴定的分子指 1 1 R标。其具体操作是，以聚合酶链式反应 ( C分离细菌样本中的 1 R P R) 6S r NA

16S rDNA鉴定细菌的方法

细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：

1.提取细菌基因组DNA,

2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。 3.琼脂糖凝胶电泳分离 4.胶回收目的片段 5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。 7.构建系统进化树

试剂：

1.1培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。）。 1.2 1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高盐灭菌后，室温保存。冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。 1.3 0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA?2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。

1.4 10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。1M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）

16S rDNA鉴定细菌的方法

细菌16S rDNA鉴定主要分为7个部分：

1.提取细菌基因组DNA,

2.设计/选择引物进行PCR扩增，电泳检测纯度与大小。 3.琼脂糖凝胶电泳分离 4.胶回收目的片段 5.目的片段测序。

6.BLAST比对获取相似片段。 7.构建系统进化树

试剂：

1.1培养基：通常选择组分简单且细菌生长良好的培养基（培养基组分过于复杂会影响DNA的提取效果，也可以在裂解细菌前用TE缓冲液对菌体进行洗涤。）。 1.2 1M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)（1L）：121.1g Tris，加浓盐酸约（70ml, 60ml, 42ml），高温高盐灭菌后，室温保存。冷却到室温后调pH，每升高1℃，pH大约下降0.03个单位。 1.3 0.5M EDTA（pH8.0）（1L）：186.1g Na2EDTA?2H2O，用NaOH调pH至8.0（约20g）,高温高压灭菌，室温保存。

1.4 10×TE Buffer(pH7.4，7.6，8.0)（1L）：组分：100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA。1M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）取100ml，0.5M EDTA（pH8.0）

用16S rDNA方法鉴定细菌种属

一、实验目的

1. 掌握16S rDNA对细菌进行分类的原理及方法；

2. 掌握DNA提取、PCR原理及方法、DNA片段回收等实验操作。

二、实验原理

细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。

16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。是一种快速获得细菌种属信息的方法。

16S rDNA是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分子钟，其种类少，含量大（约占细菌RNA含量的80％），分子大小适中，存在于所有的生物中，其进化具有良好的时钟性质，在结构与功能上具有高度的保守性，素有“细菌化石”之称。在大多数原核生物中rDNA都具有多个拷贝，5S、16S、23S rDNA的拷贝数相同。16S rDNA由于大小适中，约1.5Kb左右，既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列，故被细菌学家和分类学家接受。

16SrR

肠道菌群16s 宏基因组及代谢组关联分析方案

一、项目简介

1.1 多组学关联分析概述

对多组学进行关联分析主要包括跨组学相关性分析以及基于机器学习算法的组合型生物标志物发现和多组学数据的深度挖掘。其中，对于跨组学相关性分析目前主要由 4 部分组成，分别是：

（1）基于参考文献和数据库的关联分析； （2）基于代谢通路分析的关联分析； （3）基于交互作用的关联分析； （4）基于统计方法的关联分析。

在基于统计方法的关联分析中，不仅包含了基于相关性的整合分析，如皮尔森相关性分析(Pearson Correlation)、斯皮尔曼秩相关性分析 (Spearman Rank Correlation) 等，而且还有基于数据拼接的整合分析、基于多变量的整合分析（如典型的 O2PLS 分析）和基于代谢通路（pathway）的整合分析。

图 1. 多组学关联分析示意图

1.2肠道菌群 16s rRNA 测序

核糖体是细菌唯一的细胞器，是蛋白质合成的场所，它的沉降系数是 70s，在适当条件 下解离成 50s 和 30s 两个大小亚基，两个亚基都含有 RNA 和蛋白质。rRNA 按沉降系数分 3种，分别为 5s，16s 和 23s。

5s 和 23s rRNA

一、实验材料

菌种：某浸矿混合菌。

设备：eppendorf管、移液枪、台式高速离心机、电泳仪、水浴锅、PCR仪、无菌操作台、牙签、枪头、酒精灯。

试剂：细菌基因组DNA提取试剂盒、LB液体培养基、LB固体平板培养基、TE缓冲液（pH 8.0）、切胶回收试剂盒、Taq DNA polymerase，10 mM dNTPmix，引物，双蒸水，琼脂糖、溴乙锭EB、电泳缓冲液（50×TAE电泳缓冲液：取Tris 24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/L EDTA（pH8.0） 20ml，加蒸馏水至100ml）、pGM-T 克隆试剂盒、Hind III、石蜡。

二、实验步骤

1 细菌基因组DNA提取 1.1 样品收集

菌种培养至OD600为1-1.5，此时1 mL 菌液中约含1.0×109细胞，用灭过菌的1.5mL离心管去菌液1 ml，室温10,000 rpm离心1 min，收集菌体。

1.2 基因组DNA的提取

（使用前先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积参照瓶上的使用说明。）

1.向菌体沉淀中加入200 μl 缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮； 2.向管中加入20 μl 蛋白酶K溶液，混匀；

3.加入220 μl 缓冲液GB，

更多35KV无励磁调压变压器的知识及技术参数详见：www.tjgg.com.cn----www.2897.cn S11-2500KVA/35KV/10KV-6KV-0.4KV电力变压器规格参数 S9(S11)-□/□

其中，S表示三相油浸式变压器 9(11)为水平性能代号

□/□表示 额定容量/额定电压（高压侧），35KV所对应的低压侧可以10kv/6kv/0.4KV S11-2500KVA/35KV电力变压器执行标准 1.GB1094.1~2-1996电力变压器 2.GB1094.3,5-2003电力变压器

3.GB/T6451—2008三相油浸式电力变压器技术参数和要求 S11-2500KVA/35KV电力变压器技术数据表 商标 结构形式 规格容量 冷却方式 油浸式电力变压器 2500KVA AN/ON 型号 绕组数 电压等级 调压方式 短路阻抗 S11-2500KVA/35KV 三相 35KV/10KV35KV/6KV,35KV/0.4KV 无调压分接开关 6.5% ，联接组标号 YD11 S11-2500KVA/35KV变压器特点： A.35kv变压器采用波纹油箱温升占地面积小，外形美观。 B.高、低压线圈直接绕在铁心上，两线圈

单片机原理与应用 课程设计报告

作品名称： 基于AT89S52的16LED摇摇棒

专业班级： 测控技术与仪器 学 号： 姓 名： 徐达健

指导老师：

2009年6月

单片机课程设计报告

目 录

一、作品说明……………………………………………………2 二、系统总体设计………………………………………………4 三、硬件设计……………………………………………………6 四、软件设计……………………………………………………7 五、系统调试与分析……………………………………………8 六、课程作品制作体会…………………………………………11

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单片机课程设计报告

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其中，S表示三相油浸式变压器 9(11)为水平性能代号

□/□表示 额定容量/额定电压（高压侧），35KV所对应的低压侧可以10kv/6kv/0.4KV S11-2500KVA/35KV电力变压器执行标准 1.GB1094.1~2-1996电力变压器 2.GB1094.3,5-2003电力变压器

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