免疫共沉淀结果图分析
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免疫共沉淀
免疫共沉淀 from WHU SKY
1用细胞刮子收细胞,3000rpm,5min,离心,去上清;或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温,冰上或4度冰箱或4度离心机。
2 PBS清洗,重复步骤1
3选择合适的bufer裂解细胞,现加1000XAL(一般核质均分布的建议使用NP-40,核内分布的建议使用High Salt ,只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer),加入1ml Buffer (106-107个细胞),4℃,30min(在功能旋转仪上旋转裂解)。 4 12000rpm,15min,离心取上清(若上清仍浑浊,可重复离心1-2次)50ul上清作为 Input,其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug(可根据抗体效价酌情增减),4℃,旋转2-4h,
加抗体时要计算使用相同抗体的样品数,取(N+1~2)*1ug,用小量裂解buffer
稀释,再均分到各样品中,以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间,准备Protein G(一个反应20ul纯beads,如果beads原管中液体和beads体积比是1:1,一个样品取总体积40ul,多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物)
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
全自动酶联免疫法与手工酶联免疫法的结果比较(修改稿)
全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法的检测结果比较
王胜虎1) 陈琪 1) 李媛 2)
1)昆明医科大学附属延安医院检验科,云南昆明 650051; 2)昆明医科大学海源学院基础部,云南昆明
650500
[摘要] 目的 通过比对全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法检测临床标本结果的相关性及符合率,探讨更科学可靠的检验方法。 方法 随机抽取90份临床与体检标本,经Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪和手工加样操作的IMARK2酶标仪测定甲肝、乙肝5项、丙肝、戊肝2项、TP及HIV的结果,并对结果进行相关性及合率的分析 。结果 对所检测项目中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、TP、HIV的相关性系数r>0.9 ,其数据显示相关性较好;而HAV-IgM、HBeAb、HBcAb、HCV、HEV-IgM、HEV-IgG、的相关性系数为 0.9>r >0.6 ;Tecan Freedom Evolyzer-2200全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法操作比对90个样本的11项检测结果总符合率达96.9%。 结论 全自动酶联免疫分析仪与手工酶联免疫法有较好的相关性。全自动酶联免疫分析仪的使用还大大的
PKPM电算结果分析
PKPM电算结果分析
二 振型曲线的评定
结构基本自振周期的计算方法有三种:能量法,等效质量法,顶点位移法。但是有钢筋混凝土框架的经验公式值:第一振型T1=(0.12-0.15)n,第二振型T2=(1/3-1/5) T1,第三振型T3=(1/5-1/7) T1。详见《高层建筑混凝土结构技术规程》4.2.3,调入PKPM电算结果: 考虑扭转耦联时的振动周期(秒)、X,Y 方向的平动系数、扭转系数
振型号 周 期 转 角 平动系数 (X+Y) 扭转系数 1 0.6323 92.50 0.88 ( 0.00+0.87 ) 0.12 2 0.6194 29.58 0.41 ( 0.31+0.10 ) 0.59 3 0.6159 168.83 0.72 ( 0.69+0.03 ) 0.28 4 0.2030 93.38 0.87 ( 0.00+0.87 ) 0.13 5
PKPM电算结果分析
PKPM电算结果分析
二 振型曲线的评定
结构基本自振周期的计算方法有三种:能量法,等效质量法,顶点位移法。但是有钢筋混凝土框架的经验公式值:第一振型T1=(0.12-0.15)n,第二振型T2=(1/3-1/5) T1,第三振型T3=(1/5-1/7) T1。详见《高层建筑混凝土结构技术规程》4.2.3,调入PKPM电算结果: 考虑扭转耦联时的振动周期(秒)、X,Y 方向的平动系数、扭转系数
振型号 周 期 转 角 平动系数 (X+Y) 扭转系数 1 0.6323 92.50 0.88 ( 0.00+0.87 ) 0.12 2 0.6194 29.58 0.41 ( 0.31+0.10 ) 0.59 3 0.6159 168.83 0.72 ( 0.69+0.03 ) 0.28 4 0.2030 93.38 0.87 ( 0.00+0.87 ) 0.13 5
PKPM电算结果分析
PKPM电算结果分析
二 振型曲线的评定
结构基本自振周期的计算方法有三种:能量法,等效质量法,顶点位移法。但是有钢筋混凝土框架的经验公式值:第一振型T1=(0.12-0.15)n,第二振型T2=(1/3-1/5) T1,第三振型T3=(1/5-1/7) T1。详见《高层建筑混凝土结构技术规程》4.2.3,调入PKPM电算结果: 考虑扭转耦联时的振动周期(秒)、X,Y 方向的平动系数、扭转系数
振型号 周 期 转 角 平动系数 (X+Y) 扭转系数 1 0.6323 92.50 0.88 ( 0.00+0.87 ) 0.12 2 0.6194 29.58 0.41 ( 0.31+0.10 ) 0.59 3 0.6159 168.83 0.72 ( 0.69+0.03 ) 0.28 4 0.2030 93.38 0.87 ( 0.00+0.87 ) 0.13 5
重量分析和沉淀滴定答案
重量分析和沉淀滴定答案
一、单项选择
1. 以铁铵矾为指示剂,用NH4CNS标准液滴定Ag+时,应在下列哪种条件下进行?( A )
A. 酸性
B. 弱酸性 C. 中性
D. 弱碱性
2. 莫尔法测定Cl-含量时,要求介质的pH在6.5~10.0范围内,若酸度过高,则( D )
A. AgCl沉淀不完全 B. AgCl沉淀易胶溶 C. AgCl沉淀吸附Cl-增强 D. Ag2CrO4沉淀不易形成 A. 表面积要大 B. 颗粒要粗大 C. 耐高温 D. 组成要与化学式完全相符 4 . 佛尔哈德法测定 Cl 时,溶液应为(A ) A. 酸性 B. 弱酸性 C. 中性 D. 碱性 5. 可用于测定水硬度的方法有( A )
A.EDTA法 B.K2Cr2O7 C.碘量法 D. 酸碱滴定法 6. 下列条件中( C)不是晶形沉淀所要求的沉淀条件
A. 沉淀作用宜在较稀溶液中进行 B 应在不断搅拌下加入沉淀剂 C. 沉淀作用宜在冷溶液中进行 D. 应进行沉淀的陈化 7. 测定 SCN- 含量时,选用(B )指示剂
A. K2Cr2O7 B. NH4
乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA监测结果相关性分析及临床应用
目的分析了解乙肝血清免疫标志物的各种表达模式与乙肝病毒含量的相关性,为临床诊断、治疗提供依据。方法应用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎免疫标志物,同时应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量监测乙型肝炎病毒(HBV-DNA)。所有检测标本乙肝血清免疫标志物和乙肝病毒含量同时检测。结果乙肝血清免疫抗原标志物乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性、乙
临床和实验医学杂志 2 1年 2月第 1卷第3 02 1期
0 2 3
乙肝血清免疫标志物及 H V—D A B N监测结果相关性分析及临床应用王凤岚黄朝芳冯万周 1宝鸡市中心医院感染科 (陕西宝鸡 7 10; 208
2旬阳县中医院检验科【要】目的摘
陕西旬阳 750; 270 3宝鸡市人民医院输血科
陕西宝鸡 7 10 ) 200
分析了解乙肝血清免疫标志物的各种表达模式与乙肝病毒含量的相关性,为临床诊断、治疗提供
依据。方法应用时间分辨荧光免疫分析法( R I检测乙型肝炎免疫标志物, T FA)同时应用实时荧光定量聚合酶链反应 ( Q— C ) F P R技术定量监测乙型肝炎病毒( B D A。所有检测标本乙肝血清免疫标志物和乙 H V— N )肝病毒含量同时检测。 结果
卡方检验结果分析
样本的基本信息:
一、样本总数56
二、性别:男27人,女29人 三、年级:大二
四、民族:汉族25人,少数民族31人
五、学院:社心学院16人,管理学院12人,旅历学院17人,计科学院11人
◆性别与其它因素的关系:
1、平时阅读情况与性别的关系
卡方检验 值 Pearson 卡方 似然比 Fisher 的精确检验 线性和线性组合 有效案例中的 N 2.128 2.151 2.098 2.052 55 caMonte Carlo Sig.(双侧) Monte Carlo Sig.(单侧) 渐进 Sig. (双df 2 2 侧) .345 .341 Sig. .339 .304 .375 .152 .089 bbbb95% 置信区间 Sig. 95% 置信区间 下限 .215 .183 .248 .015 上限 .463 .424 .502 .164 下限 上限 .054 b .000 .113 1 a. 2 单元格(33.3%) 的期望计数少于 5。最小期望计数为 4.25。 b. 基于 56 采样表,启动种子为 705346993 。 c. 标准化统计量是 1.432。 结论:经过交叉表卡