生物药物分离纯化的实验设计

噬菌体的分离与纯化

（小组成员：宋淑芳、项媛媛、谢坤、陈金杰、陶思凡）

一、实验目的

学习分离纯化噬菌体的基本原理和方法，观察噬菌斑 二、实验原理

噬菌体感染宿主细胞后，其DNA（或RNA）在细胞体内进行复制、转录，相关基因表达，装配成完整的噬菌体颗粒，最后裂解宿主细胞或通过挤出方式从宿主细胞（宿主细胞不被杀死，如M1噬菌体）中释放出来。因此，①在液体培养基中可使浑浊的菌悬液变为清亮或较清亮。利用噬菌体的这种特性，在样品中加入敏感菌株与液体培养基混合后培养，噬菌体便能大量增殖，释放，从而可分离到特定的噬菌体。②在有宿主细菌生长的软琼脂平板上，噬菌体可裂解细菌或限制被染细菌的生长，形成透明的或浑浊的空斑，亦称噬菌斑。一个噬菌体产生一个噬菌斑，利用这种现象可将分离获得的噬菌体进行纯化。 三、实验用具及材料

1.菌种：大肠杆菌 2.试剂：氯仿 3.培养基：

液体牛肉膏培养基：胰蛋白胨2g，牛肉膏0.6 g，NaCl 1g，加H2O至200mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

3×牛肉膏培养液：胰蛋白陈3g，牛肉膏 0.9g，NaCl 1.5g，加H2O至100mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

固体牛肉膏培养基：每100m

药物分离纯化技术 第一章

分离纯化过程：通过物理，化学或生物等手段，或将这些方法结合，将某混合物系分离纯化成两个或多个组成彼此不同的产物的过程。

分离纯化过程按原理分类可分为两类：机械分离（相间无物质的传递），传质分离（相间有物质的传递） 回收率：R=Q/Q0X100%（1%以上常量分析的回收率应大于99%；痕量组的分离应大于90%或95%。） 分离因子：SA,B=RA/RB=（QA/QB）/（Q0A/Q0B） 分离因子的数值越大，分离效果越好。 第二章

萃取：将样品中的目标化合物选择性的转移到另一相中或选择性地保留在原来的相中（转移非目标产物），从而使目标化合物与原来的复杂基体相互分离的方法。

反萃取：在溶剂萃取分离过程中，当完成萃取操作后，为进一步纯化目标产物或便于下一步分离操作的正确，往往需要将目标产物转移到水相，这种调节水相条件，将目标产物从有机相转入水相的萃取操作。

物理萃取：溶质根据相似相溶的原理在两相间达到分离平衡。特点：被萃取物在水相和有机相中都以中性分子的形式存在，溶剂与被萃取物之间没有化学结合，也不外加萃取剂，两种分子的大小与结构越相似，他们之间的互溶性越大。

化学萃取：也称为反应萃取，是利用脂溶性萃取剂与溶质之间的化学反

药物分离纯化技术 第一章

分离纯化过程：通过物理，化学或生物等手段，或将这些方法结合，将某混合物系分离纯化成两个或多个组成彼此不同的产物的过程。

分离纯化过程按原理分类可分为两类：机械分离（相间无物质的传递），传质分离（相间有物质的传递） 回收率：R=Q/Q0X100%（1%以上常量分析的回收率应大于99%；痕量组的分离应大于90%或95%。） 分离因子：SA,B=RA/RB=（QA/QB）/（Q0A/Q0B） 分离因子的数值越大，分离效果越好。 第二章

萃取：将样品中的目标化合物选择性的转移到另一相中或选择性地保留在原来的相中（转移非目标产物），从而使目标化合物与原来的复杂基体相互分离的方法。

反萃取：在溶剂萃取分离过程中，当完成萃取操作后，为进一步纯化目标产物或便于下一步分离操作的正确，往往需要将目标产物转移到水相，这种调节水相条件，将目标产物从有机相转入水相的萃取操作。

物理萃取：溶质根据相似相溶的原理在两相间达到分离平衡。特点：被萃取物在水相和有机相中都以中性分子的形式存在，溶剂与被萃取物之间没有化学结合，也不外加萃取剂，两种分子的大小与结构越相似，他们之间的互溶性越大。

化学萃取：也称为反应萃取，是利用脂溶性萃取剂与溶质之间的化学反

药物分离纯化技术 第一章

分离纯化过程：通过物理，化学或生物等手段，或将这些方法结合，将某混合物系分离纯化成两个或多个组成彼此不同的产物的过程。

分离纯化过程按原理分类可分为两类：机械分离（相间无物质的传递），传质分离（相间有物质的传递） 回收率：R=Q/Q0X100%（1%以上常量分析的回收率应大于99%；痕量组的分离应大于90%或95%。） 分离因子：SA,B=RA/RB=（QA/QB）/（Q0A/Q0B） 分离因子的数值越大，分离效果越好。 第二章

萃取：将样品中的目标化合物选择性的转移到另一相中或选择性地保留在原来的相中（转移非目标产物），从而使目标化合物与原来的复杂基体相互分离的方法。

反萃取：在溶剂萃取分离过程中，当完成萃取操作后，为进一步纯化目标产物或便于下一步分离操作的正确，往往需要将目标产物转移到水相，这种调节水相条件，将目标产物从有机相转入水相的萃取操作。

物理萃取：溶质根据相似相溶的原理在两相间达到分离平衡。特点：被萃取物在水相和有机相中都以中性分子的形式存在，溶剂与被萃取物之间没有化学结合，也不外加萃取剂，两种分子的大小与结构越相似，他们之间的互溶性越大。

化学萃取：也称为反应萃取，是利用脂溶性萃取剂与溶质之间的化学反

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

实验题目 细菌的分离纯化和接种实验 实验类别 综合

实验原理问答题：

1. 为什么湖水用10_4、10_5

低的浓度? 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开, /细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。

2. 为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养

:第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水 分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。

3. 微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面?

答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射 接种，活体接种等。

⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理， 接种过程必须在煤气灯旁进行，接种 环、玻

璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置， 操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触， 往培养基是划线或 点菌时动作要轻以防把培养基划破等。

四、实验步骤

1. 制备细菌稀释液：

使用5ml 移液管加4.5ml 无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6

标签的小试管中， 用一根Iml

第六章 核酸的分离与纯化

第一节 核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内，约占95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内，约占5%，为双链环状分子。除此之外，在原核生物中还有双链环状的质粒DNA；在非细胞型的病毒颗粒内，DNA的存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状和单链线状之分。DNA分子的总长度在不同生物间差异很大，一般随生物的进化程度而增长。如人的DNA大约由3.0×109个碱基对（base pair, bp）组成，与5 243bp

相对来讲，RNA的猿猴病毒（simian virus 40, SV40）相比，其长度约为后者的5.7×105倍。

分子比DNA分子要小得多。由于RNA的功能是多样性的，RNA的种类、大小和结构都较DNA多样化。DNA与RNA性质上的差异决定了两者的

生物分离与纯化技术授

课教案

Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】

《生物分离与纯化技术》授课教案

第一章绪论

教学目的：

熟悉生物物质的概念、种类和来源；

了解分离纯化技术及其基本原理；

熟悉分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；

掌握分离纯化的特点与一般步骤；

了解生物分离纯化技术的发展历史；

熟悉生物分离纯化技术的发展趋势。

教学重点：

生物物质的概念、种类和来源；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；分离纯化的特点与一般步骤；生物分离纯化技术的发展趋势。

教学难点：

分离纯化技术及其基本原理；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作。

教学课时：4学时

教学方法：多媒体教学

教学内容：

第一节生物分离与纯化的概念与原理

一、生物物质的概念、种类和来源

1.生物物质：氨基酸及其衍生物类、活性多肽类、蛋白质、酶类、核酸及其降解物、糖、脂类、动物器官或组织制剂、小动物制剂、菌体制剂。

2.生物物质来源：动物器官与组织、植物器官与组织、微生物及其代谢产物、细胞培养产物、血液、分泌物及其代谢物

二、生物分离纯化概念

指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液或动植物组织细胞与体液等中分离、纯化生物产品的过程。

三、生物分离纯化技术

生物分离与纯化复习题 第一章

1、生物分离纯化技术的概念？

以生物物质原料为基础，对目标产物进行提取、纯化、加工制备的生产技术。 2、生物物质与生物产品的区别？

生物物质：生物物质是指存在于生物体内的所有生物活性物质的总称。生物物质的制成品统称为生物产品。

生物产品：在产业中的生物物质的制成品。 3、生物分离纯化技术的原理和特点？

基本原理：利用混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别来实现组分间的分离或纯化。

技术原理：选用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的高效分离。

特点：⑴环境复杂、分离纯化困难含量低、工艺复杂

⑵ 稳定性差、操纵要求严格

⑶ 目标产物最终的质量要求很高

⑷ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 ⑸ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同

4、发酵生物产品分离纯化的生产工艺？ ⑴原材料的预处理 ⑵颗粒性杂质的去除

⑶可溶性杂质的去除和目标产物的初步纯化 ⑷目标产物精制

⑸目标产物的成品加工 5、生物分离技术的应用？ 食品添加剂 药物

第二章

6、预处理的目的？

使目标产物最大限度的转移到溶液中。 7、改变发酵液过滤特性的基本方法？

⑴降

酶的分离纯化

摘要：本文概述了在实验中由于酶浓度、饱和度等不同条件下对酶进行分离纯化的适用方法。酶的分离纯化有很多种方法，在纯化的工艺上有很大的不同，不同来源的酶在分离纯化中表现出不同的洗脱特性。现有酶的分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。

关键词：酶；分离；纯化；方法

前言：酶的分离纯化工作，是酶学研究的基础。酶的纯化过程在目前来说仍是一门实验科学。一个特定酶的提纯往往需要经过多个实验的探索才能总结出一般经验规律。酶的分离纯化又与其他蛋白质的纯化过程存在很大的差异，酶的分离纯化有其自己独有的特点：一是特定酶在细胞中的含量少，二是酶通过测定活力的方法可以加以跟踪，前者给实验带来困难，后者为实验提供了捷径。 正文：

1. 酶的分离与纯化的概念[1]

酶的分离与纯化是指将酶从细胞或其他含酶材料中提取出来，再与杂质分开，从而获得符合使用目的、有一定纯度和浓度的酶制剂的过程。

酶分离纯化的一般原则： ①防止酶变性失活

1．）酶纯化一般在低温条件下进行（0~4℃）

2.）各种溶液应该用缓冲液，PH应调到使酶最稳定的PH 3.）各种溶液中还可以加入酶保护剂

②建立一个可靠和快速的测活方法 方法专一、灵敏、精确、简便、经

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

微生物学实验报告

实验名称：土壤中微生物的分离与纯化

课程名称 环境微生物学实验

学 院 环境科学与工程学院

专业班级 2011级环境科学（1）班

学 号 3111007364

姓 名 刘迪鸿

联系方式 13824426973

2013年 12 月 10 日

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

实验报告 土壤中微生物的分离与纯化

刘迪鸿

（广东工业大学11级环科（1）班）

摘要：各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养。

关键词：选择培养基，分离，纯化

一、 实验目的与要求

1. 明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2. 掌握根据需要选取不同的环境以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。

二、实验方案

1. 实验原理

培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此，培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐