chip chip seq

ChIP protocol

Fixation type: Type I:

1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:

2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:

1% Glutaraldehyde solution

(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min

Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M

ChIP protocol

Fixation type: Type I:

1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:

2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:

1% Glutaraldehyde solution

(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min

Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M

［２］ＮａｄｋａｒｎｉＪＪ，ＤａｓｔｕｒＲＳ，ＶｉｓｗａｎａｔｈａｎＶ，ｅｔａｌ．Ｄｕｃｈｅｎｎｅａｎｄｂｅｃ‐

ｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＮｅｕｒｏｌＩｎｄｉａ，２００８，５６（３）：２４８‐２５３．ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ［Ｊ］．ＮａｔＧｅｎｅｔ，１９９３，３（４）：２８３‐２９１．

ｋｅｒｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｉｅｓ：ａｎＩｎｄｉａｎｕｐｄａｔｅｏｎｇｅｎｅｔｉｃｓａｎｄｒｅｈａ‐

１３０９

［１４］ＶｏｌｐｉＥＶ，ＢｒｉｄｇｅｒＪＭ．ＦＩＳＨｇｌｏｓｓａｒｙ：ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓ‐

ｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００８，４５（４）：３８５‐３８６，３８８，３９０ｐａｓｓｉｍ．

［１５］Ｖｅｌáｚｑｕｅｚ‐ＷｏｎｇＡＣ，Ｈｅｒｎáｎｄｅｚ‐ＨｕｅｒｔａＣ，Ｍáｒｑｕｅｚ‐ＣａｌｉｘｔｏＡ，

ｅｒｓｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄＲＴ‐ＰＣＲ［Ｊ］．ＧｅｎｅｔＴｅｓｔ，２００８，１２（２）：２２１‐２２３．

ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌ

ChIP protocol

Fixation type: Type I:

1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:

2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:

1% Glutaraldehyde solution

(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min

Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M

ChIP protocol

Fixation type: Type I:

1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:

2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:

1% Glutaraldehyde solution

(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min

Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M

ChIP protocol

Fixation type: Type I:

1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II:

2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540ul of dry DMSO), Room temperature, 45min 1% formaldehyde /PBS, Room temperature, 15min Type III:

1% Glutaraldehyde solution

(Grade I, 25% in H2O, specially purified for use as an electron microscopy fixative) sigma G5882-100ml, Room temperature, 15min

Stock buffer: 20%SDS; 0.5M, pH8.0 EDTA; 1M, pH7.8 Tris-Cl; 10% TritonX100; 5M

CHIP PROTOCOL（基于millipore EZ-CHIP catalog#17-371）：

实验原理：

在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

实验步骤： 第一天：

【实验材料准备】：

1000ul、100ul、200ul、20ul移液器，大、中、小号tip，1.5ml EP管，200ul PCR管。

【实验仪器准备】：

台式低温离心机，超声仪，电泳设备一套，旋转混匀仪，层析柜。 【实验试剂准备】：

SDS lysis buffer复温，使其充分溶解，避免沉淀；protease inhibitor cocktail室温下充分解冻；PBS预冷（若使用试剂盒提供10xPBS，使用前还需用去离子水稀释成1xPBS工作液）。

（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎*。

1、收集细胞（1-2x10^7），加入37%甲醛，使得甲醛的终浓度为1%（0.7%）。 2、室温孵育10min（精确计时）。

3、及时终止交联：加10x甘氨酸终浓度为1x。混匀后，在室温下放置5

ChIP实验步骤

第一部分、细胞的甲醛交联与超声破碎

1. 交联前的准备工作

（1）细胞准备：对细胞进行一定条件的处理，以确保目的基因的转录激活。细胞密度应达到1×106细胞/10 cm培养皿。

（2）配制1％甲醛溶液：270 μl 37%甲醛加入10 ml无血清细胞培养液中即可，应使用高质量的甲醛。

2. 交联与超声破碎

优化超声条件，以保证目的细胞的染色质DNA能被剪切为200 bp～1000 bp的片段，具体操作如下（以HepG2细胞为例）：

（1）小心吸出细胞培养液，加入1％甲醛溶液10 ml，37℃孵育10 min，然后置冰上5 min终止固定。

（2）小心尽量吸净培养液，用预冷的PBS 3 ml洗细胞两次。

（3）加入预冷的内含PMSF（10ul）的PBS 1 ml。刮取细胞并移至离心管中，于4℃以1200 rpm（约3000 g）离心5 min，小心移走上清液，得到细胞沉淀（细胞沉淀可于-80℃保存数月）

（4）以200μl SDS裂解缓冲液重悬细胞（含PMSF：2ul），冰上放置10 min （5）冰上超声剪切染色质DNA，使其成为200 bp～1000 bp的片段（10个脉冲，每个20 s，脉冲间隔20 s）

（6）加入5M

CHIP PROTOCOL（基于millipore EZ-CHIP catalog#17-371）：

实验原理：

在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

实验步骤： 第一天：

【实验材料准备】：

1000ul、100ul、200ul、20ul移液器，大、中、小号tip，1.5ml EP管，200ul PCR管。

【实验仪器准备】：

台式低温离心机，超声仪，电泳设备一套，旋转混匀仪，层析柜。 【实验试剂准备】：

SDS lysis buffer复温，使其充分溶解，避免沉淀；protease inhibitor cocktail室温下充分解冻；PBS预冷（若使用试剂盒提供10xPBS，使用前还需用去离子水稀释成1xPBS工作液）。

（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎*。

1、收集细胞（1-2x10^7），加入37%甲醛，使得甲醛的终浓度为1%（0.7%）。 2、室温孵育10min（精确计时）。

3、及时终止交联：加10x甘氨酸终浓度为1x。混匀后，在室温下放置5

摘要：倒装芯片在产品成本，性能及满足高密度封装等方面 体现出优势，它的应用也渐渐成为主流。由于

倒装芯片的 尺寸小，要保证高精度高产量高重复性，这给我们传统的 设备及工艺带来了挑战。 器件的小型化高密度封装形式越来越多，如多模块封装（ MCM ）、系统封装（ SiP ）、倒装芯 片（ FC ， Flip-Chip ）等应用得越来越多。这些 技术的出现更加模糊了一级封装与二级装配之间的界线。毋庸置疑，随着小型化高密度封装的出现，对高速与高精度装 配的要求变得更加关键，相关的组装设备和工

艺也更具先进性与高灵活性。

由于倒装芯片比 BGA 或 CSP 具有更小的外形尺寸、更小的球径和球间距、它对植球工艺、基板技术、

材料的兼容性、制造工艺，以及检查设备和方法提出了前所未有的挑战。

倒装芯片的发展历史 倒装芯片的定义

什么器件被称为倒装芯片？一般来说，这类器件具备 以下特点： 1. 基材是硅；

2. 电气面及焊凸在器件下表面；

3. 球间距一般为 4-14mil 、球径为 2.5-8mil 、外形尺寸为 1 -27mm ； 4. 组装在基板上后需要做底部填充。

其实，倒装芯片之所以被称为“倒装”，是相对于传统的金属线键合连接方式（Wir