pcr基因分型方法

目的研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PC—SSP)基因分型技术在ABO疑难血型鏊定中的应用.方法收集8例来自广东省肇庆市无偿献血者的AB0疑难血型样本,采用正反定型实验、吸收放散试验等一系列血型血清学方法进行检测;提取基因组DNA,并用PCR—SSP基因分型毡术,特异性扩增ABO基因片段,根据有无PCR产物以及产物长度,判断样本的基因型。结果通过凝胶电泳检测PCR反应的特异性

现代检验医学杂志

第2 6卷

第 4期

21 0 1年 7月

JMo a dL bMe, 12, .,uy 2 1 d Vo. 6 No 4 Jl. 0 1

5 3

P R S P基因分型技术 C—S在 AB O疑难血型定型中的应用’陈志忠，扬勋，尚良，廖陈余文潮，梁剑锋，车京霞 (肇庆市中心血站，东肇庆广摘要：的目

56 2 ) 2 00收

研究聚合酶链式反应一异性序列引物 ( C S P)因分型技术在 AB疑难血型鏊定中的应用 .方法特 P—S基 O

集 8来自广东省肇庆市无偿献血者的 AB疑难血型样本，用正反定型实验、收放散试验等一系列血型血清学方法例 O采吸

进行检测；提取基因组 DN并用 P R S P基因分型芯术， A, C—S特异性扩增 A O基因片段，据有无 P R产物以

药物分析杂志ChinJPharmAnal2011,31(1))79)

采用基因分型质控品评价荧光PCR法人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒

徐任,曲守方,杜娟,高尚先,于源华

1,2

2

1

2*

1*

(1.长春理工大学,长春130022;2.中国药品生物制品检定所体外诊断试剂与培养基室,北京100050)

摘要 目的:使用人乳头瘤病毒(HPV)L1基因分型质控品对荧光PCR法人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒进行评价。方法:以中国药品生物制品检定所体外诊断试剂与培养基室建立的含有30种不同型别HPV基因分型质控品盘为样本,按照各个试剂盒的要求进行检测。结果:使用含有30种不同型别HPV基因分型质控品盘为模板进行试剂盒评价时,A试剂检测有23种型别检测结果符合,7种型别不符合,HPV59型漏检,HPV53,54,61,66,72,81型有交叉现象。B试剂检测有29种型别检测结果符合,1种型别不符合,HPV58型漏检。C试剂检测有26种型别检测结果符合,4种型别不符合,HPV43,66,81,CP8304型有交叉现象。D试剂有29种型别检测结果符合,1种型别不符合,HPV68型漏检。对照检测E试剂30种型别的检测结果全部符合。4家公司的试剂基本能正确区分质控品中HPV基因型,

微生物基因分型鉴定系统

背景：

分子生物学技术在近几年的迅速发展和普及，使得微生物学鉴定得以摆脱传统生化鉴定方法的局限，跨入新的历史进程。较上世纪已经出现的生化鉴定法，基于分子生物学技术的微生物鉴定系统的优越性主要表现为：可鉴定的种属范围均大大扩展；可靠性和灵敏度显著提升；整体检测时间降低。ThermoFisher 公司的MicroSEQ?自动微生物基因分型鉴定系统分型系统是目前技术最为成熟、应用最为广泛的基因分析鉴定系统，现已广泛应用在药品、食品及工业微生物的鉴定分析上，以下内容将对这一系统做更为全面的介绍。

2015版药典中指出，测序是微生物鉴定的最终解释方法

1.在药品微生物鉴定领域的应用

2008年度全球排名前25位的制药集团中，有22家集团已经将ThermoFisher公司的MicmSEQ?自动微生物基因分析鉴定系统用于其日常微生物检测中。

美国FDA在对生产无菌制剂和生物药品的指导性纲要《工业指南用无菌工艺生产的无菌产品一现行GMP》中更是明确提出“快速遗传类型测定方法被建议用于鉴别目的，因为这种方法已经证明比生物化学方法和表型技术更精确和准确。”除美国之外，澳大利亚、日本及欧盟的药典中也已明确推荐使用基因分析的方法用于微生物的鉴定。

2.微生

反转录

概念

反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。

区分:反转录与逆转录不等同。反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程；逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，反转录在体外，逆转录在体内。

2反转录酶与反转录过程

反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA（cDNA）。反转录酶存在于一些RNA病毒中，可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒（HIV）也是一种RNA病毒，含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶，推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。

大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。

①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转

目的 建立快速准确检测CYP17基因单核苷酸多态性的新方法 .方法 用等位基因特异PCR(AS-PCR)方法 对53例外周血标本CYP17基因单核苷酸多态性位点rs743572进行基因分型.结果 AS-PCR测定结果 与聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法 (PCR-RFLP)的测定结果 一致.结论 采用AS-PCR检测CYP17基因多态性准确、快速.

现代中西医结合杂志 M dr Junl f n ga dTa ioa C ieeadWet nM dc e 0 Fb 2 ( ) oen 0ra o t rt rdt nl h s n s r e in 1 e, 0 4 Ie e i n e i 2 1

.8 4 5.

C 1 YP 7基因多态性等位基因特异性 P CR检测方法的建立陈巧云，李皓，红关，加燕徐冷(苏大学附属人民医院，苏镇江 2 2 0 )江江 1 0 1[要]目的建立快速准确检测 C P 7基因单核苷酸多态性的新方法。方法用等位基因特异 P R( S—摘 Y I C A P R)法对 5 C方 3例外周血标本 C P 7基因单核苷酸多态性位点 r 4 5 2进行基因分型。结果 Y 1 s 37 7 A S—P R测定

达安基因荧光定量PCR试剂目录

达安基因荧光定量PCR试剂目录

达安基因荧光定量PCR试剂目录

肿瘤类

遗传疾病 类

公共卫生 类

RNA 类 流感病毒 A、B 型核酸扩增(PCR)荧光检测试 24 人份/盒 剂盒 RNA 类 副流感病毒 1、 3 型核酸定量检测试剂盒 2、 (PCR- 10 人份/盒 荧光探针法) DNA 类 嗜肺军团杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针 24 反应/盒 法) DNA 类 人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR-反向 10 人份/盒 点杂交法) DNA 类 高危型人乳头瘤病毒(8 个型)核酸定量检测试 20 人份/盒 剂盒(PCR 荧光法) DNA 类 人乳头瘤

病毒(16、18 型)核酸扩增(PCR)荧 20 人份/盒 光检测试剂盒 DNA 类 EB 病毒核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒 20 人份/盒 RNA 类 融合基因 BCR-ABL 核酸检测试剂盒(PCR-荧光 10 人份/盒 探针法) RNA 类 融合基因 PML-RAR 检测试剂盒(PCR-荧光探针 10 人份/盒 法) RNA 类 WT1 基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 10 人份/盒 RNA 类 EGFR 基因突变检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

中国公共卫生2006年4月第22卷第4期　　ChinJPublicHealthApr2006Vol.22No.

4文章编号:100120580(2006)0420429202　　中图分类号:R373133　　文献标识码:A

429

【论　　著】

登革2型病毒全长基因组的长链RT-PCR法扩增3

贡树基,赵卫,曹虹,张文炳,周浩,陈丽丹

　　摘　要:目的　采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法　根据登革2

型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术进行扩增。以获得的PCR产物为模板分别扩增3个NGC株特异的基因片段。结果　长链RT-PCR法扩增出约11kb基因片段,经PCR法证实为登革2型病毒NGC株特异序列。结论　通过长链RT-PCR技术,获得了登革2型病毒NGC株全长基因组性克隆打下基础。

关键词:登革2型病毒;全长cDNA;长链RT-PCR

Amplificationofcompletegenomeofdengue2virusbylongRT-Shuji,,CAOHong,etal.De

根据ABO基因座第6和7外显子9个SNP位点设计引物, 复合扩增后直接测序, 根据测序结果判定不同物证检材ABO基因型及其在藏族群体中的多态性分布。成功地检测出经过不同方法处理的血痕、毛发、口腔拭子、骨骼、混合斑等101例腐败、降解及微量检材的ABO基因型, 结果与免疫血清学分型

HEREDITAS (Beijing)

2008年6月, 30(6): 704―710 ISSN 0253-9772

研究报告

DOI: 10.3724/SP.J.1005.2008.00704

运用多重PCR-直接测序法检测ABO基因型及其遗传多态性

陈峰1,2,3, 陈腾1, 阎春霞1,2, 党永辉1, 穆豪放3, 于晓光3, 张博3, 邓亚军1,2,3

1. 西安交通大学医学院法医系, 西安 710061； 2. 中国科学院北京基因组研究所, 北京 100029； 3. 北京华大方瑞司法物证鉴定中心, 北京 101300

摘要: 根据ABO基因座第6和7外显子9个SNP位点设计引物, 复合扩增后直接测序, 根据测序结果判定不同物证检材ABO基因型及其在藏族群体中的多态性分布。成功地检测出经过不同方法处理的血痕、毛发、口腔拭子、骨骼、混合斑等101例腐败、降解及微量检

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山西医科大学学报 ( hn i dUnv 08年 l JS ax i)2 0 Me 0月，3 (0 9 1

文章编号： 10—6 1 (0 8 1—0 7—0 0 7 6 12 0 )0 86 3

改良的降落 P R扩增中国地鼠目的基因 C宋国华一庞文彪 .,农业大学动物科技学院 )

张锐虎 刘田福 岳文斌 (山西医科大学实验动物中心，太原 000;山西，, 30 1

摘要：目的

优化 P R程序， C尝试用降落 P R扩增中国地鼠目的基因。方法 C

设计了 4对引物，用普通 P R和改良的 C降落 P R省略了常规 P R中摸索最适 C C

降落 P R扩增中国地鼠 C X1C X、 A H、 A 6部分基因。结果 C O、O 2 N D 5 N DH

普通 P R只有 1对引物扩增出特异性条带， C而

降落 P R 4引物都扩增出特异性条带， C对并与中国地鼠目的基因大小一致。结论 关键词：中国地鼠；降落 P R;退火温度； P R特异性 C C中图分类号： Q 8 71文献标识码： A

退火温度的过程，对中国地鼠一些 T值相近的基因可以使用降落 P R温度程序扩增， m C是一种行之有效的 P R方法。 C

M o fe o h wn P

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山西医科大学学报 ( hn i dUnv 08年 l JS ax i)2 0 Me 0月，3 (0 9 1

文章编号： 10—6 1 (0 8 1—0 7—0 0 7 6 12 0 )0 86 3

改良的降落 P R扩增中国地鼠目的基因 C宋国华一庞文彪 .,农业大学动物科技学院 )

张锐虎 刘田福 岳文斌 (山西医科大学实验动物中心，太原 000;山西，, 30 1

摘要：目的

优化 P R程序， C尝试用降落 P R扩增中国地鼠目的基因。方法 C

设计了 4对引物，用普通 P R和改良的 C降落 P R省略了常规 P R中摸索最适 C C

降落 P R扩增中国地鼠 C X1C X、 A H、 A 6部分基因。结果 C O、O 2 N D 5 N DH

普通 P R只有 1对引物扩增出特异性条带， C而

降落 P R 4引物都扩增出特异性条带， C对并与中国地鼠目的基因大小一致。结论 关键词：中国地鼠；降落 P R;退火温度； P R特异性 C C中图分类号： Q 8 71文献标识码： A

退火温度的过程，对中国地鼠一些 T值相近的基因可以使用降落 P R温度程序扩增， m C是一种行之有效的 P R方法。 C

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