免疫荧光定量分析imagej

ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。 一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析 1、File——》open 打开WB片子 2、把图片转化成灰度图片 image——》type——》8-bit 3、消除背景影响

process——》subtract background 选择50基本可以 4、设置定量参数

analyze——》set measurements，点击面积，平均密度和灰度值及Integrated Density 5、设置单位

analyze——》set scale ，在“unit of length”的方框里输入“pixels” 6、把图片转换成亮带，Edit——》invert 7、选择Freehand

Selection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值

当测定完所有条带，选结果中的“Edit ”的“SelectAll”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析

8、复制数据IntDen进行分析

二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析 1、File——》open 打开WB片子 2、如条带不正，需修正

image——》transform——》rotate 调节angl

第１章 定量分析概论

一、选择题

1. 试样用量为0.1 ~ 10 mg的分析称为 (A) 常量分析 (B) 半微量分析 (C) 微量分析 (D) 痕量分析

2. 试液体积在1 ~ 10 mL的分析称为 (A) 常量分析 (B) 半微量分析 (C) 微量分析 (D) 痕量分析

3. 每100 mL人体血浆中,平均含K+18.0mg和Cl-365 mg。已知M(K+)= 39.1 g/mol, M(Cl-) = 35.5 g/mol。血浆的密度为1.0 g/mL。则血浆中K+和Cl-的浓度为 (A) 1.80 ×10-1和3.65 mol/L (B) 7.04×10-3和1.30×10-1 mol/L (C) 4.60×10-3和1.03×10-1 mol/L (D) 4.60×10-6和1.03×10-4 mol/L

4. 海水平均含 1.08×103 ?g/g Na+和 270 ?g/g SO42-, 海水平均密度为1.

细胞免疫荧光染色

1. 盖玻片处理：用前1天用纱布擦净灭菌，放入6孔板。

2. 接种细胞：较低密度为适宜，约2000－10000个/孔（根据细胞生长状态决定，常用

5000个/孔），2ml（浓度为2500/ml）

3. 24h后细胞贴壁，根据需要同步16－18h，干预处理，细胞融合60－70％时染色最

佳

4. 37度PBS洗涤，3ml/孔，贴边加（可将6孔板倾斜，加完样在放正以防冲掉细胞，

0.5min。室温PBS也可，但4度禁止，否则细胞易皱缩。

5. 固定：4％多聚甲醛(1ml)，先常温稳定5min，然后4度，10min，（可放在饭盒内）。 6. 吸掉多聚甲醛，迅速加PBS 5ml/孔，洗涤5min×3次，镜下观察，细胞形态如前。 7. 透化：0.1％－4％triton×－100，1ml/孔，室温透化5min（triton是去污剂，目的是

将脂质成分破坏，如细胞膜、核膜等，故不影响实验结果，可不用洗涤）

8. 5％BSA（滤过）室温封闭至少20min（可配制含5％BSA和0.2％triton的混合液，将

两步合成一步）风干

9. 用5％BSA将一抗1：50或1：100（常用）稀释至EP管 200ul/玻片 10. 将纱布垫在饭盒中，去离子水润湿纱

免疫荧光技术（检测抗核抗体（ANA）的实验方案）

荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应用流式细胞仪进行自动分析检测，称为流式荧光免疫技术。荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体(ANA)为例进行实习。

抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。

抗核抗体实验原理

以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如Hep-2)作抗原片，将病人血清加到抗原片上。如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。加入荧光素标记的抗人IgG抗体又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。

管理定量分析习题

1. 第一次作业 定量分析方法与公共管理 2. 定量分析的三个基本特征 3. 公共管理中的定量分析程序

4. 如何理解定量分析与定性分析的关系

系统与系统模型 5. 系统模型的定义

6. 为什么要使用系统模型 7. 系统模型的分类 8. 系统分析的定义 9. 系统分析的要素

第二次作业 数据与数据整理

10. 数据计量的三种尺度，以及具体的描述实例

11. 什么是定类数据、定序数据、定居数据、定比数据 12. 什么是数据整理，数据整理的原则 13. 数据整理的步骤

14. 如何进行数据分组，数据分组中的相关概念：频数、频率、组数、组距、组限、组中值、 15. 什么是等距分组、异距分组

16. 试设计一份统计表，并指出哪一部分是表头、列标题、行标题、主栏和宾栏

17. 对下表的数据完成整理，分出组数、确定组距、计算频率与累计频率，并绘制直方图 某车间50名工人日加工零件数分组表 零件数 (个) 107 108 110 112 113 114 115 117 118 频数 (人) 1 2 1 2 1 1 1 3 3 零件数 (个) 119 120 121 122 123 124 125 126 127 频数 (人) 1 2

细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

细胞免疫荧光步骤

1.在24孔板里加500微升培养基，放爬片，接种细胞（做实验以30-50%汇合度较好。10000-30000左右

2.给药处理24h

《定量分析简明教程》 第三章习题答案 1 3-1

《定量分析简明教程》 第三章习题答案 EDTA 在水溶液中是六元弱酸(H6Y2+) ,其 pKa1~pKa6 分别为 0.9,1.6,2.07,2.75,6.24,10.34,则 4Y 的 pKb3 为: pKb3=pKw-pKa4=14-2.75=11.25 3-2 解:

x(Ac - ) =

Ka 1.8 × 10 5 = 7 = 0.99 c(H + ) / c Θ + K a 10 + 1.8 × 10 5

x(HAc) = 1-0.99 = 0.01 - - - c(Ac ) = 0.99×0.1molL 1 = 0.099 molL 1 - - c(HAc) = 0.01×0.1molL 1 = 0.001 molL 1 3-3 - - - - (1) H3PO4 的 PBE:c(H+)=c(H2PO4 )+2c([HPO42 ]+3c([PO43 ]+c(OH ) - - - (2) Na2HPO4 的 PBE:c(H+)+c(H2PO4 )+2c([H3PO4]= c([PO43 ]+c(OH ) - (3) Na2S 的 PBE:c(OH-)=c(HS )+2c(

定量分析

第3卷第5期　　　　　　　　　上海大学学报(自然科学版)　　　　　　　Vol.

3,No.5

1997年10月　　　　　JOURNALOFSHANGHAIUNIVERSITY(NATURALSCIENCE)　　　　　　Oct.1997

Porter模型定量分析研究

彭正龙

()

Ξ

提　要　本文对Porter,构要素的相对权重,、准确性和合理性.rter;C934

0　引　　言

在建立实行社会主义市场经济的大环境中,企业被彻底地推向了市场,也被推进了风险的旋涡.面对这种态势,任何一个企业要想成功地进入、占领、巩固和发展市场,在竞争中立于不败之地,就必须先充分了解和全面分析本企业所处行业的经济力量,界定出本企业的优势与劣势,然后再根据这些经济力量的变化趋势,确定出本企业的风险与机遇,积极主动地找出实现竞争优势的突破口.

美国著名战略学家Michael.E.Porter在1980年和1995年先后发表《竞争战略》和《竞争优势》两本著作,提出行业组织论观点及其分析方法即Porter模型.这是当今世界上比较流行的一种用于行业竞争结构分析的有效方法.

然而,在进行Porter模型的定量分析与计算中,在确定各个竞争结构要素的权重时,一般是采用粗略的专家平均点法来处理,

第一章 定量分析概论

习题一

1. 将下列数据修约为两位有效数字

3.667；3.651；3.650；3.550；3.649；pKa=3.664 解：3.7；3.7；3.6；3.6；3.6；3.66 2. 根据有效数字运算规则计算下列结果： （1）2.776+36.5789－0.2397+6.34

（2）（3.675×0.0045）－ (6.7×10-2)+(0.036×0.27) （3）50.00×（27.80－24.39）×0.1167 1.3245

解：（1）45.46；（2）－0.040；（3）15.1

3. 测定镍合金的含量，6次平行测定的结果是34.25%、34.35%、34.22%、34.18%、34.29%、34.40%，计算

（1）平均值；中位值；平均偏差；相对平均偏差；标准偏差；平均值的标准偏差。

（2）若已知镍的标准含量为34.33%，计算以上结果的绝对误差和相对误差。 解：（1）34.28%；34.27%；0.065%；0.19%；0.082%；0.034% （2）－0.05%；；－0.15%

4. 分析某试样中某一主要成分的含量，重复测定6次，

离子色谱的定性定量分析

张海鸥

– – –

实验目的：了解离子交换色谱的原理以及离子色谱仪 的构造； 学习离子色谱仪的基本操作； 掌握利用离子色谱仪进行定量分析的方法。

离子色谱的相关介绍(五个方

面) 实验内容

一.离子色谱简介包括：定义、分析对象、分离方式、 检测方式

定义

利用色谱技术测定离子态物质的方法

色谱 : 用于分析的一种分离技术 气相色谱 (气-固分离，流动相为载气) 液相色谱 (液-固分离，流动相为液体) – HPLC (主要分离非极性的有机化合物) – IC (主要分离极性和部分弱极性的化合物) 离子态物质 : 在水溶液中电离，具有 + 或 – 电荷的 元素

阴离子 ： Cl-,NO2-,SO42-,CrO42- 阳离子 ： Na+,NH4+,Ca2+,Fe3+ 有机化合物：有机酸、有机碱等

离子色谱分析的对象物质离子类别无机阴离子 无机阳离子 有机阴离子 有机阳离子 天然有机物

主要离子种类卤素及简单阴离子、酸根阴离子、阳离子的配阴离子 碱金属、铵离子、碱土金属、过渡金属、稀土元素 有机酸、烷基硫酸、烷基磺酸、磷酸、多聚磷酸 胺、醇胺、铵盐、吡啶、生物碱、锍盐 糖、醇、酚、醛、维生素

生物物质

有机磷化合物、氨基酸、肽、核