酵母双杂原理

pGBKT7和pGADT7不要同时转入细胞，要先转入一个，平板培养，挑单菌落做液体培养，再转入另一个质粒，同时转入两个质粒的效率太低。我做的时候转化率很高，从来没有出现过问题，转入第一个质粒（pGBKT7）通常在SD-Trp平板上可以有3000-4000个菌落，再转入pGADT7后，在双选择平板SD-Trp-Leu上至少也可以收获400-500个菌落。需要注意的是，细胞转入pGBKT7后，在-Trp上挑选单菌落做液体培养时，不要用YPD培养液，要用SD-Trp培养液，这样才可以使转化的细胞充分生长。 转化实验的条件也很重要，如果你觉得这中间有什么不放心，你可以把protocol发给我看看。我这里AH109长得很好，但实验室在国外，估计没法给你。

另外，你说AH109培养不好，是在什么选择平板上？在转完两个质粒以后做实验筛选时，应该先做LacZ和MEL1的显色，再做HIS3，最后做ADE2（因为ADE2的选择是最stringent的）。还有什么问题可以继续问我。

1.YPDA配制方法如下：

先称好Yeast Extract 和Tryptone ，各10g/L 和20g/L ， 加水885ml/L

另外称取葡萄糖20g/L，放入另一个容器内，

酵母双杂原理：酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型

的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开， 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。

酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达， 其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence)， 而GAL4-ad没有。因此， 在GAL4-ad氨基端或羧

酵母双杂（Yeast two-hybrid）实验操作手册和注意事项

一. 酵母双杂的原理

1989年，Song和Field建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统。很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain，BD）与转录激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。 酵母双杂交系统由三个部分组成：

(1)与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白(bait)。 (2)与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白(pr

双质量飞轮原理

衰减振动和噪音的双质量飞轮 Post By：2007-8-20 9:31:59

双质量飞轮可以平衡在发动机中产生的振动，使发动机工作更加平稳。 发动机周期性的工作过程会产生巨大的振动和噪音，同时，发动机的振动还会传递到汽车的驱动系统，引起变速器和车架等其他部件产生振动和噪音，而ZMS双质量飞轮的应用可以衰减这些振动以及随之而产生的噪声。

双质量飞轮的工作原理是依据于它分离的物体质量：一部分飞轮质量用于传递发动机的转动惯量，而另一部分飞轮质量则用于提高变速器的转动惯量。两部分飞轮质量经一套弹簧减振系统连接为一个整体，次级飞轮质量与变速器之间的摩擦片用来完成两部分飞轮质量的离合，这样就可以衰减发动机的旋转振动，减轻变速器的负荷。 GAT的双质量飞轮

GAT公司研发的用于1.6L汽油发动机的双质量飞轮

ZF公司与GIF公司合资的GAT驱动技术公司为1.6L汽油发动机研发并生产了被称之为“MTD”的机械式扭矩减振器。这种减振器的主减振器外圈均匀地分布着5个传动元件，可隔离发动机产生的高频振动，从而有效防止变速器和车架的振动和噪声。在深冲压板件与塑料楔块之间，涂有硅油基的油脂使这一对摩擦副有着极小的摩擦滞后，再加上两个质量块之间

双质量飞轮原理

衰减振动和噪音的双质量飞轮 Post By：2007-8-20 9:31:59

双质量飞轮可以平衡在发动机中产生的振动，使发动机工作更加平稳。 发动机周期性的工作过程会产生巨大的振动和噪音，同时，发动机的振动还会传递到汽车的驱动系统，引起变速器和车架等其他部件产生振动和噪音，而ZMS双质量飞轮的应用可以衰减这些振动以及随之而产生的噪声。

双质量飞轮的工作原理是依据于它分离的物体质量：一部分飞轮质量用于传递发动机的转动惯量，而另一部分飞轮质量则用于提高变速器的转动惯量。两部分飞轮质量经一套弹簧减振系统连接为一个整体，次级飞轮质量与变速器之间的摩擦片用来完成两部分飞轮质量的离合，这样就可以衰减发动机的旋转振动，减轻变速器的负荷。 GAT的双质量飞轮

GAT公司研发的用于1.6L汽油发动机的双质量飞轮

ZF公司与GIF公司合资的GAT驱动技术公司为1.6L汽油发动机研发并生产了被称之为“MTD”的机械式扭矩减振器。这种减振器的主减振器外圈均匀地分布着5个传动元件，可隔离发动机产生的高频振动，从而有效防止变速器和车架的振动和噪声。在深冲压板件与塑料楔块之间，涂有硅油基的油脂使这一对摩擦副有着极小的摩擦滞后，再加上两个质量块之间

摘要：本文以实践为基础，剖析了双室平衡容器的工作原理与特性。重点论述了补偿系统的建立方法与步骤，同时指出了应用中的常见错误并提出了解决方案。

关键词：水位测量 汽包水位 双室平衡容器 补偿

１.摘要

本文以实践为基础，剖析了双室平衡容器的工作原理与特性。重点论述了补偿系统的建立方法与步骤，同时指出了应用中的常见错误并提出了解决方案。

2.前言

汽包水位是锅炉及其控制系统中最重要的参数之一，双室平衡容器在其中充当着不可或缺的重要角色。但是由于一些用户对于双室平衡容器及其测量补等方面缺少全面的必要的了解或者疏漏，致使应用中时有错误发生，甚至形成安全隐患。例如胜利油田胜利发电厂一期工程，该工程投入运行早期其汽包水位测量系统的误差竟达70～90mm，特殊情况下误差将会更大（曾因此造成汽包满水停机事故）。迄今为止，据不完全了解，目前仍有个别用户存在一些类似的问题或者其它问题。汽包水位是涉及机组安全与和运行的重要参数和指标，因此不允许任何人为的误差。为使用户能够更好地掌握双室平衡容器在汽包水位测量中的应用，谨撰此文。不足之处，请不吝指正。

3.双室平衡容器的工作原理

3.1.简介

双室平衡容器是一种结构巧妙，具有一定自我补偿能力的汽包水位测量装置。它的主要结构如图1所示

杂题之抽屉原理练习题目12套

杂题之抽屉原理练习1

1.一个联欢会有100人参加,每个人在这个会上至少有一个朋友.那么这100人中至少有个人的朋友数目相同.

2.在明年(即1999年)出生的1000个孩子中,请你预测: (1)同在某月某日生的孩子至少有个. (2)至少有个孩子将来不单独过生日.

3.一个口袋里有四种不同颜色的小球.每次摸出2个,要保证有10次所摸的结果是一样的,至少要摸次. 4.有红、黄、蓝三种颜色的小珠子各4颗混放在口袋里,为了保证一次能取到2颗颜色相同的珠子,一次至少要取颗.

如果要保证一次取到两种不同颜色的珠子各2颗,那么一定至少要取出颗.

5.从1,2,3…,12这十二个数字中,任意取出7个数,其中两个数之差是6的至少有对. 6.某省有4千万人口,每个人的头发根数不超过15万根,那么该省中至少有 人的头发根数一样多.

7.在一行九个方格的图中,把每个小方格涂上黑、白两种颜色中的一种,那么涂色相同的小方格至少有个.

8.一付扑克牌共有54张(包括大王、小王),至少从中取张牌,才能保证其中必有3种花色. 9.五个同学在一起练习投蓝,共投进了41个球,那么至少有一个人投进了个球

双抗体夹心ELISA法测定残余汉逊酵母菌体蛋白含量的研究

四川动物２００８年第２７卷第５期

Ｓｉｃｈｕａｎ

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｏｏｌｏｇｙ

ＶｏＬ２７Ｎｏ．５２００８

双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定残余汉逊酵母茵体蛋白含量的研究

邵强，王俊华

（河南师范大学生命科学学院，河南新乡４５３００７）

摘要：目的通过免疫白兔和小鼠获得抗汉逊酵母菌体全蛋白血清，建立测定残余宿主汉逊酵母菌体蛋白含量

的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的方法。方法由免疫动物得到抗血清，分别作为包被抗体和检测抗体，通过方阵滴定实验确定双抗体夹心ＥＬＩＳＡ最佳条件。结果获得的兔、小鼠抗血清经问接ＥＬＩＳＡ检测效价均达到１：１００００。作为包被抗体小鼠抗血清的最佳包被浓度为１０¨ｇ／ｍｌ，在３０～５００ｎｇ／ｍｌ范围内测定呈直线关系，相关系数为０．９９８５。可用于测定基因工程产品中汉逊酵母菌体蛋白的残余链。

关键词：酶联免疫吸附测定；菌体蛋白；汉逊酵母中图分类号：Ｑ９５－３３；Ｑ９３９．９１

文献标识码：Ａ

文章编号：１０００—７０８３（２００８）０５—０９４５—０２

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＨａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａＰｒｏｔｅｉｎＲｅｍｎａｎｔｓｂｙＤｏｕｂｌｅＡｎｔｉｂｏｄｙ

Ｓａｎｄｗ

杂题之抽屉原理练习题目12套

杂题之抽屉原理练习1

1.一个联欢会有100人参加,每个人在这个会上至少有一个朋友.那么这100人中至少有个人的朋友数目相同.

2.在明年(即1999年)出生的1000个孩子中,请你预测: (1)同在某月某日生的孩子至少有个. (2)至少有个孩子将来不单独过生日.

3.一个口袋里有四种不同颜色的小球.每次摸出2个,要保证有10次所摸的结果是一样的,至少要摸次. 4.有红、黄、蓝三种颜色的小珠子各4颗混放在口袋里,为了保证一次能取到2颗颜色相同的珠子,一次至少要取颗.

如果要保证一次取到两种不同颜色的珠子各2颗,那么一定至少要取出颗.

5.从1,2,3…,12这十二个数字中,任意取出7个数,其中两个数之差是6的至少有对. 6.某省有4千万人口,每个人的头发根数不超过15万根,那么该省中至少有 人的头发根数一样多.

7.在一行九个方格的图中,把每个小方格涂上黑、白两种颜色中的一种,那么涂色相同的小方格至少有个.

8.一付扑克牌共有54张(包括大王、小王),至少从中取张牌,才能保证其中必有3种花色. 9.五个同学在一起练习投蓝,共投进了41个球,那么至少有一个人投进了个球

毕赤酵母是甲醇营养型，甲醇代谢的第一步是：醇氧化酶利用氧分子将甲醇氧化为甲醛和过氧化氢。为避免过氧化氢的毒性，甲醛代谢主要在过氧化物酶体里进行，使得有毒的副产物远离细胞其余组分。由于醇氧化酶与O2 的结合率较低，因而毕赤酵母代偿性地产生大量的酶。而调控产生醇氧化物酶的启动子也正是驱动外源基因在毕赤酵母中表达的启动子。

毕赤酵母含有两种醇氧化物酶，AOX1 AOX2。细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1 基因产物。甲醇可紧密调节、诱导 AOX1 基因的高水平表达，为Mut+菌株，可占可溶性蛋白的 30%以上。AOX2 基因与 AOX1 基因有 97%的同源性，但在甲醇中带 AOX2 基因的菌株比带 AOX1 基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离 Muts 菌株。

毕赤酵母表达外源蛋白：分泌型和胞内表达。利用含有α因子序列的分泌型载体即可。

翻译后修饰：酿酒酵母与毕赤酵母大多数为 N-连接糖基化高甘露糖型，毕赤酵母中蛋白转录后所增加的寡糖链长度（平均每个支链 8-14 个甘露糖残基）比酿酒酵母中的（50-150 个甘露糖残基）短得多。

菌株：GS115 （ Mut+， Muts）和 KM71（Muts） 分泌型载体: pPICZα A,B,