酵母菌合成蛋白质的场所

《生命科学文献与论文写作》课程论文

利用酵母菌生产蛋白质

摘要：蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用，是生命机体几乎所有重要活动的承担者。酵母菌应用于生物领域由来以久。6000年来人们用这种微小的真菌制作面包、啤酒和酒。现今用于直接治疗疾病的人类蛋白质的生产，已经成为一个每年有着190亿美元产值的产业。但是这种生物大分子目前却不能大批量的生产。它们大都是费时费力的从培养皿中培养的动物（如中国仓鼠）细胞分泌提取的。基因工程研究人员发现了一种用低等的酵母菌来生产人类蛋白质的新技术。这种技术开辟了一条大量生产生物药品的新途径。酵母菌能够用来生产复杂的人类糖蛋白，这种技术对于治疗用人类蛋白的生产有着革命性的意义。更好、更便宜、更快、更安全，并提供了一个对产品的最终质量进行控制的手段。作为宿主的酵母最常用的是毕赤氏酵母和酿酒酵母。 关键词：酵母菌;生产;蛋白质

Production of proteins using the yeast

Abstract: Protein in cells and organisms of biological processes, play an important role in almost

1、与mRNA中密码子ACG相应的反密码子是（ ） A、CGU B、UGU C、UCG D、UGC E、GCU

2、核蛋白体的功能部位有（ ） A、容纳mRNA的部位 B、结合肽酰-tRNA的部位 C、活化氨基酸的部位 D、转肽酶所在部位

E、结合氨基酰tRNA的部位

3、下列关于密码子的描述哪些项是正确的（ ）

A、密码有种属特异性，所以不同生物合成不同蛋白质 B、密码阅读有方向性，是从5’端到3’端 C、一种氨基酸可以有一组以上的密码子 D、一组密码子只可以代表一种氨基酸

E、密码第三位碱基在决定所参入的氨基酸的特异性方面作用较小 4、 蛋白质生物合成的肽链延长阶段需要（ ） A、GTP B、转肽酶

C、甲酰蛋氨酸tRNA D、mRNA E、Tu与Ts

5、关于遗传密码，正确的叙述是（ ） A、一种氨基酸只有一种密码子 B、有些密码子不代表任

采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/\基因组DNA的提取

一：仪器：同方法一

二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

三：操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心，12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB

酵母DNA提取方法

方法一：

石英砂法

1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于 200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入 3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡 13min，每隔 4min 将离心管取出用力甩几下，然后 65℃水浴 10min。 2、加入 200μL 5mol/L KAc，冰浴 8min； 3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；

4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇 200μL混匀后冰浴 8min，12000rpm×5min收集沉淀；

5、200μL TE 溶解，加入 RNase10μL，65℃水浴 10min； 6、加入 200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；

7、温柔地取上清 150μL ，加入 20μL 3 mol/L NaAc 及 375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集 DNA；

8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后 TE 溶解，-20℃保藏。

方法二：

蜗牛酶法

1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在

蛋白质、氨基酸代谢及蛋白质的生物合成

一、填空题

1、构成蛋白质的基本结构单元是_______________，共有______种，除_________和______外，都是L- -氨基酸。

2、丝氨酸、半胱氨酸和组氨酸三字母代表符号分别是________,_______________和________

3、唯一没有旋光性的氨基酸为______________

4、紫外吸收法（280nm）定量测定蛋白质时其主要依据是因为大多数可溶性蛋白质分子中含有 氨基酸、 氨基酸或 氨基酸。

5、蛋白质结构中主键称为________键，次级键有 __________、________、___________、____________、_______________；次级键中属于共价键的是___________键。

6、蛋白质二级结构的基本类型有_________、_______________、_________和_______。其中维持前三种二级结构稳定键的次级键为________键。

7、细胞色素C，血红蛋白的等电点分别为10和7.1，在pH8.5的溶液中它们分别荷的电性是

2010级高一生物同步教学学案 必修一《分子与细胞》第二单元细胞的自我保障 第一章细胞中的蛋白质 编制 陈秀兰 审核 张经军 日期 2010、9、18 班级 姓名 第二节蛋白质的合成与运输 【目标引领】（一个人追求的目标越高，他的才力就发展的越快。） 1描述核糖体的形态结构和成分 2 简述蛋白质的合成和加工过程 3 能够利用同位素示踪法的现象和结果进行推理和判断 4简述蛋白质分选、运输 5 学会用实验资料探究结论的方法 【预习指导】完成同步训练35页的知识梳理，总结以下问题 1. 核糖体的成分、结构、功能和种类？ 2. 分泌蛋白质的合成和分泌途径？ 3. 同位素示踪法？ 4. 蛋白质的修饰加工？ 5. 真核细胞的内膜系统？ 【情景导入】展示各种面食赏心悦目的图片，它们的原料都是面粉，经过加工和包装成的，氨基酸形成各种蛋白质也是要经过加工和修饰的。 【学导结合】 一、 蛋白质的合成 （一）核糖体： 成分: 和 结构: 和

2010级高一生物同步教学学案 必修一《分子与细胞》第二单元细胞的自我保障 第一章细胞中的蛋白质 编制 陈秀兰 审核 张经军 日期 2010、9、18 班级 姓名 第二节蛋白质的合成与运输 【目标引领】（一个人追求的目标越高，他的才力就发展的越快。） 1描述核糖体的形态结构和成分 2 简述蛋白质的合成和加工过程 3 能够利用同位素示踪法的现象和结果进行推理和判断 4简述蛋白质分选、运输 5 学会用实验资料探究结论的方法 【预习指导】完成同步训练35页的知识梳理，总结以下问题 1. 核糖体的成分、结构、功能和种类？ 2. 分泌蛋白质的合成和分泌途径？ 3. 同位素示踪法？ 4. 蛋白质的修饰加工？ 5. 真核细胞的内膜系统？ 【情景导入】展示各种面食赏心悦目的图片，它们的原料都是面粉，经过加工和包装成的，氨基酸形成各种蛋白质也是要经过加工和修饰的。 【学导结合】 一、 蛋白质的合成 （一）核糖体： 成分: 和 结构: 和

一、 蛋白质的合成

1、 核糖体是合成蛋白质的机器，其功能是按照mRNA的指令由氨基酸合成蛋白质。 2、 游离核糖体游离于胞质中，合成细胞内的基础蛋白质；附着核糖体，附着在内质网

表面，构成粗面内质网的核糖体，合成分泌蛋白和膜蛋白。 3、 蛋白质合成的一般过程：

1）氨基酸的活化。氨基酸和tRNA在氨酰—tRNA合成酶作用下合成活化的氨酰—tRNA。2）起始、延伸和终止。3）蛋白质合成后的加工。肽链N端Met的去除；

氨基酸残基的化学修饰，乙酰化、甲基化、磷酸化等；肽链的折叠；二硫键的形成。

二、 蛋白质的分泌合成、加工修饰和转运

1、 信号肽介导分泌性蛋白在粗面内质网的合成。

1） 信号肽是蛋白质合成中最先被翻译出来的一段氨基酸序列，通常由18-30个疏

水氨基酸组成，能指引核糖体与内质网结合，并引导合成的多肽链进入内质网腔。

2） 新生分泌性蛋白质多肽链在胞质中的游离核糖体上起始合成。当新生肽链N端

的信号肽被翻译后，可立即被细胞质基质中的信号识别颗粒（SRP）识别、结合。

3） 与信号肽识别结合的SRP，识别结合内质网膜上的SRP-R，并介导核糖体锚泊

附着于内质网膜的通道蛋白移位子上。而SRP则从信号肽—核糖体复合体上解离，返回细胞质基质中重复

班级：________________ 姓名：________________ 学号：________________ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _装_ _ _ _ _订_ _ _ _ _线_ _ _（装订线内禁止填写答案）_ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____ _ _____

一、单项选择题,（在备选答案中只有一个是正确的）(本大题共100小题,100分)

1. 维系蛋白质α-螺旋和β-折叠结构稳定的化学键是

A.氢键 B.离子键 C.二硫键 D.疏水作用 E.肽键

(4)氨基酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分子的内部 A.1,2,3 B.1,3 C.2,4 D.4 E.1,2,3,4

11. 在电场中，蛋白质泳动速度取决于

A.蛋白质颗粒的大小 B.蛋白质颗粒的形状 C.带净电荷的多少

D.A+C

E.蛋白质所带电荷的多少，分子量的大小

生物化学课件王静岩版用哪章下哪章

Chapter38

蛋白质的合成与转运

Protein biosynthesis

? 蛋白质的生物合成

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Chapter38 蛋白质的生物合成与转

运翻译Translation) ) 、蛋白质合成的分子基础 一Protein biosynthesis (翻译参与蛋白质生物合成的物质 翻译----以mRNA为模板合成蛋白质 翻译 以 为模板合成蛋白质 mRNA----模板 模板 rRNA----构成核糖体作为蛋白质合成场所 构成核糖体作为蛋白质合成场所 tRNA----搬运工具 搬运工具 氨基酸----原料 氨基酸 原料 蛋白质因子(起始因子 起始因子IF,延伸因子EF,释放因子RF, 蛋白质因子 起始因子 ，延伸因子 ，释放因子 ， 等等) 等等 酶----氨基酰 氨基酰-tRNA合成酶，转肽酶，转位酶，等 合成酶，转肽酶，转位酶， 氨基酰 合成酶 无机离子----Mg++ 无机离子

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Chapter38 蛋白质的生物合成与转

运Protein biosynthesis (翻译 翻译Translation) ) 一、蛋白质合成的分子基础(一)mRNA是翻译的直接模板