植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告

植物细胞骨架的光学和荧光显微镜观察

一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白

质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，用光学染料考马斯亮兰R250和荧光染料鬼笔环肽染色，在普通光学显微镜和荧光显微镜下观察微丝结构。

三、实验步骤：

光学观察 1、

撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有

pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；材料预处理时间太短会影响下一步操作，务必过夜处理。 2、 3、 4、 5、 6、

吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min； 吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min； 3%戊二醛固定30min；

pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；

0.2%考马斯亮兰R250染色20min或者25μg/ mL罗丹明-

鬼笔环肽染色1小时； 7、

用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖

玻片，于显微镜下观察。

荧光观察：

1． 固定液中(固定液成份:4 %多聚甲醛, 50 mmol/ L Pipes pH 6.9 ,

5 mmol/ L EGTA , 5mmol/

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告

姓名：常天易 系年级：海洋生命学院2012级 专业：生物科学

科目：分子细胞生物学实验 学号：12050011006

植物细胞骨架的观察

一、实验目的：

1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。 2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。

二、实验原理：

真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管

（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。

三、实验材料

洋葱表皮细胞

试剂：

1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液 2、M-缓冲液

3、1%Triton X-100/M-缓冲液 4、30%戊二醛-PBS溶液

四、实验方法

撕取1平方厘米见方的洋葱表皮细胞，在培养皿中浸泡于PBS缓冲液中，使其沉底。 去PBS溶液，加入1% TritonX-100处理30min 去 TritonX-100，使用M-缓冲液洗三遍，每次5min 加入3%戊二醛溶液固定3

简要介绍资料的主要内容,以获得更多的关注

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实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

2011届高中生物实验复习专题 2011.1

Ⅰ、使用显微镜观察类实验

1．本类实验的基本操作可概括为： ①选（取）实验材料； ②临时装片制作；

③显微镜观察（先低倍，后高倍）。 2．本类实验的关键实验环节：

①所选实验材料要求必须扁平，薄（一层细胞），否则多层细胞相互重叠无法观察，如观察叶绿体选幼嫩藓类叶，观察细胞质流动选新鲜黑藻幼叶均很薄为单层细胞；

②正确的显微镜操作和使用技巧； ③熟练掌握临时装片制作技术。

补充：认识显微镜的结构，学会使用显微镜

实验目的：认识显微镜的结构，初步掌握使用显微镜的方法。 一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法： 结构：

光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）

机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。

注：目镜 旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越 ；物镜 旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越 。

呈像原理：映入眼球内的是 。（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）

放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的 .

注：显微镜放大倍数是指直径倍

2011届高中生物实验复习专题 2011.1

Ⅰ、使用显微镜观察类实验

1．本类实验的基本操作可概括为： ①选（取）实验材料； ②临时装片制作；

③显微镜观察（先低倍，后高倍）。 2．本类实验的关键实验环节：

①所选实验材料要求必须扁平，薄（一层细胞），否则多层细胞相互重叠无法观察，如观察叶绿体选幼嫩藓类叶，观察细胞质流动选新鲜黑藻幼叶均很薄为单层细胞；

②正确的显微镜操作和使用技巧； ③熟练掌握临时装片制作技术。

补充：认识显微镜的结构，学会使用显微镜

实验目的：认识显微镜的结构，初步掌握使用显微镜的方法。 一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法： 结构：

光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）

机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。

注：目镜 旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越 ；物镜 旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越 。

呈像原理：映入眼球内的是 。（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）

放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的 .

注：显微镜放大倍数是指直径倍

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一 光学显微镜的使用与微生物观察

第一节 普通光学显微镜的使用 一、实验目的

1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。 3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。 二、基本原理

（一）普通光学显微镜的构造

普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。 1、机械系统

机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。 （1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。 （2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；

实验一普 光学显通镜微的使用

一实验、目1的掌、握通光学显普镜微构的造原及 2、理习学并掌握正的使用方法确3 、通过久装永及片鲜切片新观，察掌一些细握结胞构 细或活动胞的点特

、实验二容(内一)显微的使镜用( )二永标久片的本察观(三制)新鲜标作本 片(四作)业

(一显微镜)的用使

显镜是微察观微物体小的密精仪器

1、光学

显镜的组微 光成学照、、明械机2、显镜微的性能指标3、显微的镜用使骤步

显镜微组的

2、显成镜的性微能标指()分1辨力 2()大放率

显镜分辨微力的能低决高定光于系统的学各 条种件被观察的。体必物放大率高须，而 且清晰物，放大体，能后呈否现清晰的细 微构，结首取先决物镜的性能于，次 其为镜和聚目镜光性能的

。

(1)辨力 R分 微镜显能分辨物两点间的小最距。 离R 0=.6λ/1N

A数

孔值 径A N 也叫做镜口率或(开口率，在)镜和物 光器聚上标有它都们数值孔径的数，值孔 径是镜物聚光和的器主要数，参也是断判 它性能的们重最要标。指

数值径孔可用式下示表NA:=·n snθ i中：式n 物—与标镜之本的间质介折率射 θ—镜的镜口物角1/2的即，半径角孔 镜。口角指是从镜 光物轴的物点上发 出光的线与镜物透 前镜有直效的边径