树突状细胞集群靶标检测

树突状细胞靶向的口服疫苗的设计

【编者案】本文对靶向DC的口服疫苗的摄取机制进行了较为全面的总结，并指出了目前树突状细胞靶向疫苗研究存在的问题以及解决这些问题的可行方案，具有一定借鉴意义。

摘要：大多数病原体是通过肺或肠的粘膜入侵机体的。通过口服疫苗建立肠道的局部免疫，可以有效抵抗肠道病原的入侵。但是，目前大多数口服疫苗在到达肠道时，由于各种消化液等因素的影响会失效。可降解微粒递送系统可以增强包囊抗原的免疫原性,但肠粘膜的免疫细胞对这种抗原投递系统的摄取量却很低。用靶向配体对包囊抗原进行表面修饰，可以增强抗原的靶向作用，从而增加包括树突状细胞在内的免疫细胞对抗原的摄取量。本文重点介绍了Fc受体介导的抗原靶向作用。本文重点介绍了Fc受体介导的抗原靶向作用。另外也介绍了在小鼠和猪体内抗原选择性靶向的DC亚群。

前言：由于外周淋巴结中的效应淋巴细胞的特异性归巢，非口服疫苗不能引起肠道黏膜的病原特异性免疫反应。而且很多时候灭活苗通过口服给药是无效的，虽然减毒活疫苗的效果比较好，但是存在毒性反强的风险，在免疫抑制的个体可能引起发病。新型的蛋白质抗原疫苗具有更高的安全性，但在肠道的吸收受到生理屏障的阻碍，而且蛋白质疫苗必须能够耐受胃酸和各

万厚肝病专家带您全面了解树突状DC细胞疗法

树突状DC细胞疗法是国际最新研究成果。

树突状DC细胞疗法又叫体细胞免疫疗法，也称为生物免疫细胞疗法中的细胞治疗方法，是目前国际公认的最具应用前景的治肝技术。主要根据细胞与分子免疫学原理，诱发人体自身产生大量对病毒具有免疫杀伤作用的特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL），对HBV进行精确性、特异性、靶向性、主动式攻击，杀灭体内HBV病毒

树突状DC细胞疗法简介

树突状DC细胞疗法的具体方法是通过科技手段将病人体内的单个核细胞提取出来，用特殊方法在患者体外将其培养成为树突状细胞（DC），赋予其专杀病毒的抗原信息，再使其数量成千万倍增多，成为专门攻击杀伤病毒的“细胞导弹”。这种特殊的“导弹”能精确“瞄准”病毒进行杀伤，却不会伤及正常的肝细胞。然后将这种负载抗原信息的DC细胞回输到患者体内，在患者体内形成大量针对乙肝病毒的免疫杀伤细胞（CTL），从而针对血液和肝细胞中的病毒产生主动性和靶向性攻击，迅速准确地杀灭病毒（包括变异病毒），使

肿瘤个体化治疗靶标检测方案（2009及2012版）

美国肿瘤研究学会（AACR）前主席David Sidransky ：肿瘤是由遗传变异和表观遗传变异累积所致，虽然我们目前还不太可能改变基因，但是我们可以寻找肿瘤细胞中驱动癌变过程的基因，95%的癌症是由这些癌基因所导致。

临床肿瘤学杂志：随着更多的驱动突变被发现，可以预见各种并存突变将越来越多，并愈加复杂。多通路、多靶标并行检测必将大有作为；美国国家肿瘤研究所基金支持的肺癌突变联盟，正在对10种致癌基因进行并行检测，这些基因的改变与某种特定的治疗密切相关。

2012 ASCO 第四十八届美国临床肿瘤学会年会主席Miahael P.Link ：现在比任何时候都更需要合作，科学家、临床医生和患者之间的合作，以进一步推进各种靶向疗法的发展和为肿瘤提供最有效的治疗。

肿瘤治疗在经历了局部治疗时代和化疗时代后，正逐步走向强调系统治疗时代。随着肿瘤基因组计划的深入展开，肿瘤患者的个体差异将被全面揭示。同时，大量靶向药物获得批准进入临床应用加快了肿瘤个体化治疗前进的步伐。在肿瘤个体化治疗时代，不仅需要临床肿瘤专家对肿瘤诊治有全面的认识，同时需要专业的生物技术机构对肿瘤进行基因层面的诠释。

靶向药物及分子靶

9、采用流式细胞仪（FCM）研究MG63细胞周期 FCM检测细胞周期原理

流式细胞仪(flow cytometry或flow cytomyter，FCM)又称荧光活化细胞分拣器(fluorescence activated cell sorter，FACS)是20世纪60年代后期利用激光器和层流流动室而建立的一种用于测定放射性染色体的新技术。细胞周期(cell cycle)是指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程，包含G1期、S期、G2期、M期四个阶段(图1)。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。用FCM进行细胞周期分析是通过测定细胞中DNA量而完成的。测定DNA含量后，可用FCM配备的细胞周期分析软件(例如Becton Dickinson公司的Cell FIT)对其进行自动分析。此测定的细胞周期按照DNA的量分可为Go/G1期、S期及G2/M期。

FCM检测细胞周期流程①培养MG63细胞在 6 孔板内依次放

细胞增殖检测：MTT实验经验总结

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-（4，5）-dimethylthiahiazo （-z-y1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N，N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。

MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 一、步骤 1、接种细胞

用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。 2、培养细胞

同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。 3、呈色

培养3－

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课时跟踪检测(十一) 细胞的增殖

一、选择题

1．下列有关细胞相对表面积、细胞与外界物质交换效率和细胞新陈代谢强度之间的关系的叙述中，正确的是( )

A．细胞的相对表面积越大，物质交换效率越高，细胞新陈代谢越旺盛 B．细胞的相对表面积越大，物质交换效率越低，细胞新陈代谢越缓慢 C．细胞的相对表面积越小，物质交换效率越高，细胞新陈代谢越缓慢 D．细胞的相对表面积越小，物质交换效率越低，细胞新陈代谢越旺盛

2．(2014·杭州模拟)细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期。抑素是细胞释放的、能抑制细胞分裂的物质，主要作用于细胞周期的G2期。M期细胞的细胞质中含有一种促进染色质凝集为染色体的物质。下列有关叙述正确的是( )

A．S期时间较长的细胞更适合作“观察细胞有丝分裂”实验的材料 B．如果缺少氨基酸的供应，动物细胞一般会停留在细胞周期的S期 C．抑素抑制DNA复制所需蛋白质的合成，阻断细胞分裂

D．M期细胞与G1期细胞融合，可能不利于G1期细胞核中的DNA表达 3.右图表示细胞周期，有关叙述不正确的是( ) ．A．按箭头所示方向由a→a或由b→b表示一个细胞周期 B．染色体的平均分配发生于a→b段 C．细胞中核DNA含量的加倍发生在b→a段

2013-2014学年度北海二中生物专题二考卷

考试时间：100分钟

学校：___________姓名：___________班级：___________考号：___________

一、单项选择题：（每题2分）

1、下列与人工种子形成过程无关的是（ ） A．细胞的脱分化和再分化 B．细胞的全能性 C．细胞的有丝分裂 D．细胞的减数分裂

2、由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述不正确的是( )

A．“瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成

B．“弹头”是由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成 C．“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能 D．“生物导弹”是利用细胞工程制出来的

3、某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列说法不正确的是( )

A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理

B．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素 C．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH

D．将数量相等的甲、乙细胞分别置于相同适宜条件下培养，一段时间后，会观察到

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项目十八 B淋巴细胞功能检测

一、溶血空斑试验 (Plaque forming cell assay)

【实验原理】

将SRBC免疫动物，隔一定时间取其脾脏制成细胞悬液，当与SRBC混合孵育时，其中抗体形成细胞释放的抗体会与周围SRBC特异性结合，在补体作用下，使这些致敏的SRBC溶解，从而在琼脂凝胶中的每个抗体形成细胞周围形成一个肉眼可见的溶血空斑。测定与补体结合力强的IgM形成细胞采用直接方法；测定与补体结合力弱的IgG或IgA形成细胞采用间接法，即实验中需加入抗免疫动物Ig的抗体(二抗)，才能促进溶血空斑形成。 此处只介绍小鼠琼脂直接溶血空斑技术。 【试剂和器材】

1．小白鼠 体重18~22 g。 2．补体 豚鼠混合新鲜血清。

3．SRBC悬液 用Gey液将SRBC洗3次，分别配成2.5×108个细胞/ml和5×108个细胞/ml浓度的红细胞悬液。 4．Gey液、琼脂糖。

5．注射器、剪刀、镊子、不锈钢网、小平皿、试管、吸管、显微镜、温箱、水浴箱。 【步骤和方法】

1．免疫小鼠 取1ml 2.5×108个细胞/ml 浓度的SRBC悬液注入小鼠腹腔，或取0.2 ml SRBC悬液经小鼠尾静脉注入