微生物的接种与培养实验注意事项

实验七 微生物的接种与培养

一、实验教学目的与要求

目的：1、掌握各种微生物接种的基本操作技术。

内容：1、斜面接种。

2、液体接种。

3、穿刺接种。

4、平板接种。

二、实验原理

将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基上，这个过程就称为接种。

三、实验材料及用具

1.仪器及用具

斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒。

四、操作步骤

（一）斜面接种：

从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。

图1. 斜面接种示意图

（二）液体接种：

由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。

（三）穿刺接种：

用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿

幼犬在30天开始逐渐断奶,从母乳中获得的抗体逐渐下降,当幼犬到了40~45天龄时,体内的抗体达到了出生后的较低水平.这时,幼犬适合被领养.到了新主人家里,幼犬因变换了食物和环境,要适应一段时间.这个过程的长短取决于幼犬的自身适应能力,通常一周左右就习惯了新的生活环境.也就是说,幼犬在断奶后15天时正是做疫苗的最好时机.这样,疫苗和幼犬体内的抗体没有冲突,效果更理想.

幼犬做疫苗的前后三天尽量不外出,减少幼犬的不适应和外界环境对它的不良影响,也避免传染疾病.幼犬的体质如果很好,在做苗的前后一周内是可以洗澡的.只要环境温暖,没有骤冷骤热的温度变化,就可以洗澡.洗后要及时吹干,避免感冒.

注射疫苗的前后三天内,幼犬的饮食要相对清淡.幼犬在下列情况下应暂缓做疫苗, 直到这些症状完全消失或被彻底治愈并经检查体质已恢复健康时才可以做疫苗: 感冒症状,流鼻涕,打喷嚏,发热,没精神.

厌食,呕吐,腹泻,粪便有浓重的异味.

多次持续性腹泻,脱水,精神萎靡.

鼻头干燥,发热,眼屎明显加重,但其它方面无异常.

不发热,但鼻头干燥,咳嗽,有痰或无痰,食欲减退,无腹泻.

或有以上症状的综合表现.

幼犬做苗应在白天进行,注射疫苗后的半小时内,幼犬会有体温升高(但不是发烧),耳朵发热

课题1: 微生物的实验室培养（导学案）

高二生物组

目标导引

1、通过学习知道培养基的种类、营养要素及如何配制培养基 2、通过学习知道消毒灭菌的原理和方法

3、通过学习你将知道如何用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养

问题导学

一、培养基:阅读课本培养基的相关内容，完成下列问题：

（1）培养基分为哪两类？二者的区别？培养基有何用途？

（2）不同的微生物所需要的培养基配方相同吗？培养基的基本成分（主要营养物质）有哪些？为什

么大多数培养基都需要具备这些基本成分？

（3）培养基除能为微生物生长提供几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长的哪些要求？

（4）你知道牛肉膏、蛋白胨可以为微生物的生长提供哪些营养物质吗？

二、无菌技术：阅读无菌技术的相关内容，完成下列问题：

（1）获得纯净培养物的关键是什么？无菌技术围绕什么而展开？主要包括哪几个方面？

（2）什么是消毒与灭菌？二者的区别？实验室常用的消毒方法、灭菌方法有哪些？分别适用于那些用具？

（3）利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

（4）请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。

①培养细菌用的培养基与培

探究性实验一 微生物的培养与应用

课题1、 课题 、

微生物实验室培养

1.培养基概念、培养基的分类、特点和用途 培养基概念、培养基的分类、 培养基概念 2. 培养基的配制原则和营养构成 3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 . 4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 . 5.对位训练 .

课题1、 课题 、 微生物实验室培养 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 1.培养基概念： 出供其生长繁殖的营养基质。划分 标准 物理 性质 特点 培养基种类 液体培养基 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 半固体培养基 培养基 化学 成分 成培养基 含化学成分不明 的 物质 培养基成分明 培养基 加 种化 学物质， 制不需 的微生物的生长， 需 的的生长 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 工业生产 分类、鉴定 培养、分离出特定微生物(如培养 菌和 菌， 培养基 加 培养 菌， 培养基 ) 不加凝固剂 用途 工业生产 观察微生物的运动、分类、鉴定

用 培养基 途

加

鉴

培养基

微生物的 特 鉴 点， 培养基 加 种 剂 化学 品

不同种类的微生物，如 用 — 培养基鉴 用 制品 菌( ,菌 呈 ， )

2.培养基的配制原则和营养构成 培养基的配制原则和营养构成(

卡介苗接种注意事项及操作流程

注意事项：

1严禁皮下及肌肉注射

2卡介苗注射器专用，不得用作其他注射 3开启疫苗和注射时，切勿使用消毒剂接触疫苗 4疫苗有裂纹及标签不清或出现浑浊等外观异常不能使用

5疫苗开启后应立即使用，放置2----8℃半小时内用完，剩余废弃。 6备有肾上腺素等药物，以备发生过敏时使用。

7注射乙肝免疫球蛋白的宝宝，间隔一个月到当地防保所接种。 8如果喷到眼中，立即用生理盐水反复冲洗，同时汇报疾控防疫科。

常见反应及注意事项

1接种2—3天后局部出现红肿，2---3周局部出现红肿硬结溃疡，随后化脓。2—3月结疤。一般不需要处理。保持局部清洁。 2局部脓肿大于1厘米，3个月不结疤，及时到疾控中心诊治。 3淋巴结反应：接种侧腋下淋巴结可轻度肿大，不超过1厘米。1—2月后消退。如果化脓及时到疾控中心防疫科诊治。

4接种后可有一过性发热，多数为轻度，1—2天后自行消退。一般不需要处理。如果发热超过38.0℃或发热时间超过48小时，可给予对症处理。

5如果不结疤，不需要补接种。也不需要再来询问。

6罕见不良反应有：严重淋巴结反应，骨髓炎，过敏性皮疹及过敏性紫癜。

接种流程

1接种前测量体温，超过37.5℃暂缓接种，待体温正常后接种。

探究性实验一 微生物的培养与应用

课题1、 课题 、

微生物实验室培养

1.培养基概念、培养基的分类、特点和用途 培养基概念、培养基的分类、 培养基概念 2. 培养基的配制原则和营养构成 3.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 . 4.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 . 5.对位训练 .

课题1、 课题 、 微生物实验室培养 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 1.培养基概念： 出供其生长繁殖的营养基质。划分 标准 物理 性质 特点 培养基种类 液体培养基 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 半固体培养基 培养基 化学 成分 成培养基 含化学成分不明 的 物质 培养基成分明 培养基 加 种化 学物质， 制不需 的微生物的生长， 需 的的生长 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 工业生产 分类、鉴定 培养、分离出特定微生物(如培养 菌和 菌， 培养基 加 培养 菌， 培养基 ) 不加凝固剂 用途 工业生产 观察微生物的运动、分类、鉴定

用 培养基 途

加

鉴

培养基

微生物的 特 鉴 点， 培养基 加 种 剂 化学 品

不同种类的微生物，如 用 — 培养基鉴 用 制品 菌( ,菌 呈 ， )

2.培养基的配制原则和营养构成 培养基的配制原则和营养构成(

细胞培养

相关疾病：

每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了 ，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?

早走早脱身，从此专注黑生物

1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。

2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。

3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。

5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。

6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

非科班出身经验分享

1. 别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。

2. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。

3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。

4. 实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个 30 分钟。

5.

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品

情境一：分离纯化和选育生产菌种 发酵工艺技术教材

项目2 保藏微生物菌种操作

◆ 学习目标 1.了解各种菌种保藏的基本原理和优缺点； 2.学会根据菌种的特点选择相应的保藏方法；学会采用不同方法进行保藏菌种操作。 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 当然保藏菌种使其不变异亦是相对而言的。实际上没有一种方法可使菌种绝对不变化，所以研究菌种保藏就是要采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。

菌种是国家的重要资源，世界各国对这项资源都给予极大重视，很早就设臵了各种专业性的保存机构，如ATCC、NRRL等。1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 1 基础知识

菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通

细胞冷冻保存方法、注意事项

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。

2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，

如Sigma D-2650)，以5~10 ml 小体积分装，4 oC 避光保存，勿作多次解冻。Glycerol 亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。 4、冷冻保存之细胞浓度：

（1）normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 。

（2）hybridoma: 1~3 x 106 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后死去。

（3）adherent tumor lines: 5~7 x 106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma 解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 106 cell