微生物实验指导书太原师范学院

《 微生物学实验 》

实验一 显微镜的使用、细菌革兰氏染色法及细菌特殊结构的观察

（一） 实验目的

1. 了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理 2. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3. 在油镜下观察细菌几种基本形态 4．掌握细菌革兰氏染色法

（二） 实验原理

1．显微镜的基本结构及油镜的工作原理

现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常 被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：

1. 增加照明亮度

油镜的放大倍数可达 100 Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片

实验一 微生物的分离和纯化

本实验以微生物的分离和纯化为主线，综合包括了培养基的配制、消毒灭菌、微生物的分离等内容，在给定的时间内由学生自主完成。包括以下知识内容。学生书写实验报告的时候，不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述实验过程，在别人看完你的实验报告后，能够知道你是怎样做的，能够重复你的实验过程。 一、目的要求

1．了解培养基的配制原理，掌握常用培养基的配制方法。 2．掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。

3 学习、掌握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术。 4 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。

5 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培养条件。 二、原理

培养基是将微生物生长繁殖所需要各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。此外，微生物还必须在最合适的酸碱度范围的培养基上生长繁殖，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的PH值范围。根据研究目的不同，可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2%的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5～0.8%的琼脂。有时为了特殊

实验一 光学显微镜的操作及细菌形态观察

1.1 实验目的

(1) 掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。 (2) 观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。

1.2 实验器材

显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。

1.3 显微镜的结构及其操作方法

1.3.1 普通光学显微镜(Light Microscope) 1.3.1.1 光学显微镜的结构和各部件作用

观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机械装置和光学系

统两部分。

一 机械装置

(1) 镜筒：镜筒长度一般是160cm。它的上端装目镜，下端装物镜回转板。回转板上一般有三个物镜。

(2) 转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个孔或5个孔。不同规格的物镜分别安装在各孔上。

(3) 载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。有的载物台上装有自动推物器。

(4) 调节器：镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。

二 光学光学系统

（1）目镜：一般使

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微生物实验室操作指导书目录

（一）安全守则 （二）检验总则 （三）基本技术要求 （四）食品平板菌落计数

（五）食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 （六）沙门氏菌检验 （七）金黄色葡萄球菌检验 （八）霉菌计数 （九）革兰氏染色

（十）空气中微生物的检验 （十一） 水中微生物的检验 （十二）食品接触面的微生物检验 （十三）蔬菜农残的快速检测

审核：

编制：

化验室操作指导书（受控） 1 （一）安全守则

1 进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。

2 在进行高压、干燥、消毒等工作时，工作人员不得擅自离开现场，认真观察温度、时间，蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。

3 严禁用口直接吸取药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液、病原体溅出容器外时，应立即用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方能离开现场。

4 工作完毕，两手用清水肥皂洗净，必要时可用（杀菌剂）新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手，然后用水冲洗，工作服应经常清洗，保持整洁，必要时高压消毒。

5 实验完毕，及时清理现场和实验用具，对染菌带毒物品，进行消毒灭菌处理，并填写日常工作记录。

6 每日下班，认真检查水、相关电

微生物学实验指导

微生物学课程组 编

朝阳师专生化系 二00九年三月

编写说明

微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，就其学科性质而言它又是一门实践性很强的学科。

实验课的教学目的是训练学生掌握微生物学最基本的实验操作技能，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的微生物学理论知识，同时，通过实验培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是，严肃认真的科学态度；为以后课程的学习和将来的工作以及科学研究打下坚实的基础。

本实验指定是在参考有关院校的微生物学实验教材的基础上，结合我们的实验室条件以及仪器设备状况，经过多方取舍编写而成，可供生物技术及畜牧兽医等专业师生参考。

由于编者水平有限，加上时间仓促、经验不足，在许多方面肯定有不少缺点与错误，希望各位读者批评指正。

在编写过程中，生化系全体师生给予大力支持，在此表示感谢。

编者

2009.03

目 录

实验一 显微镜的使用 实验二 细菌的简单染色法 实验三 革兰氏染色法 实验四 细菌的芽孢染色法 实验五 放线菌的形态观察 实验六 霉菌

实验须知

普通微生物学实验课的目的是，训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基础知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成实事求是、严谨认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的作风。

为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：

1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。

2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。

3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导老师，及时处理，切勿隐瞒。

5.实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。

6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。

7.每次实验完毕后，必须把所有仪器抹净

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实验一 显微镜的使用

微生物的个体很小，必须用放大倍数高的、结构精密的显微镜，才能了解其个体的形态特征及特殊的繁殖方式。因此，显微镜是学习微生物的重要工具，只有正确并熟练地掌握显微镜的使用方法，才能研究和观察微生物的形态。本实验通过观察细菌的染色涂片标本，重点练习和掌握油镜的使用方法。

一、器材准备

1、具油镜头的显微镜。

2、细菌染色涂片标本若干片。

3、香柏油、二甲苯和擦镜纸。

二、显微镜的构造

1、机械部分

显微镜的机械部分包括镜座、镜身、镜筒、载物台、物镜转换器、推进器、粗和细调螺旋等。

2、光学部分：

光学部分包括目镜、物镜、聚光镜、虹彩光圈、反光镜等。

三、显微镜的性能

显微镜的总放大倍数等于物镜放大率和目镜放大率的乘积。但显微镜性能优劣，不只是视其放大倍数的高低，而更主要是视其辨晰细微结构的能力，即性能良好的显微镜必须使观察的物体放大倍数高，而且清晰。

显微镜辩析细微结构的能力可用分辨率表示。其能够辨晰的细微结构愈小，则分辨率愈高，分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。若设物镜分辨出的物体两点间的最短距离为D ，则 D=2sin n 2A N 2α

λλ?=?=数值口径光波长度

D ——物镜分辨出物体两点间的最短距离。

λ—

目 录

实验规则????????????????????????????????2

实验一 环境中微生物的检测?????????????????????????3 实验二 细菌的简单染色???????????????????????????7 实验三 细菌的革兰氏染色??????????????????????????10 实验四 细菌的芽孢染色???????????????????????????12 实验五 细菌的荚膜染色???????????????????????????14 实验六 细菌的鞭毛染色及其运动性观察????????????????????16 实验七 放线菌的形态观察??????????????????????????19 实验八 酵母菌形态及细胞结构的观察?????????????????????23 实验九 丝状真菌形态观察????????????????????????26 实验十 几种常用培养基的制备???????????????????????30 实验十一 高压蒸汽灭菌和干热灭菌??????????????????????35 实验十二 噬菌体效价的测定?????????????

目 录

实验规则????????????????????????????????2

实验一 环境中微生物的检测?????????????????????????3 实验二 细菌的简单染色???????????????????????????7 实验三 细菌的革兰氏染色??????????????????????????10 实验四 细菌的芽孢染色???????????????????????????12 实验五 细菌的荚膜染色???????????????????????????14 实验六 细菌的鞭毛染色及其运动性观察????????????????????16 实验七 放线菌的形态观察??????????????????????????19 实验八 酵母菌形态及细胞结构的观察?????????????????????23 实验九 丝状真菌形态观察????????????????????????26 实验十 几种常用培养基的制备???????????????????????30 实验十一 高压蒸汽灭菌和干热灭菌??????????????????????35 实验十二 噬菌体效价的测定?????????????

环境因素 对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝 学号：3100401214 姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。 实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。 2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。 实验器材： 1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭 4、仪器和其他用品