液相色谱仪操作及原理

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审核/颁发部门

批准/颁发部门

签名 签名

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目的

本用户需求URS文件，旨在从项目和系统的角度阐述用户的需求，总结了用户对该项目的质量要求（GMP），描述了用户对该设备的工作过程及功能的期望。主要包括相关法规符合度和用户的具体需求，这份文件是构建起项目和系统的文件体系的基础，同时也是系统设计和验证的可接受标准的依据。设备生产商应在规定的时间内完成并达到本用户需求的设计目标和可接受的质量标准。

适用范围

本文件适用于公司内需要购买的高效液相色谱仪的购买，维护，验证等过程需求。

参考

3.1 中国药品生产质量管理规范 3.2 美国药品生产质量管理规范 3.3 欧洲药品生产质量管理规范

定义

4.1 URS

URS是User Requirement Specification字母简写，意思是用户需求，即用户对设备设施等关于法规，技术，安全，验证，校准，文件，维护，培训，供应商的具体要求，并形成具体的经批准的用户需求文件。 4.2 FAT

FAT是Factory Acceptance Test字母简写，意思是工厂验收测试，即按照批准的文件对指定的设备设

日出实业集团有限公司质量体系文件

主 题 Agilent 1260高效液相色谱仪标准操作规程 审核者： 执行日期： 编号：SOP-04 第1版第0次修订 页号：1 OF 4 起草者： 批准者： 1、目的

确保Agilent 1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。

2、范围

研发分析中心实验室Agilent 1260高效液相色谱仪。

3、责任

仪器使用者对本标准的实施负责。

4、内容

4. 1 开机

4.1.1打开计算机，进入Windows 画面。

4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。 4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击工作站 画面左下角【Method and Run control】项，进入方法和运行控制窗口。 4.2 安装色谱柱

正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存 在漏液。

4.3 溶剂瓶体积设置

把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More

液相色谱仪授权考核试题

姓名 部门 得分 一、填空题（10分，每空1分）

1、本公司高效液相色谱仪为安捷伦 型号液相色谱仪，配

有 和 检测器，色谱柱为 ，柱尺寸为 。

2、高效液相色谱系统主要由 、 、 、 、

和 、软件工作站组成。

二、选择题（20分，每题2分）

1、环境空气苯并[a]芘的测定中苯并[a]芘标准使用液的溶剂是（ ） A. 四氯化碳 B. 甲醇 C. 乙腈 D. 异丙醇

2、环境空气苯并[a]芘的测定中荧光检测器：激发波长（ ）nm，发射波长（ ）nm。

A. 364 427 B. 275 410 C. 260 415 D. 290 415 3、液相色谱仪的清洗溶剂为（ ）%浓度的异丙醇 A. 10 B. 15 C. 20 D. 25 4、除（ ）外

仪器名称：高效液相色谱仪

　　仪器型号：Agilent1100

　　生产厂家：Agilent

　　使用方法：

　　(一)、开机：

　　1、打开计算机，进入WindowsNT（或Windows2000）画面，并运行BootpServer程序。

　　2、打开1100LC各模块电源。

　　3、待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。

　　4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面，单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”，”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

　　5、把流动相放入溶剂瓶中。

　　6、打开Purge阀。

　　7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。

　　8、设Flow：5ml/min，单击OK。

　　9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge

题目：高效液相色谱仪维修、保养、校正检验操作规程 第 1 页 共 6 页

1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。 2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。 3.有关责任：化验室精密仪器室

4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材 5.规程内容： 5.1开机前准备

5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。

5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。 5.2.采样前准备

5.2.1打开计算机,进入 Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。 5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。

5.2.3从“视图”菜单中选择“方

Water 2695 高效液相色谱仪操作规程

1目的

用于规范检验人员正确操作使用Waters 2695 高效液相色谱仪。 2 适用范围

适用于使用Waters 2695高效液相色谱仪检测分析的操作管理。 3 职责

使用Waters 2695高效液相色谱仪进行检验的检验员应对本规程负责，相关项目经理负责监督该操作规程的正确执行。

4仪器组成及原理

4.1仪器组成本仪器由 Waters 2695 高效液相色谱仪、 检测器(2996型二极管阵列检测器、2487紫外检测器、2489紫外检测器、474型荧光检测器)、Empower色谱作站组成。2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面等组成。

4.2高效液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，经色谱柱进行分离，检测器检测分离后的不同组分，数据处理装置记录色谱图或进行数据处理。

5.仪器的操作 5.1仪器的准备

5.1.1 检查流动相（使用前应首先脱气）、在线清洗溶液（10%甲醇-水溶液seal wash）、进样针清洗溶液（90%甲醇-水溶液

Agilent 1100型高效液相色谱仪操作规程

一、仪器各组件

泵 ：四元泵、二元泵

在线脱气器

进样器：自动进样器及手动进样器

柱温箱

检测器： DAD检测器、UV检测器

二、何时需要使用Agilent在线脱气机

如果在低UV波长段，用最高灵敏度进行检测

如果要求使用最佳进样精度

如果要求保留时间重现性很高（在0.5ml/min流速以下）

如果样品和检测对流动相中溶解氧敏感

三、开机

打开计算机,进入Windows NT 或Windows 2000 画面,并运行Bootp Server程序（点击左下方【Bootp Server】图标）

打开色谱仪各组件电源，待Bootp Server里显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。化学工作站自动与1100通讯。

四、排气

将流动相放入溶剂瓶中，打开Purge 阀，依次单击【Pump】→【Set up Pump】，设Flow为2ml/min，单击OK ，再依次单击【Pump】→【control】，选中on，单击OK，则系统开始Purge至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。

在【control】选项中选off，关闭泵，关闭Purge 阀。单击泵下面瓶图

Waters 1525-2489 型高效液相色谱仪操作规程 版本号：01修订号：00 编写： 审核： 批准： 日期： 生效日期： 1. 目的：规范Waters1525型高效液相色谱仪的操作，确保检测设备安全稳定的运行。 2. 范围：适用于Waters1525型高效液相色谱仪的操作使用。 3. 职责：检验员负责本规程的执行。 4. 操作步骤 4.1开机前检查

流动相对应泵单元放置，检查电源线接口连接完好 4.2色谱柱的安装

安装待测样品所需的色谱柱，注意色谱柱方向。打开柱温箱电源开关，设置柱温箱温度。 4.3开机 4.3.1泵单元

打开泵电源，待自检通过后排气泡。（注：上泵是B泵，一般放置水系流动相；下泵是A泵，一般放置有机系流动相。）拧开上泵排液（空）阀螺旋，用注射器抽去管道及泵头内气泡，然后立即拧紧排液（空）阀螺旋。下泵排气泡操作与上泵相同。 4.3.2打开检测器电源 等待自检通过，大约5min。 4.3.3打开色谱工作站 打开计算机电源，点击

桌面图标，进入Breeze2 色谱工作站，用户名输入日期： 日期： breeze，点击确定按钮，操作的项目选择“hd”，色谱系统选择“1525/2489”，点击确定。

4.

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

优胜美特制药有限公司&浙江巨泰药业有限公司

一、目的

制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。 二、适用范围

本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。 三、职责

QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。

高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

四、程序内容 4.1仪器配置

本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。

4.2操作前的准备

4.2.1流动相的制备 用色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。

4.2.2 供试溶液的配制 供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次

Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作

规程

Ⅰ 目 的：制定Agilent 1290超高效液相色谱仪使用操作规程，确保操作人

员能正确规范地操作液相色谱仪。

Ⅱ 范 围：适用于Agilent1290超高效液相色谱仪的使用。 Ⅲ 规 程： 1 开机

1.1 打开计算机，进入 Windows画面。 1.2 打开 1290INFINITY HPLC 各模块电源。

1.3 待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自

动与12001290INFINITY HPLC 通讯。

1.4 从“View”菜单中选择“方法和运行控制”画面， 点击”视图”菜单中的“样品视图“系统视图”， 使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 1.5 点击泵下面的瓶图标，选择‘瓶填充‘如下图所示，输入溶剂的实际体积和

瓶体积。 也可输入停泵的体积。点击“Ok”。

1.6 从菜单 “视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口 1”，然后点击“改

变?” 钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。(如同时检测二个信号，则重复选中“信号窗口 2”) 2 排气

2.1 首先在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要