乳酸脱氢酶粗提液的制备和活力测定

实验六 乳酸脱氢酶酶活力测定 及紫外吸收法测定蛋白质含量

目的要求

(1) 掌握LDH活性测定原理；

(2) 学习用比色法测定酶活性的方法。

实验原理

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH，EC.1.1.1.27, L－乳酸：NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。

LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为

简单、快速。鉴于NADH, NAD+ 在340nm及260nm 处有各自的最大吸收峰，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值得改变，定量测定酶的含量。本实验测定LDH活力，基质液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下，加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340 nm 处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义是：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位。定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。

利用上述原理，改变不同第五则可测定相应脱氢酶反应过程中A340nm的改变，定量测定酶活力，如苹果酸脱氢

目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶X(LDH—X)活性及其比值在生育男性与不育男性中的差异,探讨其在评价精液质量中的应用。方法以长链α-酮酸为底物,用全自动生化分析仪检测各实验组精浆及全精子中的LDH～X活性,并通过精子总数计算出精子LDH—X的活性、精浆／全精子中LDH—X的比值,进行统计学分析。结果不育A、B组精浆LDH—X活性大于生育组男性,精子LDH—X的活性

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现代中西医结合杂志 Mo en o r a o t rt rd i a C i s n s r d i 0 7D c 1 ( 5 d r u nl f ne a dT a io l hn e dWet n Me i n 2 0 e, 6 3 ) J I g e tn e a e ce

测定精浆和全精子中的乳酸脱氢酶同工酶 X活性及其比值在评价精液质量中的应用卢卫国周迎春何静朱辉超 ,,, ( .广州中医药大学第一附属医院，东广州 5 0 0; .广东省佛山市顺德区陈村医院，东佛山 5 8 1 ) 1广 14 5 2广 2 3 3[要]目的通过比较精浆及全精子中乳酸脱氢酶同工酶 x( D摘 L H—x)性及其比值在生育男性与不育男性活中的差

实验26 过氧化氢酶活力的测定（必修）

[目的与原理]

掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。

血清中的过氧化氢酶（CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT活力单位定义为：每1分钟分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位（U）。 [试剂与器材] 试剂：

1、磷酸盐缓冲液（67mmol / l，pH=7.4）：取Na2HP04 7.60g，KH2P041.82g，溶于1L蒸馏水中，调pH至7.4。

2、基质液（65μmol/ l, H2O2）：取30% H2O2 3.69 ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：称取［(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材：

721分光光度计 , 0.5cm比色杯，恒温水箱（37℃±0.5℃），试管 16mm×100mm，移液管，吸耳球，可调微量进样器。 [实验步骤]

1、样品测定：基质液置于37℃水浴 5 min，然后按下列步骤操作 试剂 基质液 钼酸铵 缓冲液 血清

对照管 1.0

?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性

乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达

周文婷1，崔羽，王晓燕2，张永红，李世荣，李景鹏*

（东北农业大学生命科学与生物技术中心，哈尔滨 1500301；

哈尔滨医科大学附属第四医院检验科，哈尔滨 1500012）

摘 要： 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用，由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物，利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1，ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。

关键词：乙醇脱氢酶（ADH）；基因克隆，原核表达；酶活力检测1

酒是重要的

?类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用,由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物,利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶?类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性

乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA的克隆与表达

周文婷1，崔羽，王晓燕2，张永红，李世荣，李景鹏*

（东北农业大学生命科学与生物技术中心，哈尔滨 1500301；

哈尔滨医科大学附属第四医院检验科，哈尔滨 1500012）

摘 要： 类乙醇脱氢酶(ADH)在乙醇的肝代谢中发挥重要作用，由ADH1、ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物，利用RT-PCR同时克隆乙醇脱氢酶 类基因全长cDNA。测序后的cDNA被克隆在表达载体pTYB11上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过检测其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADH1，ADH2和ADH3的酶活力分别为1.8± 0.3U/mg, 0.9±0.2U/mg和1.4±0.2U/mg。

关键词：乙醇脱氢酶（ADH）；基因克隆，原核表达；酶活力检测1

酒是重要的

生物化学实验报告

题目：纤维素酶活力的测定（3,5-二硝基水杨酸法）

姓名： 学号： 班级： 时间：

一、

实验目的：

掌握还原糖的测定原理，学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。

二、

实验原理：

纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力。 三、

实验试剂：

1. 3,5-二硝基水杨酸显色液：称取10g 3,5-二硝基水杨酸，溶入蒸馏水中，

加入20g分析纯氢氧化钠，200g酒石酸钾钠，加水500ml，升温溶解后，加入重蒸酚2g，无水亚硫酸钠0.5g。加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000ml。存于棕色瓶中，放置一周后使用。 2. 0.1摩尔pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液。

3. 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。使用前摇匀。 4. 标准葡萄糖溶液：称取干燥至恒重的葡萄糖100mg，溶解后定容至100ml，

此溶液含葡萄糖1.00mg/ml。

5. 酶液：将0.05g酶溶解定容至50ml，从中取出1ml再定容至100ml，待

测。（用pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制）

四、

成绩： 日期：2015年 11月1 日 南京林业大学实验报告

专业 学号 姓名 日期

实验二、核糖核酸酶活力的测定

一．实验目的：

核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶（ RNase)是水解DNA和

RNA磷酸二酯键的核酸内切酶，与植物的生长、分化、衰老、种子成熟和萌发等生理生化过程密切相关。

通过测定这两个酶的活性，可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况。推测其所处的生长发育状态和阶段。

二、原理

以植物叶片试验材料，提取粗酶液，进行酶促反应，以反应混合物中0.1ml 酶液在30min内催化形成具有OD值为1的硝酸镧可溶性RNA 碎片的酶量为1个酶活性单位。

三、材料、试剂与仪器设备：

植物材料：绣球

实验试剂：0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）；0.05ml30mM巯基乙醇；1ml酵母RNA；1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液。

实验器具：分光光度计；离心机；研钵；离心管；移液管；试管等；恒温水浴箱。

四、实验步骤

1.酶液的提取

称取0.4g绣球叶片剪碎用3ml0.01M的HAc（醋酸缓冲液pH4.8）分三次加入（1，1，1），研磨提取，在5000

乳酸菌,发酵,饮料

生物科学与技术综合实验

黄运红

乳酸菌,发酵,饮料

生物科学与技术综合实验实验一 乳酸发酵与乳酸菌饮 料的制备

乳酸菌,发酵,饮料

乳酸菌饮料是一种发酵型的酸性含 乳饮料,通常以牛乳或乳粉、植物 蛋白乳(粉)、果蔬菜汁或糖类为 原料，经杀菌、冷却、接种乳酸菌 发酵剂培养发酵，然后经稀释而成。

乳酸菌,发酵,饮料

一、 酸奶的营养价值 1 营养丰富，具有鲜乳所有的营养价值， 而且优于鲜乳。 2 调节人体肠道中的微生物菌群平衡， 抑制肠道有害菌生长。

乳酸菌,发酵,饮料

3 降低胆固醇水平 4 合成某些抗菌素，提高人体抗病能力。 5 缓解“乳糖不耐受症”。 6 有美容、润肤、明目、固齿等作用。

乳酸菌,发酵,饮料

二、酸乳的发酵剂菌种所谓发酵剂(starter)是指生 产发酵乳制品时所用的特定微生 物培养物。

根据FAO关于酸乳的定义，酸乳中 的特征菌为嗜热链球菌和保加利亚 乳杆菌。

乳酸菌,发酵,饮料

左图保加利亚乳杆菌，右图嗜热乳酸链球菌

乳酸菌,发酵,饮料

三、发酵剂的选择 1. 产酸能力 ① 感官评价 2. 后酸化 ② 挥发性酸的量 ③ 乙醛生成能力 3. 产香性 4. 粘性物质的产生 5. 蛋白质的水解性 ①

明矾的制备和纯度测定

明矾的制备和纯度测定

一、实验目的

1．了解明矾的制备方法；

2．认识铝和氢氧化铝的两性；

3．练习和掌握溶解、过滤、结晶以及沉淀的转移和洗涤等无机制备中常用的基本操作和测量产品熔点的方法。

二、实验原理

明矾在食品、造纸和医药等行业都有广泛的应用，本实验采用铝屑进行制备。其主要反应如下：

2Al + 2NaOH + 2H2O → 2NaAlO2 + 3H2↑

用饱和碳酸氢铵溶液与NaAlO2反应制备Al(OH)3↓

NaAlO2 + NH4HCO3 + H2O → Al(OH)3↓ + NH3↑ + NaHCO3

将Al(OH)3沉淀与硫酸反应制硫酸铝，加入硫酸钾后，冷却、结晶、过滤、烘干即可获得明矾。

2Al(OH)3↓ + 3H2SO4 → Al2(SO4)3 + 6H2O

Al2(SO4)3 + K2SO4 +24H2O → K2SO4·Al2(SO4)3·24H2O

三、主要仪器和试剂

1.主要仪器：烧杯，量筒，普通漏斗，布氏漏斗，抽滤瓶，表面皿，蒸发皿，酒精灯，研钵，台秤，毛细管，提勒管等。

2.试剂：铝片，H2SO4(1moL·L-1), H2SO4(浓), NaOH(固体)，NH4HCO3(固体)，K2S

实验方法

实验二 植物根系活力的测定

植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验学习测定根系活力的甲烯蓝法。 【原理】

根据沙比宁等的理论，植物对溶质的吸收具有表面吸附的特性，并假定被吸附物质在根系表面形成一层均匀的单分子层；当根系对溶质的吸附达到饱和后，根系的活跃部分能将吸附着的物质进一步转移到细胞中去，并继续产生吸附作用。在测定根系活力时常用甲烯蓝作为吸附物质，其被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲烯蓝浓度可用比色法测定。已知1mg甲烯蓝形成单分子层时覆盖的面积为1.1m2，据此可算出根系的总吸收面积。从吸附饱和后再吸附的甲烯蓝的量，可算出根系的活跃吸收表面积，作为根系吸收活力的指标。 【材料、仪器与试剂】 1.材料：植物根系。

2.仪器及用具：分光光度计；移液管；烧杯；比色管。

3.试剂：0.01 mg mL-1甲烯蓝溶液；0.0002 mol L-1（0.075 mg mL-1）甲烯蓝溶液。 【方法与步骤】

1. 甲烯蓝标准曲线的制作 按表2－1用0.01 mg mL-1甲烯蓝溶液配制系列标准溶液，于660 nm处测定吸光度，以甲烯蓝浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线