植物基因组dna的提取和电泳实验报告

实验二 植物基因组DNA的提取

Tris 读音 “吹斯” 脱氧核糖核酸酶DNase

是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。 淀下来，而DNA溶解在溶液中。

锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平

苯酚在空气中经常被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA分离，会使磷酸二酯键断裂， 造成DNA降解。苯酚使蛋白变性，离心时沉

在提取DNA时用的原料成分的关系,很多植物源提取材料里面含有酚类物质,酚类物质是芳族环上的氢原子被羟基或功能衍生物取代后生成的化合物

酚类物质如果经氧化后就会很容易于DNA共价结合引起褐变.这就是褐变现象,为有效除去酚类物质，需要在研磨时加入抗氧化的PVP，用PVP是利用

它的“CO-N=”基有很强的结合多酚化合物的能力，其结合能力随多酚化合物中芳环羟基数量的增加而加强，结合成复合物后,通过离心除去。另外，在化合物被氧化。

加入提取液时，加入B-巯基乙醇可使多酚氧化酶失活，防止酚类物质

题目：水稻DNA提取，扩增与电泳实验 组别：第三组

一、1掌握DNA的提取技术2掌握PCR的相关操作3掌握了解电泳操作方法和步骤

二、实验原理：1、提取DNA一般用水稻幼叶，先用机械方法液氮研磨植物组织使组织细胞破碎，然后加TPS抽提液水浴提取DNA，最后用无水乙醇沉淀DNA即可。（DNA提取原理）2、DNA在高温时可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。（PCR原理）3、琼脂糖凝胶电泳：借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。 三、实验仪器和药品

液氮、镊子、手套、移液枪、枪头2ML和1.5ML离心管、水稻幼叶、研磨棒、琼脂糖、天平、PCR仪、Loading Buffer染色剂、灭菌双蒸水、摇床、离心仪、Taq酶、Mg2+Buffer、dNTP溶液、引物、TPS抽提液、无水乙醇、电泳槽、GoldView、TBE溶液、微波炉、锥形瓶、量筒、PCR板、PCR盖、水浴箱、Marker 四、实验步骤 1、DNA提取

（1）取水稻叶子少量置于2ML离心管内，加入液氮研磨，带磨成粉状后，加1MLTPS抽提液，然后将离心管放入75℃恒温水浴箱中至少半小时。同时将无水乙醇放入-40℃下冷冻 （2）水

实验报告 真核生物基因组DNA的提取和含量测定 实验一、真核生物基因组DNA和提取和含量测定 姓 名：—— 一、实验原理（Principle） （一）基因组DNA的提取： 本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法破碎组织获得细胞，用无菌水溶解沉淀，加入蛋白酶消化液，以温和方法的破碎细胞而不产生机械剪切以致破坏DNA的完整性，可以使DNase变性，去除部分的蛋白，还可以使核蛋白体从DNA上解离。然后加入RNase以去除RNA。再用苯酚：氯仿抽提法反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质组分分开，收集上清液后用乙醇沉淀DNA，最后用TE缓冲液溶解DNA，并测定DNA的含量及纯度。 苯酚—氯仿抽提法：酚、氯仿是有机溶剂，能有效地使蛋白质变性，使用酚：氯仿混合物抽提，可促进有机相和水相的分离。异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。变性蛋白一般集中在两相之间的界面层，而脂类则有效地分配在有机相中，核酸则被留于上层水相。该法具有①操作条件比较温和；②能迅速使蛋白质变性并同时抑制核酸酶的活性；③可得到具有生物活性的高聚合度的核酸等优点。但其操作步骤较为繁琐，去除蛋白质需要反复多次，费时，且所得到的核酸仍有部分降解。 （二）二苯胺显色法测定DN

基因组DNA分离及纯化

实验一 全基因组DNA的分离及纯化 由于分离线粒体DNA繁琐、耗时、成本相对较高，目前很多研究采用先分的全基因组DNA，再用特异的引物扩增线粒体基因组的方法，因此获得高纯度全基因组DNA显得尤为重要。

现在有很多的商品化试剂盒可以快速高效的从血液，组织中提取基因组DNA，简便快捷，DNA的得率和纯度都很高 。我们就TaKaRa DNA提取试剂盒为例，介绍外周静脉血全基因组DNA提取的操作流程。

目的：掌握试剂盒提取外周血细胞基因组DNA的方法。

原理：本试剂盒是用于动物组织、植物材料、全血和培养细胞（Animal tissues/Plants/Blood/Cultured cells）等全基因组DNA的广谱型小量纯化试剂盒。该试剂盒采用独特的细胞裂解系统，由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，然后使用特殊的相分离法除去蛋白质、多糖以及脂质等杂质，再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，全套操作约需1小时便可完成。使用本试剂盒可从1～100 mg的动物组织、10～200 mg的植物材料、10～200 μl的全血（含抗凝剂）、10～10的培养细胞中纯化得到多至数十微克的高纯度基因组DNA。此基

1 分子实验报告 2013030020华天瑞

Preparation of Plasmid DNA, Restriction Enzyme Digestion, and

Agarose Gel Electrophoresis

2014/10/14-21

1 Intro

1.1 Objective

To learn

? The characteristics of plasmid DNA

? The method of plasmid DNA mini-preparation by alkaline lysis and the measurement of

DNA concentration by spectrophotometer ? The characteristics of restriction endonuclease

? How to use agarose gel electrophoresis to separate DNAs To understand: The principles of pu

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

班级 组别 成员 指导教师 10级生物科学2班 第七组 刘梦雅、王芳、毛阿威、张杰 刘立亚

2011年11月11日

综合性实验设计

——植物DNA的提取及纯度检验方案

一、 实验目的

1. 学习从生物体中分离核酸的原理和方法； 2. 掌握测定核酸的原理和方法；

3. 掌握核酸的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；

4. 培养学生创新实践能力和团队合作精神，并强化科研反哺教学效果。

二、 实验原理

1、 关于植物DNA制备的基本原理

植物细胞中DNA主要存在于细胞核内，称为核DNA。细胞质中含有少量的DNA，称之为细胞质DNA，主要分布于线粒体或叶绿体中，分别称为线粒体DNA和叶绿体DNA，细胞内各种DNA称为总DNA。植物DNA的制备，必须首先注意植物细胞的特点：①植物组织中含有坚硬的纤维素，采用温和条件难以破碎细胞；②植物细胞一般具有大的液泡，破碎细胞时有机酸随之逸出将使pH显著下降；③通常植物细胞的DNA含量较低；④植物中含有大量多糖、脂质、色素和酚类等物质，这些杂质往往会与提取的DNA混在一起，给核酸的提取与纯化带来诸多不便。鉴于以上特点，提取植物DNA时除了选

1 分子实验报告 2013030020华天瑞

Preparation of Plasmid DNA, Restriction Enzyme Digestion, and

Agarose Gel Electrophoresis

2014/10/14-21

1 Intro

1.1 Objective

To learn

? The characteristics of plasmid DNA

? The method of plasmid DNA mini-preparation by alkaline lysis and the measurement of

DNA concentration by spectrophotometer ? The characteristics of restriction endonuclease

? How to use agarose gel electrophoresis to separate DNAs To understand: The principles of pu

宏基因组学方法研究明永冰川的初步实验计划

起草人：李浩宇

宏基因组学研究方向及意义

研究：环境胁迫对集体遗传变异的过程和机理。 发掘：环境应激和应答基因的多态性。 探究：多态性基因的功能。

实验大体步骤：

I.环境样品的采集：

1）避免人源污染，采样的器具都要高温灭菌，采样过程中要戴手套。

2） 样品的迅速处理保存。有条件最好用液氮冷冻运输，没有条件可以将装有样品的容器至于干冰泡沫箱中。带回实验室之后要尽快处理，特别是固体样品，迅速用预冷缓冲液 (多为PBS)重悬，离心收集沉淀。分装成小份，冻存于液氮或者‐80 ℃ 冰箱中，避免反复冻融。

3）如果后续用间接法提取总DNA 的话，此处需要收集菌体，采取的策略是稀释之后的差速离心，一般适用于水样。

II.DNA提取方法的选择：

总DNA 的提取按照处理样品方式的不同划分为直接提取法和间接提取法。 直接提取法就是直接对样品进行裂解，释放其中的DNA。

间接提取法则是先分离样品中的微生物，后对微生物进行裂解。两种方法的适用范围不同，各自都有优缺点。

直接提取法的优缺点：直接提取法多用在提取固体样品(如土壤、污泥、湖泊沉积物等) 总DNA 的试验中。其最大的优点在于得率高

宏基因组学方法研究明永冰川的初步实验计划

起草人：李浩宇

宏基因组学研究方向及意义

研究：环境胁迫对集体遗传变异的过程和机理。 发掘：环境应激和应答基因的多态性。 探究：多态性基因的功能。

实验大体步骤：

I.环境样品的采集：

1）避免人源污染，采样的器具都要高温灭菌，采样过程中要戴手套。

2） 样品的迅速处理保存。有条件最好用液氮冷冻运输，没有条件可以将装有样品的容器至于干冰泡沫箱中。带回实验室之后要尽快处理，特别是固体样品，迅速用预冷缓冲液 (多为PBS)重悬，离心收集沉淀。分装成小份，冻存于液氮或者‐80 ℃ 冰箱中，避免反复冻融。

3）如果后续用间接法提取总DNA 的话，此处需要收集菌体，采取的策略是稀释之后的差速离心，一般适用于水样。

II.DNA提取方法的选择：

总DNA 的提取按照处理样品方式的不同划分为直接提取法和间接提取法。 直接提取法就是直接对样品进行裂解，释放其中的DNA。

间接提取法则是先分离样品中的微生物，后对微生物进行裂解。两种方法的适用范围不同，各自都有优缺点。

直接提取法的优缺点：直接提取法多用在提取固体样品(如土壤、污泥、湖泊沉积物等) 总DNA 的试验中。其最大的优点在于得率高