小鼠表皮细胞原代培养实验报告

综合设计性实验报告

学 院

課 程 实验项目 实验题目 专 业 年级、班别 姓 名 学 号 任课教师 完成日期

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实验六 细胞培养

——小鼠表皮细胞的原代培养

摘要 目的 探讨体外分离和培养小鼠表皮细胞的方法。方法 采用脱臼法处死新生小鼠，结合

酶消化法和组织块法对新生小鼠表皮细胞进行了体外分离、培养。（用眼科剪把新生小鼠表皮细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将组织块接种于培养瓶中进行体外培养。）结果 新生小鼠表皮细胞克隆2~3d后开始形成，细胞呈梭形，体外培养一个星期后仍能够保持良好的生长状态。结论 采用该方法能够实现对小鼠表皮细胞的体外原代培养，并且细胞贴壁生长的速度比单纯采用酶消化法和组织块法大大提高。

［1］

关键词 原代培养 小鼠表皮细胞 酶消化法 组织块法

2

1前 言

目的 ：初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌

握无菌操作方法。意义 ：细胞培养技术目前已经广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学等领域，已发展成为一种重要的生物技术。为此

实验四 乳鼠肺细胞原代培养

一、实验目的

1.了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。

2.学习细胞消化、细胞计数方法。

二、实验原理

原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的地生长及繁殖。

三、实验用品

1.设备

CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、恒温水浴箱、离心机等。

2.器材

眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、培养皿、纱布块（或不锈钢网）、玻璃漏斗、量筒、移液管、试管、锥形瓶、吸管、橡皮头、培养皿等。

上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，15磅灭菌30min。此外，还需显微镜、血细胞计数板、酒精灯、酒精棉球等。

3.试剂

（1）D-Hanks平衡盐溶液：即无钙、镁离子的Hanks液。

（2）细胞消化液：0.25％胰蛋白酶液（0.25g胰蛋白干粉，加D-Hanks平衡盐溶液100mL，溶解后过滤除菌，调pH值7.4）

（3）7.4％NaHCO3溶液。

（4）RPMI1640培养液。

以上溶液均经适当包装，除菌后备用。此外，还需胎牛血清和1000U/mL的青、链霉素液（双抗）。在RP

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

广 州 大 学

综合设计性实验报告

学 院 生 命 科 学 学 院

课 程 细 胞 生 物 学 实 验 实验项目 细胞培养 实验题目 小鼠肝细胞的原代培养 专 业 生物技术 年级、班别 生技142 姓 名 徐嘉宽 学 号 1414300030 任课教师 陈鲲

细胞培养

——小鼠细胞的原代培养

摘要 目的 探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。方法 采用脱臼法处死新生小鼠，结合 酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。（用

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

细胞培养实验报告

细胞培养主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存三个过程。

一、实验仪器及用品

（一）超净台：

1. 枪头：10 mL、5 mL、1 mL、200 μL、10 μL； 2. 移液枪：同上，及相应的支架；

3. 离心管：50 mL、15 mL、1.5 mL，及相应支架与盛皿； 4. 记号笔； 5. PBS缓冲液； 6. 酒精棉；

7. 废液杯×2：一个装枪头，一个装废液； 8. 封口膜； 9. 排枪卡槽； （二）细胞间：

1. 离心机：中型、小型；

2. 培养瓶：透气的用于培养，密封的用于运输，培养皿； 3. 灭菌离心管、枪头、冻存管等备用；

4. 毛巾、手套、口罩、酒精喷壶、灭菌超纯水、除菌滤膜； 5. 100 μL排枪； 6. 血球计数板、载玻片； 7. 水浴锅； （三）冰箱： 1. 双抗、环丙沙星；

2. 4℃：DMEM、1640、PBS、已配培养基； 3. -20℃：MTT、MTS、DMSO、血清、胰酶； （四）缓冲间： 1. CO2罐、液氮罐； （五）换衣间

1. 实验服、拖鞋、手套、口罩、酒精喷壶；

二、实验前准备

（一）实验前将需要带入的物品洗净、高温灭菌、喷酒精，放入传送窗，将传送窗与细胞间紫外开启杀菌半小时；

山东大学实验报告 2014/11/4

姓名：XX 系年级：2013级XX班 学号：201300XXXXXXX 实验题目: 动物细胞培养 同组者: XXXXX 动物细胞培养技术

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；

【实验原理】

（一）. 动物细胞培养技术

动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用

细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确

山东大学实验报告 2014/11/4

姓名：XX 系年级：2013级XX班 学号：201300XXXXXXX 实验题目: 动物细胞培养 同组者: XXXXX 动物细胞培养技术

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；

【实验原理】

（一）. 动物细胞培养技术

动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用

细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确

细 胞 生 物 学

实 验 论 文

年级：2012级师范2班 姓名：田金梅

学号：222012317011114 指

导

老

师

魏

玲

：

人体外周血淋巴细胞培养与染色体核型分析

（西南大学生命科学学院 重庆400715）

摘要：细胞培养是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术，掌握细胞培养技术有利于我们掌握一种非常重要的实验技术方法。本次实验通过用人体外周血淋巴细胞为材料，进行PHA处理然后再37℃下培养72小时，并在离培养终止3~4小时添加秋水仙素处理，然后经过低渗离心固定的反复操作，将细胞收集以及处理成合适的装片，然后通过冰片滴片的方式，再由Gemesa染液染色，再镜检，找到含46条染色体合适的细胞，再用显微拍照技术拍照，得到的图片经过简单处理，剪切，并测量数据，最后得到核型分析图谱。 关键词：细胞培养；PHA；人体外周血淋巴细胞；染色体装片制备; 核型分析

综述：细胞培养是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术，也是当前细

胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实

细菌培养实验报告

篇一：培养基的制备与灭菌实验报告

陕西师范大学远程教育学院

生物学实验报告

报告题目培养基的制备与灭菌

姓 名 刘 伟

学 号

专 业 生 物 科 学

批次/层次

指导教师

学习中心培养基的制备与灭菌

一、目的要求

1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置原则和方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

二、基本原理

牛肉膏蛋白胨培养基：

是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：

主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

三、实验材料

1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三

角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号