微生物学实验技术的应用和就业

实验一 实验室和人体表面微生物的检查

一 实验目的

1 证明实验室环境与体表存在微生物

2 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型 3 体会无菌操作的重要性 二 实验原理

平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，1-2d内每一菌体能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小、表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑等。因此可通过平板培养基来检查环境中微生物的数量和类型。 三、器材

1、培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂平板

2、仪器或其他用具 无菌水、灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。 四、操作步骤 1、写标签

任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号（包括班级、姓名、日期、样品来源等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。

注：培养皿的记号一般写在皿底上，如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时容易混淆。 2、实验室细菌检查 （1）空气

将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在实验台上，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中，将另一块肉

微生物学实验

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 实验二 油镜的使用和细菌的简单染色 实验三 细菌的革兰氏染色和芽孢染色

实验四 微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定 实验五 培养基的配制与消毒灭菌 实验六 土壤微生物的分离纯化与鉴定 实验七 食品微生物检验 (一)细菌总数测定 实验八 食品微生物检验 （二）大肠菌群数测定 实验九 大肠杆菌生长曲线的测定 实验十 IMViC与硫化氢试验

实验一、实验室环境和人体表微生物的检查

1. 一、目的：

1. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型； 2. 观察不同类型微生物的菌落形态特征； 3. 体会无菌操作的重要性。

2. 二、原理：

1. 微生物无孔不入，无处不在。

2. 微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。（37 ℃倒置培养24 h） 3. 描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、

边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪俊?

4. 细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观

察细菌。

3. 三、器材：

1. 培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）

2. 器具

微生物学试题十二套

微生物学试题（一）

一、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释 1.Gram positive bacteria 2.parasporal crystal 3 ,colony 4, life cycle 5,capsule 6,endospore 二、简答题

1，试述微生物与当代人类实践的重要关系？ 2，简述革兰氏染色的机制？

3.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？ 三、填空(每空1分,共15分)

1.真核微生物核糖体类型为 _______ 。

2.大肠杆菌长为2.0μm,宽为0.5μm,其大小表示为_____ 。

3.研究细菌遗传、代谢性能常采用 _____ 时期的细胞。4.酵母菌细胞壁的主要成份_____和_______。

5.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称 ________ 。 6.微生物细胞的主要组成元素是______，_____，_______和_______。 7.食用菌是由 ______和 ____ 组成。

8.用物理或化学方法杀死物品上大部分微生物的过程称 ______ 。 9.细菌细胞的碳、氮营养比为______。 10.根瘤菌可与 _________共

微生物学实验

实验室须知

1. 应保持实验室安静，切勿高声喧哗和随意走动。 2. 实验室内禁止饮食、吸烟、及用嘴湿润铅笔和标签等 物。 3. 使用显微镜和其它贵重仪器时，应在教师同意后方可 使用，切勿擅自拆卸，否则因此而损坏仪器，应予以 赔偿。 4. 遇意外发生，应立即报告教师，不可自己随意处理。

实验室注意事项：1. 每次实验前必须认真预习，课堂上注意聆听教师对实验内容 的讲解，注意观察教师的示范操作。 2. 实验时应仔细认真，严格按操作规程进行，注意改变生活中 的习惯动作，以掌握微生物学实验的科学操作方法。 3. 使用贵重仪器应先事先熟知操作规程，遇仪器故障时请教师 帮助解决。 4. 实验中如遇菌液外溢、皮肤划伤或菌液吸入等意外，应立即 报告老师及时进行处理，不得隐瞒，以免酿成后患。 5. 注意安全，易燃物品如二甲苯、吸水纸等应远离火源。打火 机只能用于点燃酒精灯，酒精灯用完应及时盖上灯帽。 6. 实验完毕，必须将仪器放到指定地点，带菌工具应先进行消 毒。

实验室注意事项：7. 实验需进行培养的材料，要标明姓名、组别、日期后，放于 教师指定的培养箱中进行培养。 8. 未经教师同意，实验室中的任何菌种和物品不得携带出室外。 9. 实验时应认真进行观

《微生物学及实验》实验指导书

杨翔华 主编

辽宁石油化工大学环境与生物工程学院

第一部分 实验目的

《微生物学及实验》实验课是我院环境科学专业学生必修的一门重要的基础实验课，是学生进入我院实验室的第一门实验课。

《微生物学及实验》实验的目的是使学生掌握微生物学的基本实验方法和技术，正确的使用实验的仪器设备，在学生头脑中建立无菌概念和掌握无菌操作技能是最重要的内容，是学生进行后续课实验和研究的基础。在目前的实验室条件和有限学时的情况下，得到微生物实验技术的基本操作和技能训练，培养学生动手操作能力和创新能力。通过微生物学实验课教学，加深理解和巩固课堂所学的知识，熟悉微生物学实验的基本操作技术，了解微生物实验的基础知识。通过微生物学实验培养学生观察、思考、分析问题、解决问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度、创新精神、创新思维和创新能力。

本实验指导书主要内容包括：微生物个体和菌落形态观察、染色方法、培养基制备和灭菌、无菌操作、微生物检测和分离、生理生化反应、影响微生物生长的因素和污染物微生物降解实验，水中微生物分布调查等内容。同时也注意和环境微生物学的联系与区别。

整个实验课中贯穿了显微镜使用—灭菌方法—无菌操作—微生物菌种分离筛选鉴定

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...

微生物学实验指导

（怀化学院微生物学课程组）

一、课程性质、地位和作用

微生物学实验是制药工程专业的微生物学课程内实验，为了配合微生物学的教学而开设的。我们将微生物学实验项目按微生物学研究和生产实践程序而构建成一个综合性整体。在这个综合性系统中，包含了要掌握的各项微生物学技术。实验项目保分为验证性实验部分、综合性实验部分、设计性实验部分和研究性实验部分。我们希望通过本实验的教学，培养学生掌握微生物学基本操作技能，具备较强的观察、思考、分析问题的能力，能解决制药工程领域中微生物学研究和生产领域实际问题的基本能力；养成实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。 二、考核方法与要求

1．平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占30% 2．报告成绩：实验报告等，占20%

3．考试成绩：实验操作考试，20%；理论考试，30% 4．综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩+考试成绩

实验一 培养基的制备与灭菌

一、实验目的

1．掌握培养基配制的原理。

2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、 马铃薯培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。 二、实验

Module 1：微生物学研究与应用技术

一、PCR技术

1、PCR原理：PCR技术是以DNA双链的复制和变性、复性为原理，在人工调控的温度下，提供DNA复制所需的引物、模板、dNTPs、聚合酶等条件，从而使得DNA可周而复始的进行复制扩增。

2、PCR循环（步骤）：变性（denaturation）—退火（annealing）—延伸（extension）； 变性：高温下，模板DNA发生热变性，双链解开成两条单链； 退火：反应体系降温，使引物与模板DNA两端的碱基配对； 延伸：DNA聚合酶使引物3’端向前延伸合成新链； 新合成的单链又可作为下一轮循环的模板进行复制，并不断重复上述的3个步骤，使得DNA片段呈指数增长，在1h内可重复25~30次，DNA的扩增量可达106~107倍。 3、PCR常用的耐热聚合酶：（1）TaqDNA聚合酶，耐高温但缺乏校正功能，使用最为广泛；（2）Pfu DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶，既耐高温又具有校正功能的聚合酶；

（3）Tth DNA聚合酶，具有逆转录活性的聚合酶，可使RT-PCR在同一体系中进行，即使仅有极少量的RNA也可被扩增，可用于研究细胞RNA和RNA病毒。 4、PCR的应用：（1）可用于基因的扩

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...

目 录

实验一 微生物制片及形态观察 ...............................................................................1

一、显微镜油镜的使用 ........................................................................................ 1 二、细菌简单染色法及形态观察 ........................................................................ 3 三、革兰氏染色法 ................................................................................................ 6 四、细菌的芽孢染色 ............................................................................................ 8 五、放线菌的形态结构观察 ...