人脐静脉内皮细胞HUVEC培养

两种人脐静脉内皮细胞培养方法的比较 作者：王燕 王君 龚坚 王汉琴

来源：《中外医学研究》2013年第02期

【摘要】 目的：用两种不同的方法培养人脐静脉内皮细胞，比较两种方法的优缺点。方法：（1）方法1，用0.125%胰酶加0.02%的EDTA消化液消化、方离脐静脉内皮细胞，用含20%的胎牛血清的DMEM完全培养液，于37 ℃、5% CO2条件下培养。（2）方法2，用胶原酶Ⅱ消化脐静脉内皮细胞，用含20%胎牛血清+细胞生长因子+明胶铺板，于37 ℃、5% CO2条件下培养。比较两种方法对细胞活力、培养细胞数量等方面的影响。结果：以改良方法培养的内皮细胞4 h贴壁生长，细胞数量达到整瓶的80%～90%，48～72 h生长最快，细胞融合，内皮细胞呈单层铺路石样外观。传统方法培养的内皮细胞24 h后细胞数量只达到整瓶的20%～30%，细胞融合较慢。结论：用0.125%胰酶加0.02%的EDTA灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法，更加简便、经济，是建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的好方法。

【关键词】 人脐静脉内皮细胞； 消化液； 培养方法

中图分类号 R446 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）2-0038-02

炎症和内皮细胞机能障碍是动脉粥样硬化的关键早期事件。研究了姜黄素对肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用,以了解姜黄素对内皮细胞的抗炎作用的途径,为防治细胞因子诱导的内皮细胞机能障碍提供新方法。

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国外医药 植物药分册

20 0 8年第 2 3卷第 5期

在给以去氧肾上腺素前，大型或中型传导 Kc以

组相比，组动物 HR无明显差别。以该提取物预处 各

( Kc Kc通道阻滞剂北非蝎毒素和选择性 B B a或I ) Kc通道阻滞剂 iei o i b r txn预处理胸主动脉环后，可 t均抑制云杉鞣酚的血管舒张效应；小型传导 Kc而( Kc)滞剂蜂毒素和选择性中型 I阻滞剂 1 S阻 K一

理内皮完整的胸主动脉环 4 2d后，增强乙酰胆碱可和硝普钠对 S HR胸主动脉环 (以去氧肾上腺素预收缩)的松弛作用。与赋形组相比， H给以提取物 2 S R

( 2d后，扭转血液中钠离子的轻微升高、 4 )可钾离子和钙离子的趋向减少；明显减少肝细胞中MDA的增加；弱氧化导致的肝细胞 D减 NA损害。以上结果表

E 2氯苯基 ) (一二苯甲基]1吡唑不能抑制云杉鞣酚一 H一的血管舒张效应。以上结果表明，云杉鞣酚的舒张血管作用可能是

内皮细胞的培养

内皮细胞，用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。血管内皮细胞（EC）位于血液与血管组织之间，它不仅能完成血液和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。

下面以脐带静脉为例介绍内皮细胞的培养： 一、试剂准备：

（1）脐带保存液：生理盐水、葡萄糖100 mmoL/L、100 U/ml青霉素一100 U/m1链霉素。 （2）组织消化液：0．1％ I型胶原酶和0．05％胰酶-0．02％ 乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)溶液。

（3）内皮细胞培养液：含20％胎牛血清、ECGS、肝素，100 U／m1青霉素-100 U／m1链霉素的M199培养基。

（4）器皿：0．2％ 明胶包被：用PBS配制。

二、原代提取

（1）脐带处理：在无菌条件下取新生胎儿脐带，长度>20 cm。剪去脐带两端和脐带上有夹痕及血肿部分

复旦大学

硕士学位论文

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

姓名：王秀华

申请学位级别：硕士

专业：儿科学/心胸外科

指导教师：贾兵

20070420

论文独创性声明

本论文是我？＋入在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论支中滁了蒋裁热强标注兽爨致落麓缝方羚。不瓴含英缝久或其它梳猕已翌发表或撰篝适的研究成果。其池同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的鸯明并表示了谢意。

俸誊麓名：至整聋．量期：２２：点：！主

论文使用授权声明

本人完全了瓣复量大学有关漂辫、蓬震学霞论文的缓定，霹：掌校有权景譬送交论文的夏印件，允许绝文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部势内容，可以采用影；ｎ、缩印或其它复制手段保存沦文。保密的论文在解密后遵守此疑定；

矗＼

导师蕊名怍者签名：ｊ丧笪‘－。。。。一‘。。。。＿。。。＿。。。。＿。●＿＿一京日期：ｏ７．１、－ｊ§

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

中文摘要

目的：

诱导脐血来源内皮祖细胞分化为内皮细胞，探索分离、培养以及鉴定脐血来

源的内皮祖细胞方法，探讨其用作组织工程心血管修复物种子细胞来源的可行

性。

材料和方法：

新鲜脐血１５份，采用６％羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法

复旦大学

硕士学位论文

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

姓名：王秀华

申请学位级别：硕士

专业：儿科学/心胸外科

指导教师：贾兵

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本论文是我？＋入在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论支中滁了蒋裁热强标注兽爨致落麓缝方羚。不瓴含英缝久或其它梳猕已翌发表或撰篝适的研究成果。其池同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的鸯明并表示了谢意。

俸誊麓名：至整聋．量期：２２：点：！主

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本人完全了瓣复量大学有关漂辫、蓬震学霞论文的缓定，霹：掌校有权景譬送交论文的夏印件，允许绝文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部势内容，可以采用影；ｎ、缩印或其它复制手段保存沦文。保密的论文在解密后遵守此疑定；

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人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

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中文摘要

目的：

诱导脐血来源内皮祖细胞分化为内皮细胞，探索分离、培养以及鉴定脐血来

源的内皮祖细胞方法，探讨其用作组织工程心血管修复物种子细胞来源的可行

性。

材料和方法：

新鲜脐血１５份，采用６％羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法

复旦大学

硕士学位论文

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

姓名：王秀华

申请学位级别：硕士

专业：儿科学/心胸外科

指导教师：贾兵

20070420

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本论文是我？＋入在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论支中滁了蒋裁热强标注兽爨致落麓缝方羚。不瓴含英缝久或其它梳猕已翌发表或撰篝适的研究成果。其池同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的鸯明并表示了谢意。

俸誊麓名：至整聋．量期：２２：点：！主

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人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

人脐血来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

中文摘要

目的：

诱导脐血来源内皮祖细胞分化为内皮细胞，探索分离、培养以及鉴定脐血来

源的内皮祖细胞方法，探讨其用作组织工程心血管修复物种子细胞来源的可行

性。

材料和方法：

新鲜脐血１５份，采用６％羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法

目的：观察穿透性角膜移植术后植片角膜内皮细胞密度的变化。方法：用角膜内皮显微镜对术前供体角膜及术后一年内受体植片的内皮细胞密度进行连续观察。结果：术后植片内皮细胞下降率为：一周0.22%,二周3.94%,三周5.74%;二月8.68%;三月10.09%;六月14.68%;一年26.7%。结论：穿透性角膜移植术后植片内皮细胞在前三周为快速下降期,第二个月至一年为慢速稳定下降期,将为临床医师在手术时对供体的选择,手术技巧及术后治疗提供参考。

维普资讯

中国实用眼科杂志第 2 0卷 ( 0 2 2 0 )第 l 0期

穿透性角膜移植术后角膜内皮细胞密度的改变银勇马挺王养政朱秀萍朱斌良吴洁

西安市眼科研究所

西安市眼科医院

700 10 2

目的：观察穿透性角膜移植术后植片角膜内皮细胞密度的变化。 方法：用角膜内皮显微镜对术前供体角膜及术后一年内受体植片的内皮细胞密度进行连续观察。 结果：术后植片内皮细胞下降率为：一周 0 2%;二周 3 9%;三周 5 7%;二月 8 6%;三月 l .9;六月 l .8;一 .2 .4 .4 .8 00% 46%年 2 7。 6.%

结论：穿透性角膜移植术后植片内皮细胞在前三周为快速下降期，第二个月至一年为慢速稳定下降期，将为

药物与临床

中国现代医生2 0 1 4年 5月第 5 2卷第1 4期

乌司他丁对重症中暑患者血管内皮细胞损伤的影响刘永锋

河南省登封市人民医院重症医学科。河南登封

4 5 2 4 7 0

【摘要】目的探讨乌司他丁对重症中暑患者血管内皮细胞损伤的保护作用。方法回顾性分析 4 0例重症中暑患者的临床资料，其中 2 0例患者采用常规治疗，为常规组， 2 0例患者在常规治疗的基础上加用乌司他丁治疗，为乌司他丁组，比较两组治疗后外周 C E C数量、外周血管 v WF和 T M浓度。另选择 2 0例健康体检者作为对照组。结果治疗前重症中暑患者外周血 C E C计数、 v WF和 T M浓度显著高于对照组 ( P< 0 . 0 1 ),治疗后常规治疗组和乌司他丁组较治疗前均显著下降 ( P< 0 . 0 5或 P< O . 0 1 ),但乌司他丁组下降幅度显著大于常规治疗组 ( P< 0 . 0 1 )。结论重症中暑患者在常规治疗的基础上加重乌司他丁治疗对患者的血管内皮细胞具有一定的保护作用。 [关键词1乌司他丁；中暑；血管内皮细胞

【中图分类号]R 5 9 4 . 1 2

【文献标识码】B

【文章编号】1 6 7 3— 9 7 0 1 ( 2

目的探讨银杏叶提取物(gingko biloba extrac,GbE)是否对内毒素脂多糖(LPS)导致的大鼠肺动脉内皮细胞(pulmonary artery endothelial cells,PAECs)损伤具有保护作用。方法利用大鼠肺动脉组织块贴壁法进行细胞原代培养。通过形态观察和Ⅷ因子相关抗原抗血清间接免疫荧光染色对细胞进行鉴定。将细胞分为空白对照组、LPS组、三个浓度的GbE组,均与细胞共育24小时,检测各组细胞及

泰18 6

山

医

学

院

学

报

J OURNAL OF SHAN TAI MEDI CAL OLL C EGE Vo. 3 N03 2 1 13 . 0 2

银杏叶提取物对内毒素致大鼠肺动脉内皮细胞损伤的保护作用王桂成刘岩(泰山医学院附属泰山医院老年科一科，山东泰安 210 ) 700

摘要：目的探讨银杏叶提取物( igob oaet cG E是否对内毒素脂多糖 ( P ) g k i b x a, b ) n l r L S导致的大鼠肺动脉内皮细胞 (p m nr r r n o ea eH,A C ) l u o a at yed t l l esP E s损伤具有保护作用。方法利用大鼠肺动脉组织块贴壁法进行细 y e h

人脐血造血干细胞治疗1型糖尿病的过程

1简介

干细胞在人大多数的组织中具有特征性。它们有助于组织分化，

发育，再生，重塑，及补充因为年龄增长和/或因病变导致的组织缺损。这些组织特异性干细胞通常会显示很大的异质性，在以细胞为基础的治疗中难以被分离。作为一种特殊的组织，脐带作为桥梁使发育中的胚胎或胎儿与胎盘连接，脐带血在脐带中循环。在早期胚胎发育的第三周脐带形成并开始发育，胎儿是通过一个连接柄连接（即脐带初期）胎盘。胚胎发育过程中，胎盘和胎儿通过脐带进行氧气和营养的交换。分娩后，脐带血液和/或他们的干细胞可以很容易地收集并应用于临床。它已经被广泛的临床证据证明：对捐赠者不会有害、没有伦理道德方面的问题、移植物抗宿主病（GVHD）的低风险和快速可用性[1]。人类脐带血的独特性为再生医学提供了一种可以作为替代源的干细胞。 1型糖尿病（T1D）是T细胞介导诱变的自身免疫性疾病，它导致胰岛β细胞缺乏。全世界数百万T1D患者的必须靠每天注射胰岛素以维持生命。但是，它不能治愈。迄今为止，人们通过调查研究许多方法，以治愈T1D [2-9]。总之，自体免疫的控制是预防和治疗T1D的重中之重，然后由β-细胞替代和重构胰岛的功能（例如，胰岛移植和干细胞衍生的胰