底物荧光素luciferin

带Luciferin荧光素酶细胞转染实验的具体步骤及方法

一、细胞名称LLC-GFP-luc

二、组织小鼠肺癌细胞系

三、母细胞来源ATCC

四、转染方法与标记过程的描述慢病毒转染Hygromycin筛选

(一) 质粒部分

1.酶切载体：pGL4.10（luc2）由酶切获得1400bp的luc2基因片断；EGFP片段由PCR扩增获得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A载体酶切线性化。

2.电泳和胶回收：上述酶切产物DNA电泳，TAKARA试剂盒胶回收，回收产物取少量电泳鉴定。

3.连接载体与目的片段:使用Invitrogen T4连接酶连接luc2、EGFP片段和pSin-hyg-T2A线性化载体，连接使用20ul体系，25℃，10min。

4.转化：感受态菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入连接产物，静置25min 后在水浴42℃，45sec热休克，后加入250ul无抗培养基225转摇菌1h，将转化的菌铺于有氨苄抗性平板37度过夜。

5.挑取单克隆：观察平板后挑取15个单克隆至含2ml氨苄抗性LB培养基摇菌管中，255转摇菌

6.5h。

6.小抽质粒与鉴定：使用碱裂解法小抽，质粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鉴定: 重

Microchemi -荧光素酶的检测

前言

一 生物发光 二 荧光素酶

三 荧光素酶报告基因 四 荧光素酶的检测方法

五 利用MicroChemi检测植物叶片中的荧光素酶生物发光

附成功案例1：中国农业大学生命科学学院检测烟草叶片中荧光素酶的发光 附成功案例2：吉林大学植物科学学院（已购买）

前言

以色列DNR生物影像公司成立于1993年，他致力于为科研工作者提供杰出而专业的支持与服务，现在已有超过10,000套的DNR成像系统应用于全世界的大学、科研院所、政府、制药和生物公司。

2009年，东胜创新成为DNR公司生产的凝胶成像系统全线产品的中国区总代理。三年多以来，经过东胜人的不懈努力，我们在全国范围内取得了良好的销量。同时，DNR凝胶成像系统凭借优异的质量和出色的表现，得到了新老用户的一致认可，成为广大科研工作者的良好伙伴。

其中，特别是MicroChemi化学发光凝胶成像受到众多用户好评如潮 如：中科院微生物所（已推荐并完成动物所老师的购买）

华中科技大学同济医学院（购三台MicroChemi），完成多篇SCI的文章发表

中科院遗传与发育生物学研究所、吉林大学、中国医科大学、东北师范大学、东北农业大学、北京康为世纪生物科技有

Microchemi -荧光素酶的检测

前言

一 生物发光 二 荧光素酶

三 荧光素酶报告基因 四 荧光素酶的检测方法

五 利用MicroChemi检测植物叶片中的荧光素酶生物发光

附成功案例1：中国农业大学生命科学学院检测烟草叶片中荧光素酶的发光 附成功案例2：吉林大学植物科学学院（已购买）

前言

以色列DNR生物影像公司成立于1993年，他致力于为科研工作者提供杰出而专业的支持与服务，现在已有超过10,000套的DNR成像系统应用于全世界的大学、科研院所、政府、制药和生物公司。

2009年，东胜创新成为DNR公司生产的凝胶成像系统全线产品的中国区总代理。三年多以来，经过东胜人的不懈努力，我们在全国范围内取得了良好的销量。同时，DNR凝胶成像系统凭借优异的质量和出色的表现，得到了新老用户的一致认可，成为广大科研工作者的良好伙伴。

其中，特别是MicroChemi化学发光凝胶成像受到众多用户好评如潮 如：中科院微生物所（已推荐并完成动物所老师的购买）

华中科技大学同济医学院（购三台MicroChemi），完成多篇SCI的文章发表

中科院遗传与发育生物学研究所、吉林大学、中国医科大学、东北师范大学、东北农业大学、北京康为世纪生物科技有

双荧光素酶报告基因分析

1. 介绍

荧光素酶报告基因表达的转录调控常被用来研究培养细胞的生物学特性。荧光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性荧光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的荧光素酶。

Dual-Luciferase?双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通常，报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响，共转染的“对照”报告基因会作为内对照，为试验提供一基准线。实验报告基因经过内参照的处理可以减小细胞活性和转染效率对实验的影响，因此双报告系统减少了外部干扰，使得实验数据更可信。实验中报告基因和对照基因的酶没有种源同源性，萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶对应不同的反应底物，反应中没有任何的交叉干扰。

萤火虫荧光素酶底物和海肾荧光素酶底物分别与检测试剂反应可以使灵敏度最大化。由于超强的光信号和超高的信噪比，本系统被广泛用于制药和生物技术产业中。双荧光素酶报告基因检测系统适配于各种培养哺乳细胞的培养基，如1640，MEM，DMEM，F12等。这些试剂与被动裂解液所附带的试剂盒，可以从Promega试剂盒中分开，单独使用。

具有超高灵敏度和超宽线性范围的Veritas?微孔板发光检测仪特别适合DLR 报告

1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

补充实验 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量

一、实验目的

1、 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理

2、 掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

二、实验原理

某些物质被某种波长的光（如紫外光）照射后，会在极短时间内，发射出较入射光波长为长的光，这种光称为荧光。吸收什么波长范围的光和发射什么波长范围的光，这与被照射的物质有关。而所发射的荧光的强度与该物质的浓度有如下关系：

-alc If=KфI0（1-e）

式中：If为荧光强度；K为仪器常数；ф为荧光物质的荧光量子产率；I0为入射光

-1强度；l为样品池厚度；c为荧光物质的浓度（mol l）；a为荧光物质的摩尔吸光系数。

当溶液浓度较稀时，则If=KфI0alc

可见，在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。

维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为

核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

核黄素B2在230～490nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526nm

西安立科环保科技有限公司 水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍

一、 检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

三、 优势特点：

酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少

西安立科环保科技有限公司 水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍

一、 检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。

三、 优势特点：

酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少

荧光光度分析法测定维生素B2的含量

引言

荧光分光光度法简介

有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。

由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】

1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】

在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：

IF?2.303?I0?bc

当实验条

实验六 荧光光度法测定样品中维生素B2的含量

一、目的与要求

1． 掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理; 2． 加深对荧光光度法原理的理解; 3． 巩固荧光光度计的基本操作。 二、方法原理

维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：

F = Kc

故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。 三、仪器与试剂

1．930型荧光光度计及其附件。 2．容量瓶：25 mL。

3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。

4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。

5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。

四、内容与步骤 1．标准系列溶液的配制

吸取维生素B2

荧光探针的种类、研究热点与研究进展

19920102203495 宋菊平

【摘要】： 荧光探针在化学传感、光学材料及生物检测和识别等领域得到了广泛的应用，并成为实现上述功能的一种主要的技术手段。最近，无机发光量子点、荧光聚合物纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子等荧光纳米探针的相继出现，为生物分析提供了新的发展领域，成为了近年来研究的热点。而一些传统的探针，也得到了一下新的改进与发展。荧光探针在生物医学光子学领域正呈现一片欣欣向荣的场面。

【关键词】：荧光探针；量子点荧光探针；纳米荧光探针；小分子荧光探针；双光子金属离子荧光探针；硫醇类探针；

（一） 荧光探针的种类

按照荧光探针制作方式，可分为化学荧光探针和基因荧光探针。其中化学荧光探针是由化学方法合成的，而基因荧光探针是由可遗传、由DNA编码、蛋白质组成的。按荧光波长可分为发射在紫外可见区的荧光探针和近红外区的荧光探针。按荧光探针用途不同可分为荧光标记试剂(fluorescent) 和荧光生成试剂(nuorlgenic)。按荧光探针物质本身的性质又可分为有机(包括稀土金属有机配合物) 荧光探针、量子点荧光探针、高分子荧光探针等

按照荧光探针功能来分，可分为细胞活性探针；细胞器探针；膜荧光探