聚合酶链式反应技术名词解释

聚合酶链式反应技术

关键词：核酸标记

通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法：

1.应用同位素（或非同位素）标记的cDNA探针，检测经Northern blot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。

2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交，然后进行放射自显影。

3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA，用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应（PCR）扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。

核酸扩增检测技术的研究进展

(作者 傅占江 来源 摘自：《国外医学临床生化学与检验学分册》)

聚合酶链式反应技术（PCR）自1985年问世以来，以其灵敏性、特异性和快速性在医学和分子生物等领域得到广泛的应用，由此可见核酸扩增技术的重要性。近年来随着分子生物学的飞速发展以及生物物理技术的大量应用，新的核酸扩增模式也不断涌现。已经建立起来的方法大体可分为两大类，靶核酸的直接扩增与信号放大扩增。前者包括聚合酶链式反应（PCR）、链替代扩增（SDA）、连接酶链式反应（LCR）和依赖核酸序列的扩增（NASBA）等，这些方法都具有很高的灵敏度。信号放大

聚合酶链式反应技术

关键词：核酸标记

通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法：

1.应用同位素（或非同位素）标记的cDNA探针，检测经Northern blot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。

2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交，然后进行放射自显影。

3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA，用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应（PCR）扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。

核酸扩增检测技术的研究进展

(作者 傅占江 来源 摘自：《国外医学临床生化学与检验学分册》)

聚合酶链式反应技术（PCR）自1985年问世以来，以其灵敏性、特异性和快速性在医学和分子生物等领域得到广泛的应用，由此可见核酸扩增技术的重要性。近年来随着分子生物学的飞速发展以及生物物理技术的大量应用，新的核酸扩增模式也不断涌现。已经建立起来的方法大体可分为两大类，靶核酸的直接扩增与信号放大扩增。前者包括聚合酶链式反应（PCR）、链替代扩增（SDA）、连接酶链式反应（LCR）和依赖核酸序列的扩增（NASBA）等，这些方法都具有很高的灵敏度。信号放大

一、实验目的

通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验 技术。

二、实验原理聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) :是体外酶促合成DNA 片段的一种技术。利用PCR技术可在数小时 之内大量扩增目的基因或DNA片段，以用 于基因工程操作。

PCR的原理：用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段，

类似于天然DNA的复制过程。以拟扩增的DNA分子为模板，用一对与待扩增 的靶DNA区段两端序列互补的人工合成的寡核苷酸 片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留 复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的 DNA合成， 重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

基本反应步骤分三步： 1. 变性 (Denaturation): 加热使模板DNA在高温下变性，双链间 的氢键断裂而形成两条单链。 2. 退火 (复性) (Annealling):

使溶液温度降至50-60℃,模板DNA与 引物按碱基配对原则互补结合。

3. 延伸 (Extension):溶液反应温度升至72 ℃ ,以单链DNA为模板， 在DNA聚合酶的作用下、利用4种 dNTPs 等，从引物 的 3′ 端开始，结合单核苷酸，按5 ′ 向形成与模板链互补的新DNA

关于酶学

第27卷第6期

Vol127　No16长春师范学院学报(自然科学版)JournalofChangchunNormalUniversity(NaturalScience)2008年12月Dec.2008

应用于PCR技术的DNA聚合酶

盛艳敏,杨燕平,吴英杰,王倩倩

(长春师范学院生命科学学院,吉林长春　130032)

[摘　要]DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的

作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善

其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研

究历史及现状进行简要综述。

[关键词]PCR;DNA聚合酶;酶学特性

[中图分类号]Q94615　　　[文献标识码]A　　　[文章编号]1008-178X(2008)06-0067-04

　　聚合酶链式反应(PCR)是一种体外快速扩增特定DNA片段的技术,是在由DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液等组成的反应混合物中,由DNA聚合酶催化,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增的反应。在此过程中,DNA聚合酶起着关键性作用,所以自PCR技术产生至今,人们一直在通

摘 要

哺乳动物DNA聚合酶Pol δ，是一个由四亚基组成的复合物，四个亚基分别是p125、p50、p68和p12。它不但在真核生物DNA复制过程中起着重要的作用，而且也参与DNA的修复和基因重组。在维持细胞周期的正常调节以保证基因组结构的完整性和遗传的稳定性等方面具有特殊的重要意义。

DNA在细胞内外各种因素的作用下可产生严重的损伤，破坏了基因组的完整性。为了应对复制压力或基因损伤试剂造成的DNA损伤，细胞自身拥有一套防御机制─DNA损伤应答（DDR）。这一机制通过募集和装备一系列与修复相关的蛋白复合物来协调整个应答网络系统，包括DNA修复、细胞周期检查点的激活以及细胞的凋亡等。目前普遍认为DDR是一个复杂的过程，它能够使DNA进行修复，固定损伤突变的位置或者通过细胞的死亡来消除损伤。就像Derks等提到的，传感蛋白检测到DNA损伤，并将一系列的相关因子招募到损伤点。例如，修复因子等。相应的，这些感受器扩大对效应器的损伤信号，如p53和微小RNA，它们能够控制细胞多种通路的活性，如细胞周期的停滞和凋亡。传感器和DDR信号的转导主要依赖于蛋白质和蛋白质的相互作用以及蛋白质翻译后的修饰。转录组学、全基因组RNA转录表达水平和蛋白质组学的研究极大

RNA聚合酶是否有解旋的作用？

看2013年浙江省高考题

3．某生物基因表达过程如图所示。下列叙述与该图相符的是 A．在RNA聚合酶作用下DNA双螺旋解开 B．DNA-RNA杂交区域中A应与T配对 C．mRNA翻译只能得到一条肽链 D．该过程发生在真核细胞中

【答案】：A

说明RNA聚合酶有解旋作用

浙科版上有该知识点

这个问题对不同的生物来说不一样，原核生物RNA聚合酶有解旋作用，而对真核生物来说，转录的时候是需要RNA聚合酶和解旋酶一起来发挥解旋作用的。

应该是在转录的过程中，始终没有提到DNA的解旋酶，虽然说酶具有专一性，但是专一性是可以一类的，我问过一些老教师，他们说RNA聚合酶本身有解旋的作用，看到的资料书中，也没有说用DNA解旋酶的。 ...

不同的生物具体情况不同！这是个有争议的话题！也有的书上说，RNA聚合酶属于解旋酶的一种！也有的说RNA聚合酶只能打开起始一段DNA双链，之后需要解旋酶辅助解旋！建议人教版的同学不要再纠结了！个人认为正规考试不会考！仅供参考！

解旋酶一词是在人教版必修一第三章第三节中提出的：“在DNA复制开始时，DNA分子首先利用细胞提供的能力，在解旋酶的作用下，把两条螺旋的DNA链解

本文对553例男性泌尿生殖道炎患者用聚合酶链反应(PcR)技术进行沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、淋球菌(NG)的检测,阳性率分别为11.4%、30.8%、35.6%.同时,我们对高度怀疑为淋病患者111例及95例非淋病性尿道炎患者同时进行细菌培养和PCR检测,淋病患者细菌培养阳性检测率为30.6%,与06—08年间所进行的培养检测结果基本一致,均低于PCR检测结果(77.4%),

21 0 0年 5月上第 2卷第 9期Ma v 2 0 01 Vd. 2 No9 .

一

中国中医药咨讯 1 9 8

Ju n l f iaT a i olI ieeMe iieIfr o r a n rdf r n s dcn nommin o Ch i a Ch o

三种性病男性患者聚合酶链反应 ( C ) P R检测结果分析杨良妹

(广东惠州市惠阳区妇幼保健院，广东

惠州，10 1 560 )

【摘要】本文对 5 3 5例男性泌尿生殖道炎患者用聚合酶链反应( R技术进行沙眼衣原体(r、支原体(u、 P ) C c) r解脲 u )淋球菌(G的检测， N)阳性率分别为 l.%、08 3 .%. 1 4 3.%、56同时，我们对高度怀疑为淋病患者 l l 1

药合名词解释和重要反应（广医药学）

一、名词解释

1、靶分子：(Target Molecule):就合成设计而言，凡是所需合成的有机分子均可成为“靶分子”，或者是最终产物，或者是有机合成中的某一个中间体。

2、合成子(Synthons): 反合成分析时，目标分子切割成的片段(Piece)叫合成子 3、逆合成分析：也称为反合成分析，即由靶分子出发，用你想切断、连接、重排和官能团互换、添加、除去等方法，将其变换成若干中间产物或原料，然后重复上述分析，直到中间体变换成所有价廉易得的和橙子等价试剂为止。 4、化学选择性：取决于不同官能团的反应差异。

区域选择性：取决于活性基团周围不同位置的反应性差异。 5、立体选择性：涉及产物分子的相对或绝对立体化学问题。 6、逆向切断（dis）：用切断化学键的方法把靶分子骨架剖析城不同性质的合成子，成为逆向切断。

7、逆向官能团转化（con）：在不改变靶分子基本骨架的前提下变换官能团的性质或所处位置的方法，包括逆向官能团转换（FGI）、逆向官能团添加（FGA）和逆向官能团除去（FGR）。

8、等价物(Equivalent)：与合成子相对应的化合物。 9、切断（disconnection）：目标化合物剖析的一种处理

RNA聚合酶是否有解旋的作用？

看2013年浙江省高考题

3．某生物基因表达过程如图所示。下列叙述与该图相符的是 A．在RNA聚合酶作用下DNA双螺旋解开 B．DNA-RNA杂交区域中A应与T配对 C．mRNA翻译只能得到一条肽链 D．该过程发生在真核细胞中

【答案】：A

说明RNA聚合酶有解旋作用

浙科版上有该知识点

这个问题对不同的生物来说不一样，原核生物RNA聚合酶有解旋作用，而对真核生物来说，转录的时候是需要RNA聚合酶和解旋酶一起来发挥解旋作用的。

应该是在转录的过程中，始终没有提到DNA的解旋酶，虽然说酶具有专一性，但是专一性是可以一类的，我问过一些老教师，他们说RNA聚合酶本身有解旋的作用，看到的资料书中，也没有说用DNA解旋酶的。 ...

不同的生物具体情况不同！这是个有争议的话题！也有的书上说，RNA聚合酶属于解旋酶的一种！也有的说RNA聚合酶只能打开起始一段DNA双链，之后需要解旋酶辅助解旋！建议人教版的同学不要再纠结了！个人认为正规考试不会考！仅供参考！

解旋酶一词是在人教版必修一第三章第三节中提出的：“在DNA复制开始时，DNA分子首先利用细胞提供的能力，在解旋酶的作用下，把两条螺旋的DNA链解

本文对553例男性泌尿生殖道炎患者用聚合酶链反应(PcR)技术进行沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、淋球菌(NG)的检测,阳性率分别为11.4%、30.8%、35.6%.同时,我们对高度怀疑为淋病患者111例及95例非淋病性尿道炎患者同时进行细菌培养和PCR检测,淋病患者细菌培养阳性检测率为30.6%,与06—08年间所进行的培养检测结果基本一致,均低于PCR检测结果(77.4%),

21 0 0年 5月上第 2卷第 9期Ma v 2 0 01 Vd. 2 No9 .

一

中国中医药咨讯 1 9 8

Ju n l f iaT a i olI ieeMe iieIfr o r a n rdf r n s dcn nommin o Ch i a Ch o

三种性病男性患者聚合酶链反应 ( C ) P R检测结果分析杨良妹

(广东惠州市惠阳区妇幼保健院，广东

惠州，10 1 560 )

【摘要】本文对 5 3 5例男性泌尿生殖道炎患者用聚合酶链反应( R技术进行沙眼衣原体(r、支原体(u、 P ) C c) r解脲 u )淋球菌(G的检测， N)阳性率分别为 l.%、08 3 .%. 1 4 3.%、56同时，我们对高度怀疑为淋病患者 l l 1