biolog菌种鉴定

篇一：菌种鉴定

中国工业微生物菌种保藏管理中心

CICC是我国唯一的国家级工业微生物菌种保藏管理中心，有近三十年菌种分类鉴定的历史，拥有先进的生物科学仪器和从事分类鉴定的专业化人员队伍。CICC承担全国工业微生物菌种的委托鉴定工作，所提供的菌种鉴定与评价技术服务获得“国家工商总局（SCIC）经营许可”，为国内科研机构、大专院校和生产企业等提供微生物菌种鉴定服务，涉及细菌、酵母、放线菌和丝状真菌等多类微生物。菌种鉴定手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定、 BIOLOG碳源自动分析鉴定、分子生物学鉴定、API细菌数值鉴定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄层层析、全细胞脂肪酸分析鉴定、（G＋C）mol％测定、DNA/DNA同源性测定等。

鉴定项目

序号 服务项目 菌种类别

1 纯菌种鉴定（包含形态、理化、分子） 细菌、酵母、放线菌、丝状真菌 2 功能基因鉴定（pheS、gryA、atpD等） 乳杆菌、芽胞杆菌、双歧杆菌 3 产品微生物解析 ――

4 产品污染菌种鉴定 ――

5 菌群分析及纯种分离 ――

6 细胞壁化学组分分析（氨基酸） 细菌、放线菌

7 细胞壁化学组分分析（糖） 细菌、放线菌

8 DNA（G+C ）mol％含量 细菌、放线菌

9 DNA

菌种鉴定实验过程

一、仪器与试剂 1、仪器 仪器名称 测序仪 DNA电泳槽 稳压电泳仪 电热恒温水槽 凝胶成像仪 恒温培养箱 恒温摇床 PCR仪 冷冻高速离心机 Surf系列精密单道可调移液器 1. 试剂 试剂名称 Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒 Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒 Ezup柱式酵母基因组DNA抽提试剂盒 DreamTaq-TM DNA Polymerase 仪器来源 Applied Biosystems 北京六一仪器厂 北京六一仪器厂 上海一恒科学仪器有限公司 上海复日科技仪器有限公司 太仓市科教器材厂 太仓市实验设备厂 Applied Biosystems BBI 生工 试剂来源 生工 生工 生工 MBI 生工 BBI 生工 生工 生工 生工 Takara 生工 型号 3730XL DYCP-31DN DYY-5 DK-8D FR980 DHP-9162 TH2-C 2720 thermal cycler HC-2518R SP10-1000 cat. No. SK8255 SK8259 SK8257 EP0702 D0056 AB0014 SK8131 SM0337 合成部合成 铸塑部生产 D101A SK

1. Biolog生态板的应用原理

Biolog ECO板上有32个微孔，每32个孔为1个重复，每板共计3个重复。32个微孔中除对照孔外各个孔中都含有一种不同的有机碳源和相同含量的四唑紫燃料。将微孔内的有机碳源作为微生物的唯一能量来源，微生物接种到微孔板的孔中后，若能利用碳源，即能够对其进行生物氧化，有电子转移，四唑紫燃料就能优先俘获电子而变成紫色。颜色的深浅反映了微生物对相对碳源的利用能力。通过Biolog系统的微平板读数器，测定ECO板在590nm波长下的光密度值（OD值），完成数据的采集与存储。运用主成分分析（PCA）或相似类型的多变量统计分析方法展示不同处理条件下微生物群落产生的代谢特征指纹。其理论依据是Biolog代谢类型的变化与群落组成的变化相关。

2. Biolog测定方法

（1）称取相当于10.0g干土的新鲜土壤放入三角瓶中，加入90ml灭菌的生理盐水（0.85% NaCl， W/V），用无菌棉花塞封口。

（2）震荡30min后，静置15min，用移液枪吸取10ml上清液，加入90ml灭菌生理盐水。 （3）按逐步稀释法，将土壤悬液稀释为10-3g/ml。

（4）在超净工作台中用移液器将制备好的土壤悬液接种到BIOLOG ECO

开菲尔中菌种分离与鉴定方法初探　

夏菠，周传云，张庆，罗阳，唐淑芬　

（湖南农业大学食品科技学院

开菲尔乳是由数种乳酸菌及酵母菌共同发酵而得

依据其个体特征分别为

关键词

分离

筛选出３支菌株

肠球菌属假鸟肠球菌种

即开菲尔乳酵母菌

确定此３支菌

Ｌｕｏ　Ｙａｎｇ

College of Food Science and Technology of Hunan Agriculture University , Changsha 410128, China

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[1]

棕色1.5%

搁成直立柱

Ｎａ2S2O3 0.5g

pH7.4

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用16S rDNA方法鉴定细菌种属

一、实验目的

1. 掌握16S rDNA对细菌进行分类的原理及方法；

2. 掌握DNA提取、PCR原理及方法、DNA片段回收等实验操作。

二、实验原理

细菌rRNA（核糖体RNA）按沉降系数分为3种，分别为5S、16S和23S rRNA。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中。

16SrDNA鉴定是指用利用细菌16SrDNA序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。是一种快速获得细菌种属信息的方法。

16S rDNA是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分子钟，其种类少，含量大（约占细菌RNA含量的80％），分子大小适中，存在于所有的生物中，其进化具有良好的时钟性质，在结构与功能上具有高度的保守性，素有“细菌化石”之称。在大多数原核生物中rDNA都具有多个拷贝，5S、16S、23S rDNA的拷贝数相同。16S rDNA由于大小适中，约1.5Kb左右，既能体现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列，故被细菌学家和分类学家接受。

16SrR

鲜肉贮藏保鲜过程中腐败菌菌种分离与鉴定

摘要：取临安本地三处主要消费市场购买猪肉糜真空包装冷藏进行发酵，对其导致腐败微生物进行分离，筛选，扩增，鉴定，测序。以便于筛选出导致冷藏真空包装猪肉腐败的优势菌，为保证冷鲜肉品质，减少营养流失，延长货架期提供参考。本实验从真空包装冷藏的猪肉中分离鉴定出7株清酒乳杆菌，7株乳酸乳球菌。

关键词:猪肉; 酵母菌; 乳酸菌; 分离; 鉴定

The isolation and identification of bacteria in the chilled pork

Abstract:isolate: Take Lin'an local three major consumer market to buy pork vacuum packaged frozen fermentation, microorganisms which lead to spoilag were isolated, selection, amplification, identification and sequencing. In order to screen out the strong spoilage bacteria le

工程的调试、运行与管理 第一节 菌种驯育与启动 一、厌氧培菌与启动 1．选取菌种（污泥）

用于厌氧发酵罐启动的厌氧活性污泥叫接种物。沼气发酵过程是多种类微生物共同作用的结果，要注意接种物的产甲烷活性，因为产酸菌繁殖快，而产甲烷菌繁殖很慢，如果接种物中产甲烷菌（活性污泥）数量太少，常常因为在启动过程中酸化与甲烷化速度的过分不平衡而导致启动的失败。

在确定系统运行温度后，要选择同类工程的活性污泥做接种物（菌种）。是否是相同的菌种，或富集菌种的多少，决定系统启动速度的快慢。由于各地具体条件差异，监测手段不同，启动时的操作方式也不会是一个模式，只能是类似。 条件具备的地方，处理同类废水，接种同类污泥，以保持厌氧微生物生态环境的一致。当地不具备这样的条件，需要在驯化上下工夫，启动的时间要长些，速度会慢些。厌氧发酵罐排出的活性污泥和污水沟底正在发泡的活性污泥，都可作为选取接种物的对象。接种量约占发酵容积的1/10~1/3，接种量越多，启动速度越快，在此基础上逐渐富集。 2．菌种的驯化与富集

菌种的驯化富集可在新建的发酵罐内进行，也可在其他的容器内进行。取来的厌氧活性污泥（菌种）越多越好，再加入适量的处理原料（数量小于菌种数量的10%份额）。菌种和原料的混

EcoPlateTM各区井中的碳源

A1空白 Water 水 一区 A2多碳糖 ?-Methyl-D-Glucoside ?-甲基D-葡萄糖苷 B1有机酸 PyruviMethyl Ester 丙酮酸甲脂 C1聚合物 Tween 40 吐温40 C2其他多元醇 I-Erythritol I-赤藻糖醇 B2多碳糖 D-XylD-木糖 A3有机酸 D-Galactoniy-Lactone D-半乳糖内酯 B3有机酸 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 B4氨基酸 L-Asparagine L-天冬酰胺酸 B1 Pyruvic Acid Methyl Ester 丙酮酸甲脂 C3有机酸 2-Hydroxy Benzoic Acid 2-羟苯甲酸 D1聚合物 Tween 80 吐温80 D2其他多元醇 D-Mannitol D-甘露醇 D3有机酸 4-Hydroxy Benzoic Acid 4-羟基苯甲酸 E1聚合物 a-Cyclodextrin a-环式糊精 E2胺 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰基-D-葡萄胺 E3有机酸 y-Hydroxybutyric Acid y-羟基丁酸 E4氨基酸 L-Thr

菌种活化步骤

日期：2007-6-26 18:31:28 点击次数 2519 发布单位：EM 录入：李清

一、安瓿瓶装微生物菌种开封

1-1、用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。 1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。 1-3、用镊子将铝封口撕开。

二、菌株恢复培养

2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振 荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。

2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml），然后在建议的温度下培养。

三、注意事项

3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。

3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充 填，以保持厌氧状态。

3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能 正常生长。

四、制作ＥＭ菌液

4-1、菌种活化:用ＥＭ菌种10克、红糖0.1公斤（红糖先用热水溶化），加入1公斤的水。注：（先把水加热到100°C后加入红塘或白糖，而后继续加热5分钟。冷却到40°C时加入ＥＭ菌种），密闭发酵(35°C-40°C温度)下活化3天，打

有效菌种名:枯草芽孢杆菌,地衣芽孢杆菌,花生根瘤菌,巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、固氮类芽孢杆菌,植物乳杆菌、东方伊萨酵母、甘蔗兰希氏菌、

枯草芽孢杆菌 地衣芽孢杆菌 花生根瘤菌 巨大芽孢杆菌 胶冻样芽孢杆菌 固氮类芽孢杆菌 植物乳杆菌 东方伊萨酵母 甘蔗兰希氏菌 酿酒酵母 侧孢短芽孢杆菌 地衣芽孢杆菌 沼泽红假单胞菌 球形红假单胞菌 酒红土褐链霉菌 乳酸乳球菌 泾阳链霉菌 嗜酸乳杆菌 绿色木霉 戊糖片球菌 粉状毕赤酵母 米根霉 黑曲霉 成团泛菌 弗氏链霉 光孢青霉 大豆根瘤菌 紫云英根瘤菌 解淀粉芽孢杆菌 荧光假单胞菌 绿色木霉 地衣芽孢杆菌 灰螺链霉菌 嗜热脂肪地芽孢杆菌 白色链霉菌、 天青链霉菌、地衣芽孢杆菌、细黄链霉菌、常现青霉、嗜酸乳杆菌 干酪乳杆菌、米曲霉、热带假丝酵母、嗜热毁丝霉、细黄链霉菌、 拟康氏木霉、不吸水链霉菌、淡紫拟青霉、蕈状芽孢杆菌、哈茨木霉、 娄彻氏链霉菌、黑曲霉、产朊假丝酵母